Наиболее распространенный в микробиологической практике метод основан на том, что при нанесении микроорганизмов из посевного материала на твердую среду отдельные клетки будут закрепляться (иммобилизоваться) в определенной точке твердой среды и, размножаясь, давать потомство (клон), представляющее чистую культуру микроорганизма.
Для получения изолированных колоний на твердой среде на поверхность твердой питательной среды исследуемый материал высевают, каплю его наносят петлей или пипеткой.
Рассев проводят либо методом истощающего мазка, либо методом истощающего штриха.
В первом случае шпателем равномерно распределяют нанесенную каплю по поверхности твердой среды. Тем же шпателем делают посев на поверхности второй пластинки и затем третьей, т. е. переносят последовательно на твердую среду клетки микроорганизмов, которые остались на шпателе.
Таким образом, количество микроорганизмов, вносимых последовательно на пластинки, будет уменьшаться: на вторую пластинку - меньше, чем на первую; на третью - еще меньше, чем на вторую, и т. д.
При использовании метода истощающего штриха исследуемый материал наносят петлей в верхнюю часть твердой среды в чашке Петри и аккуратно, зигзагообразно петлей по поверхности чашки. Затем посев проводят аналогично на второй и третьей чашках.
После посева чашки необходимо перевернуть вверх дном и поставить в термостат при температуре, благоприятной для данного микроорганизма. Инкубируют посевы обычно в термостате в течение 2-3 дней. В результате на поверхности среды вырастают колонии микроорганизмов. Выросшие колонии сначала рассматривают невооруженным глазом, а затем при помощи лупы или при малом увеличении микроскопа.
а 
б 
Рисунок 19 – а – метод посева зигзагообразной петлей; б – метод посева истощающего штриха
Может наноситься серия штрихов (рисунок 20). При этом, проводя на поверхности среды штрихи, после каждой серии чашку немного поворачивают, так чтобы в каждой новой серии распределялись бактерии из предыдущей серии штрихов, истощая, таким образом, штрихи до отдельных бактерий.
С помощью этого метода можно выделять бактерии из естественных мест обитания, например из почвы, молока, воды. Образцы твердых субстанций, таких как почва, лучше суспендировать в небольшом количестве воды, либо предварительно проинкубировать в жидкой среде. Безопасным источником для рутинной работы является пастеризованное молоко. Перед тем как проводить эксперименты с бактериями или грибами, следует ознакомиться с инструкциями и правилами безопасности, чтобы снизить до минимума риск культивирования вредных организмов.
Из отобранных колоний готовят препараты, микроскопируют их (рассматривают под микроскопом) для проверки морфологической однородности клеток. Рассматривают препараты с объективом ×90 при максимальном освещении. При приготовлении препаратов необходимо соблюдать все правила стерильности (не открывать широко крышку чашки, хорошо стерилизовать петлю).
Рисунок 20 – Каждая линия обозначает один штрих проволочной петлей
