Методы выявления противогистаминной активности в большинстве своем основаны на демонстрации прямого антагонизма к гистамину.
Влияние на токсичность гистамина. Опыты проводятся на морских свинках весом 200-300 г (10 животных в группе). Раствор противогистаминного препарата вводят одновременно с гистамином в троекратной LD50 (приблизительно 0,66 мг/кг). Контрольная группа животных получает только гистамин, вызывающий гибель животных в течение 5 мин. Через 6 мин после совместного введения препарата и гистамина регистрируют процент погибших животных. Для подсчета LD50 можно использовать метод Миллера и Тэйнтера (1944). Изучают три или четыре дозы с логарифмическим интервалом 0,3. Инъекцию комбинированного раствора производят со скоростью 0,05-0,1 мл/с.. Максимально допустимый объем равен 7 мл. Раствор вводят в краевую вену уха. ED50 для аминазина, димедрола и перновина равны соответственно 0,340, 0,239 и 0,0605 мг/кг.
В других исследованиях противогистаминные средства вводят в яремную вену интактных морских свинок (Preziosi, 1958). Для фиксации животных помещают в специально моделированную колодку или деревянный бокс. Через 5 мин после введения исследуемого вещества внутривенно вводят гистамин по 0,5 мг каждые 5 мин до гибели животных. Показателем противогистаминного действия служит повышение смертельной дозы гистамина (числа инъекций).
Аэрозоль гистамина. Морскую свинку помещают в герметичный бокс, куда вводят аэрозоль гистамина с помощью компрессора. Животные, подвергающиеся действию аэрозоля, обнаруживают прогрессирующее затруднение дыхания, судороги и смерть. При наблюдении эмпирически установлено, что время до наступления судорог довольно постоянно, если одно и то же животное не использовать часто. Как только возникает преконвульсивное дыхание, животных извлекают из камеры. Превентивный эффект высчитывают по формуле (1—T1T2)×100 (T1 — средний латентный период действия, определяемый в контроле за два дня до и после исследования препарата; Т2 — средний латентный период действия в случае введения испытуемого вещества). Вводимый в камеру аэрозоль содержал 2% гистамина.
Помимо использования в качестве теста скрытого времени действия гистамина на дыхание, учитывают предупреждение вызываемого гистамином угнетения рефлексов положения (Stone е. а., 1961) и коллапса (Lish е. а., 1960). Свинки наиболее пригодны для скриннинга противогистаминных веществ, вследствие их высокой чувствительности к гистамину, но при необходимости проведения испытаний на другом виде животных опыты можно поставить на кроликах. При воспроизведении «микрошока» по методу Herxheimer (1952) кроликов подвергают действию аэрозоля 0,2% основания гистамина. Первый признак действия гистамина — усиление дыхательных движений брюшной стенки, затем движения становятся более резкими с последующим замедлением и переходом дыхания в поверхностное. В последнем случае все мышцы тела принимают участие в дыхательных движениях, наиболее характерными для этого периода являются быстрые движения головы вперед и назад. На этой стадии животное извлекают из камеры. Последующие симптомы отравления выражаются в заглатывании воздуха, судорогах, полиурии, цианозе. При последующих повторных испытаниях время реакции удлиняется в результате десенсибилизации животных. Если интервал между испытаниями составляет 8 или более дней, время наступления предсудорожного состояния не изменяется. Для измерения эффективности защитного действия исследуемых веществ может быть использована формула, указанная выше.
Анафилактический шок. Противогистаминные вещества можно испытывать при некоторых анафилактических состояниях, связанных с высвобождением эндогенного гистамина. Морские свинки получают подкожно яичный альбумин. Через 3 недели у животных при вдыхании 5% аэрозоля альбумина развиваются резкие расстройства дыхания. Если морских свинок в этот момент не удалить из камеры, то все они погибнут. Время от начала экспозиции до тяжелого диспноэ служит мерой тяжести шока. Если симптомы шока не развиваются через 6 минут, считается, что шок предупрежден. Степень защитного действия (Р) высчитывают по формуле Р=(1—С/Т) ×100, где латентный период у контрольных и подопытных крыс обозначен через С и Т соответственно. После контрольной экспозиции морских свинок используют в опыте через 4-7 дней и затем снова ставится контроль. Животных с продолжительностью латентной фазы развития эффекта менее 40 и более 165 с из опыта исключают.
