Средства, действующие преимущественно в области

Окончаний афферентных нервов

 

Местные анестетики

 

Изучение общей токсичности выявляет ряд неспецифических.симптомов, присущих резорбтивному действию местноанестезирующих веществ (см. табл. 4). Вопрос о наличии местноанестезирующей активности решают путем выявления их локального действия. Для этого широко используют исследование местного действия при закапывании растворов веществ в конъюнктивальный мешок глаза, при внутрикожной инъекции, прямом воздействии на нервный ствол и введении в спинномозговую жидкость.

Анестезия роговицы глаза. В конъюнктивальный мешок глаза кролика закапывают 1-2 капли раствора исследуемого вещества. Определяют быстроту наступления анестезии и ее продолжительность. Отмечают величину зрач-

 

ка (в мм) и кровенаполнение сосудов конъюнктивы. В качестве эталона для сравнения может быть использован 1% раствор кокаина. При необходимости может быть проведена количественная оценка интенсивности терминальной анестезии (Е.Г. Изюмов, В.А. Юрьев, 1970).

Анестезия кожи. Морской свинке внутрикожно вводят исследуемый препарат (кожу в месте инъекции предварительно выбривают). Определяют минимальную концентрацию вещества, тормозящую общую реакцию на раздражение кожи электрическим током стандартных параметров.

Влияние на проводимость в седалищном нерве лягушки. Препарируют седалищный нерв лягушки с интактной центральной нервной системой. Отмечают общую и локальную двигательную реакцию на раздражение седалищного нерва. Затем на седалищный нерв накладывают муфту из ватного тампона (3-5 мм шириной), смачиваемую исследуемым раствором. Через 7-10 мин исследуют реакцию на раздражение нерва дистальнее и проксимальнее места наложения тампона. Отсутствие в первом случае общей двигательной реакции свидетельствует о нарушении проводимости по афферентным волокнам, отсутствие двигательной реакции лапы при раздражении прокси-

 

 

мальной точки указывает на блокаду проведения возбуждения в двигательных нейронах. При разрушении центральной нервной системы исследуют только последний тест. Один из вариантов методики исследования проводниковой анестезии на седалищном нерве подробно описан А. С. Кучерук (1961).

Корешковая анестезия. Для оценки эффективности исследуемых веществ последние вводят взрослым кроликам самцам субарахноидально. При варьировании доз может быть установлена минимальная эффективная концентрация, скорость проницаемости, определяемая временем развития эффекта при введении малых концентраций, длительность анестезии, интенсивность местного раздражающего действия. Иглу вводят медленно между VI и VII поясничными позвонками до появления ощущения, указывающего на проникновение иглы в субарахноидальное пространство. Если возможно, перед инъекцией извлекают спинномозговую жидкость в объеме равном объему вводимого раствора. В течение первых 15 мин после введения испытуемого вещества каждые 2 мин исследуют «уретральный рефлекс» – сокращение анального сфинктера и ретракцию полового члена при введении в уретру через катетер 2-3 мл тёплой воды. Торможение рефлекса указывает на развитие анестезии, продолжительность действия определяется временем прошедшим от исчезновения рефлекса до середины интервала между последним негативным и первым позитивным ответом.

Пороговой концентрацией считается концентрация вещества в граммах на 100 мл раствора, устраняющая уретральный рефлекс в течение 5 мин. Активность более известных местных анестетиков по этому тесту следующая: новокаина 0,50, кокаина 0,54, совкаина 0,04, ксикаина 0,21 и дикаина 0,06 (Luduena, 1957). Существует определенная корреляция между активностью местноанестезируюших средств и их системной токсичностью. Соотношение активности и раздражающего эффекта является одним из наиболее важных свойств исследуемых веществ, от которого зависит возможность их практического использования. Показателями раздражающего действия могут быть сопротивление животных, писк и дрожь во время и после инъекции вещества. Детальное изучение этого вопроса является уже этапом последующего фармакологического исследования.

