Определение Coli-титра и Coli-индекса воды.

Наиболь­шую опасность представляет фекальное загрязнение воды, так как вместе с фекалиями в воду могут попасть патогенные микробы. Обнаружить микробы в воде трудно ввиду их небольшой концентрации, поэтому в таких случаях прибегают к косвенным показателям. Основным показателем фекального загрязнения яв­ляется кишечная палочка Escherichia co l i – постоянный обитатель кишечника людей и животных. Escherichia co li сохраняется в воде довольно продолжительное время и легко обнаруживается.

Степень загрязнения воды определяется Coli-титром или Coli-индексом. Coli-титр показывает наименьшее количество во­ды, в котором при посеве обнаруживается, хотя бы одна кишеч­ная палочка; Coli-индекс – число кишечных палочек в 1 л воды. Для перевода Coli-титра в Coli-индекс 1000 делят на показатель Coli-титра. Для перевода Coli-индекса в Coli-титр 1000 делят на число, выражающее Coli-индекс.

Для определения Coli-титра пользуются методами бро­дильных проб и мембранных фильтров. Они основаны на том, что кишечная палочка размножается при температуре 43-45 °С, в то время как рост большинства водных бактерий при этой темпера­туре задерживается. Во время роста кишечная палочка сбражива­ет разные углеводы в питательных средах. При определении Coli-титра берут разные объемы засе­ваемой воды (в зависимости от источника водоснабжения). Водопроводную воду засевают в количестве 300 мл (два объема по 100 мл и десять объемов по 10 мл)/

При засеве воды открытых водоемов взятый объем зави­сит от степени предполагаемого загрязнения. При средней за­грязненности водоема для посева берут 100 мл (первый объем), 10 мл (второй объем), 1 мл (третий объем) и 0,1 мл (четвертый объем). Из загрязненных водоемов - соответственно 1; 0,1; 0,01 и 0,001 мл. Засевают на среду Булижа с поплавками. Соотноше­ние среды и засеваемой воды 1: 2. Малые количества воды засевают на неконцентрированную среду Булижа в пробирках. Посевы выращивают в термостатах при температуре 43 °С в течение 24-48 ч. Затем отмечают изменение цвета среды, наличие или отсутствие газа и мути. Если среда не изменилась, кишечная палочка в пробе отсутствует, исследование прекращают.

Из пробирок с мутью, газом и тех, где среда Булижа имеет соломенно-желтый цвет, производят посев на среду Эндо. Выра­щивают микроорганизмы при температуре 37 °С и в течение 18-24 ч. При наличии красных с металлическим блеском или розовых, выпуклых слизистых колоний из них готовят мазки и красят по Граму для обнаружения коротких грамотрицательных палочек. Если таковые обнаружены, производят вторичный посев из по­дозрительных колоний со среды Эндо на среду Булижа, разве­денную в отношении 1:10 и разлитую по 5 мл в пробирки.

Посевы выращивают в термостате в течение суток при тем­пературе 37 °С. После этого, дают заключение о степени загряз­ненности воды кишечной палочкой. Данные анализов, выраженные в виде Coli-титра и Coli-индекса сравнивают с данными таблиц 2 и 3.

 

Таблица 2 – Результаты анализов

Количество объемов по 10 мл	Количество объемов колодезной и водопроводной по 100 мл
	1		2		3
	Coli-титр, более	Coli-индекс, менее	Coli-титр	Coli-индекс	Coli-титр	Coli-индекс
0	333	3	250	4	91	11
1	333	3	125	8	56	18
2	143	7	77	13	37	27
3	91	11	57	18	26	38
4	71	14	42	24	19	52
5	56	18	33	30	14	70
6	45	22	28	36	11	92
7	37	27	23	43		120
8	32	31	20	51	6	161
9	28	36	17	60	4	230
10	25	40	14	89	менее 4	более 230

Примечание. При второй бродильной пробе наблюдается газообразование и муть в 1 объеме (по 100 мл) и в 5 пробирках (по 10 мл). Находим по вертикали 1, по горизонтали 5 и на пересечении отмечаем значения; Coli-титр – 56 и Coli-индекс – 18.