Кроме указанных методов, противогистаминная активность может быть установлена на изолированных гладких мышцах кишечника морской свинки. У наркотизированных собак и кошек гистамин вызывает падение артериального давления, которое можно предупредить предварительным введением противогистаминных средств. Preziosi (1958) использовал для этого теста кроликов. Для измерения артериального давления канюлировали сонную артерию. Затем в подчелюстную вену вводили гистамин в дозах 0,03, 0,05 и 0,10 мг/кг. Реакция регистрировалась на кимографе. Затем действие гистамина исследовали на фоне влияния изучаемого вещества. Уменьшение ответной реакции на гистамин указывало на противогистаминную активность исследуемого препарата, а степень торможения реакции различными дозами позволяла оценивать интенсивность действия вещества количественно.
Исследование противогистаминной активности по тесту торможения действия гистамина на проницаемость сосудов и ряд других дополнительных методик скриннинга противогистаминных веществ довольно подробно представлены в посвященном этому вопросу обзоре Jabachnick с соавторами (1964).
Бронходилататоры
Выделение методик первичного фармакологического исследования бронходилататоров в специальный раздел весьма условно, так как вещества этого типа относятся к адренопозитивным и холинолитическим препаратам, противогистаминным средствам и вазодилататорам миотропного действия и ряду других фармакологических групп веществ.
Однако в связи с большой практической значимостью этих средств и общностью методик выявления их активности представляется целесообразным описание методов первичного фармакологического обследования в одной главе.
Трахея морской свинки. Использование трахеи для изучения бронхорасширяющей активности весьма удобно, так как она дает адекватные реакции на воздействие спазмогенных и спазмолитических средств.
Взрослых морских свинок забивают ударом по голове. Экстирпируют трахею и рассекают ее на 12 колец одинаковой ширины. Кольца увлажняют раствором Рингера и фиксируют короткой петлей из шелковой нити. Цепочку колец взвешивают в тканевой ванночке, заполненной раствором ван Дейка-Хастингса. Состав раствора (в миллимолях на 1 л): натрия 144, калия 6,2, магния 1, кальция 0,53, хрома 122, углекислого газа 30, одно- и двузамещенных фосфатов по 1 каждый и 0,05 г глюкозы. Раствор насыщается карбогеном под слоем жидкого вазелина при 37,5°. Регистрирующий рычаг с 12-кратным усилением амплитуды должен иметь очень слабую статическую нагрузку. При изучении спазмолитических эффектов вещество исследуют при изолированном воздействии, а затем после отмывания — на фоне действия спазмогенного агента. В качестве последних используют фосфат гистамина (2-10-6), ацетилхолин (10-6) и бария хлорид (2 
10-4). Этот метод полезен для определения спазмогенной активности, а также для оценки бронхорасширяющего действия. Препарат трахеи не имеет спонтанных сокращений и может использоваться в течение 12 ч.
Бронхолитическое действие. Опыты можно проводить на трахеотомированных морских свинках или собаках. Морских свинок наркотизируют этаминалом натрия. Один отвод трубки, вставленный в трахею, соединяют с системой регистрации тонуса бронхов. Бронхоспазм вызывают введением в яремную вену гистамина в дозах 60-100 мкг/кг или ацетилхолина в дозе 50-100 мкг/кг. Регистрируют влияние исследуемых веществ на тонус бронхов. Регистрирующая система состоит из ртутного манометра и склянки Дрекселя, играющей роль дыхательного клапана и соединенной с пистон-рекордером (рис. 14). Более подробно один из вариантов этой методики изложен в работе Т. М. Турпаева (1953).
Весьма удобный метод регистрации тонуса трахеи описан на стр. 43 (изолированная трахея крысы).
Определенный интерес для суждения о степени спазма бронхов могут представлять данные о колебаниях внутриплеврального давления, отражающие компенсаторную реакцию дыхательных мышц при повышении сопротивления воздухоносных путей.
