Сердечно-сосудистые средства

Сердечные гликозиды

Начальный этап изучения фармакологической активности сердечных гликозидов имеет специфические черты в связи с высокой избирательностью действия этих соединений и принадлежностью их к определенному классу химических соединении - производным циклопентанпергидрофенантрена. Поиски гликозидов проводят среди растений, близких по своим ботаническим свойствам к известным гликозидсодержащим растениям, а также по принципу слепого скриннинга при исследованиях лекарственной флоры. Определенный интерес представляет индикация кардиотропного действия синтетических продуктов, близких по своей структуре к сердечным гликозидам. Некоторые неспецифические черты токсического действия сердечных гликозидов, выявляемые в опытах на интактных мышах, представлены в табл. 4

Сердце лягушки in situ. Специфическим проявлением действия сердечных гликозидов являются повышение тонуса сердечной мышцы и остановка сердца во время систолы. Этот простой тест чрезвычайно важен для скриннинга сердечных гликозидов. Используют лягушек самцов весом 40-50 г по 5 в группе (среднее отклонение в группе ±2,5 г). Лягушек закрепляют на корковой доске брюшком вверх с вытянутыми конечностями. Захватывают кожу в области середины брюшка и рассекают ее полукруглым разрезом до плечевого пояса. Кожный лоскут откидывают на нижнюю челюсть. Затем, захватив пинцетом грудину, иссекают её на протяжении 4-5 мм, оставляя интактным ее нижний край. Осторожно рассекают перикард и выводят сердце на переднюю поверхность грудной клетки. Перерезают связку, соединяющую сердце с внутренней поверхностью сердечной сумки. Важно, чтобы обнажённое сердце не соприкасалось с кожей лягушки, выделяющей ядовитый для сердца секрет. Каждые 15 мин сердце увлажняют 1-2 каплями изотониче­ского раствора хлорида натрия. Верхушку его соединяют через серфин с регистрирующим рычагом. Электрокардиограмму записывают с помощью игольчатых электродов (в первом стандартном отведении). Исследуемое вещество и растворитель (в контроле) вводят в бедренные лимфатические пространства или в большую кожную вену передней поверхности живота, Объем раствора не должен превышать 0,5-0,7 мл. Изменения деятельности сердца регистрируют в исходном состоянии и каждые 10 мин в течение часа (см. табл. 7).

Таблица 7

ОСНОВНЫЕ ПАРАМЕТРЫ НАБЛЮДЕНИЯ ПРИ СКРИННИНГЕ

КАРДИОТОНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА СЕРДЦЕ ЛЯГУШКИ

При необходимости может быть исследована зависимость между дозой исследуемого вещества и эффектом с использованием различных параметров кардиотонического действия.

Папиллярная мышца кошки. Кошку наркотизируют эфиром, сердце экстирпируют и из правого желудочка осторожно выделяют папиллярную мышцу. Последнюю фиксируют к пластиковому держателю, который затем погружают в ванночку с 10 мл модифицированного раствора Тироде (натрия хлорида 7 г/л, калия хлорида I 345 мг/л, кальция хлорида 350 мг/л, однозамещенного натрия фосфата 91 мг/кг, гептагидрата магния сульфата 147 мг/кг, натрия бикарбоната 2100 мг/кг и глюкозы 900 мг/кг).

Температуру раствора, насыщаемого карбогеном, поддерживают на уровне 38°. Сокращения мышцы вызывают прямоугольными импульсами супрамаксимального вольтажа, продолжительностью 2 мс и частотой 1 Гц. Запись изотонического сокращения производится на ленте кимографа рычагом с семикратным усилением и статической нагрузкой в 1,9 г. Вещества прибавляют в ванночку после того, как амплитуда сокращений станет постоянной. Эф­фект оценивается в процентах исходной величины амплитуды. Bennet с соавторами (1958) описали модификацию методики с использованием гипотоничной папиллярной мышцы. Изолированная папиллярная мышца работает в течение 1-2 ч, затем подвергается воздействию 0,025 мг/мл барбитала натрия до снижения амплитуды в среднем на 50%. Исследуемое вещество прибавляют в объеме не более 1 мл. Реакция оценивается по следующей шкале: 0 — нет изменений; +1 — амплитуда повышается от 50 до 62% исходного уровня; +2 — амплитуда повышается до 75 %; + 3 — до 87 %; + 4 — амплитуда восстанавливается до контрольных величин. Отмечают вре­мя развития максимального эффекта.