 

Для определения Coli-индекса пользуются ускоренным методом с помощью мембранных ультрафильтров (кружков диа­метром 3,5 см), которые выпускаются под пятью номерами. Чем больше размеры пор, чем выше его номер и быстрее идет фильтрация. Для санитарно-бактериологического исследова­ния воды наиболее пригоден ультрафильтр № 3.

 

Таблица 3 – Количество воды для анализов

Объем исследуемой воды открытых водоемов, рек, озер, мл				Coli-титр	Coli-индекс
100	10	1,0	0,1
1	2	3	4	5	6
-	-	-	-	Более 111	Менее 9
-	-	-	+	111	9
-	-	+	-	111	9
-	+	-	-	105	9,5
-	-	+	+	56	18
-	+	-	+	53	19
-	+	-	+	46	22
+	-	-	-	43	23
-	+	+	+	36	28
+	-	-	+	11	92
+	-	+	-	10	94
+	-	+	+	6	180
+	+	-	-	4	230
+	+	-	+	1	960
+	+	+	-	0,4	2380
+	+	+	+	менее 0,4	более 2380

Примечания: 1.«+» кишечная палочка выделена; «-» – не выделена. Воду для питьевых и хозяйственных нужд можно использовать при следующих показателях: общее количество микробов должно быть не более 100 в 1 мл; Coli-титр – не менее 333, Coli-индекс – 3; 2. Вода из артезианских скважин, поступающая в водопроводную систему без очистки и дезинфекции, должна иметь Coli-титр не менее 500, Coli-индекс – не более 2. Воду открытых водоемов можно считать доб­рокачественной при Coli-титре не менее 111 и Coli-индексе – 9.

 

Матовая сторона ультрафильтра называется воздушной. При фильтрации и засеве матовая сторона должна быть обраще­на вверх, а обратная (блестящая) – вниз, соприкасаясь с пита­тельной средой. Через мембранные ультрафильтры, используя приборы Рублевского или Зейтца, фильтруют соответствующий объем воды.

Перед фильтрованием мембранные фильтры кипятят 10-15 мин в дистиллированной воде, медленно нагревая и не допуская бурного кипения. Фильтровальный прибор стерилизуют обжиганием, автоклавированием или кипячением. Аппарат охлаждают, на сетку помещают стерилизованный кружок фильтровальной бумаги, смоченный стерильной водой, а затем стерильный ультрафильтр (бумагу используют для предо­хранения ультрафильтра от повреждения).

По окончании фильтрования стерильным пинцетом на­кладывают мембранные фильтры в чашки на среду Эндо. После суточного роста в термостате при температуре 43 °С из характер­ных для кишечной палочки колоний делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и засевают в пробирки с глюкозопептонной водой или средой Булижа с поплавком. Выдерживают по­севы при 43 °С в течение суток. Характерный рост является дока­зательством наличия кишечной палочки. Морфологические и культуральные свойства кишечной группы бактерий определяют­ся стандартным способом.

 

Вопросы для обсуждения.

1 Какие данные необходимо указывать в сопроводительном документе к пробам воды?

2 Назовите допустимые показатели содержания в воде Со1i-титра и Со1i-индекса.

3 Почему сроки исследования проб воды ограничены 2-6 часами?

4 При какой температуре необходимо культивировать Escherichia co l i и с чем это связано?

5 Как связаны между собой показатели Со1i-титра и Со1i-индекса?

6 Чем определяется выбор объема засеваемой воды, взятый из различных источников?

7 Почему определение Со1i-титра и Со1i-индекса так широко используется при проведении бактериологического анализа воды? Является ли наличие Escherichia co l i объективным показателем биологического загрязнения воды?