Предсердия кошки и крысы используют для выявления инотропного и хронотропного действия исследуемых веществ. Предсердия изолируют под легким эфирным наркозом. Препарат помещают в ванночку, заполненную раствором Локка при температуре 38°, через который постоянно пропускают карбоген. Амплитуду сокращений записывают на кимографе. Изменения амплитуды после прибавления вещества измеряют. Они выражаются в процентах от исходной величины амплитуды сокращений. Хронотропный эффект также выражается в процентах от исходной частоты сердечных сокращений в единицу времени.

С аналогичной целью может быть использовано атропинизированное предсердие крысы. Животное забивают ударом по основанию черепа и декапитируют. Экстирпируют сердце, изолируют предсердия и помещают в модифицированный раствор Тироде (при температуре 28°), содержащий 2,9×10^-8 М атропина сульфата. Питательный раствор насыщается карбогеном. Раствор Тироде имеет следующий состав (%): натрия хлорида 0,9, калия хлорида 0,042, кальция хлорида 0,024, натрия бикарбоната 0,05, глюкозы 0,10. Применяемая концентрация бикарбоната повышает рН приблизительно до 7,4. Сокращения предсердий регистрируют с помощью миографа или трансдюсера при статической нагрузке приблизительно 0,5 кг. После помещения в ванночку предсердия оставляют для адаптации как минимум на 30 мин и затем исследуют воздействие испытуемых веществ.После каждой экспозиции с испытуемым веществом предсердия многократно отмывают питательной жидкостью.

В этих целях можно использовать методику исследования фармакологических веществ на изолированных перфузируемых сердцах кошек, кроликов и морских свинок.

Полоска аорты кролика. Этот объект весьма чувствителен к большинству сердечно-сосудистых средств. После декапитации кроликов (весом 2,5-3,5 кг) выделяют нисходящую грудную аорту и помещают ее в раствор Кребса (бикаронатный). После удаления жира и соединительной ткани аорту рассекают спиралеобразно по всей длине. Полоска обычно около 0;4 мм толщины, 2 мм ширины и 200 мм длины. Гладкомышечные волокна полоски располагают под углом около 15° к её продольной оси. Затем готовят короткие отрезки аорты длиной 20 и 40 мм в длину. Во время приготовления полосок аорту постоянно увлажняют бикарбонатным раствором. Ванночку заполняют 20 мл бикарбонатного раствора Кребса с 0,01 М глюкозы, насыщаемого карбогеном.

Для записи тонуса полоски используют чернильнопишущий рычаг при увеличении амплитуды сокращений в 9 раз и статической нагрузке в 4 г. Объем исследуемого раствора, прибавляемого в ванночку, не должен превышать 0,2 мл. Важно отметить, что в первый момент наблюдения полоски растягиваются под воздействием статической нагрузки приблизительно на 40% и затем на протяжении последующих 10-180 мин ещё на 2-10%. При достижении максимальной чувствительности ответы на воздействие небольших доз адреналина остаются постоянными в течение 4 ч и более (Furchgott e.a., 1953).

Оценка кардиотонической активности в остром эксперименте на кошке. Техника эксперимента обычная. Кошку наркотизируют этаминалом натрия. Исследуют влияние испытуемого препарата на кровяное давление, амплитуду пульсового давления, частоту сокращений и данные ЭКГ (P-Q, Q-T, T). Учитывают прессорный эффект, отрицательное хронотропное действие и специфическое влияние на элементы ЭКГ как в альтернативной, так и в градуируемой форме. Исследуемые вещества вводят в бедренную вену. Отмечается характерная для сердечных гликозидов фазовость действия.

Для выявления веществ с кардиотоническим эффектом могут быть также использованы хронические наблюдения на крысах с регистрацией кровяного давления, пульса, электрокардиограммы и дыхания (Р. М. Любимова-Герасимова, 1968; В. С. Стальненко и др., 1969, и др.).