 

Раздражающие средства

 

При первичном фармакологическом исследовании изучение раздражающего действия представляет интерес прежде всего для оценки степени нежелательного побочного эффекта биологически активных веществ. Наличие резкого раздражающего действия является серьезным препятствием для возможного клинического применения даже весьма активных препаратов.

Что касается отбора средств, которые могут быть использованы как раздражители, то обычные методы скриннинга в этом случае малопригодны, так как предварительная оценка перспектив использования этих препаратов определяется их химической структурой и зависит   от рентабельности производства новых средств этого типа действия. К тому же следует отметить, что и потребности в новых препаратах этой группы весьма умеренные в связи с наличием большого выбора довольно эффективных средств.

Влияние на конъюнктиву глаза. В конъюнктивальный мешок одного глаза кролика закапывают 2 капли исследуемого раствора, в другой глаз — такое же количество растворителя. Оценка раздражающего действия связывается с изменением кровенаполнения конъюнктивы, лакримацией и влиянием на роговицу глаза. Отмечают три степени раздражающего действия: слабое, умеренное и сильное.

Сосуды плавательной перепонки. После регистрации величины просвета сосудов с помощью микрометрического окуляра микроскопа на плавательную перепонку наносят каплю исследуемого раствора. Отмечают расширение сосудов, замедление тока крови, пристеночное положение лейкоцитов. Испытывают различные постепенно возрастающие концентрации веществ. Оценка эффективности их действия может быть выражена в процентах исходной величины диаметра сосуда. Кроме сосудов плавательной перепонки, для этих же целей может быть использован препарат сосудов брыжейки кишечника лягушки. Помимо отмеченных выше возможных изменений, в последнем случае может наблюдаться диапедез лейкоцитов.

Влияние на кожу теплокровных. Для оценки первичного и кумулирующего эффекта раздражающих средств на кожу могут быть использованы кролики, морские свинки и крысы (Finkelstein, 1963). Животных наркотизируют и привязывают к станку. Кожу живота выбривают и намечают поля кожи диаметром 2,5 см: на крысах — 4 поля, на морских свинках — 6 полей и на кроликах — 8 полей. Эти участки кожи предварительно трижды обрабатывают 20% водным раствором формальдегида (после полного испарения раствора при каждом воздействии). Затем на эти поля накладывают фланель, импрегнированную раствором исследуемого вещества. На одну из кожных зон воздействуют веществом с известной активностью (в качестве стандарта). Компрессы покрывают эластичной полиэтиленовой пленкой, плотно стягиваемой для обеспечения тесного контакта фланелевых прокладок с кожей. Затем в подмышечную ямку животных вводят 1 мл 0,5% раствора трипанового синего. Через 16 ч компрессы удаляют и определяют интенсивность раздражающего действия препаратов. Степень окрашивания полей оценивается визуально. С использованием указанной выше процедуры можно оценивать вещества, дающие слабый раздражающий эффект при повторном применении. Кумуляция красителя может быть определена через 5-6 ч после применения веществ с относительно низкой первичной активностью. Заслуживает внимания своей простотой и доступностью вариант методики изучения реактивности капилляров кожи на воздействие раздражающих веществ в опытах на мышах (Ю. Н. Нуралиев, Г. Л. Медник, 1970).

Раздражающее действие при внутрикожном введении. Кроликов весом 2-3 кг фиксируют в станке на спине. Шерсть на животе выбривают, карандашом намечают 5 или 6 полей по 20 см². Исследуемое вещество в объеме 0,3 мл вводят внутрикожно в центральные точки намеченных полей. Спустя 10-20 мин внутривенно вводят 1 % раствор трипанового синего в дозе 1 мл/кг. Через 30, 60 и 180 мин после инъекции красителя исследуют окраску кожных зон, куда было введено изучаемое вещество (табл. 6).

Пороговая раздражающая концентрация, выраженная в процентах, для солянокислых солей совкаина, новокаина, хинидина и этанола равна соответственно 0,2, 5,1, 0,25 и 5. Если средний эффект раздражающего действия раз­личных доз исследуемого вещества нанести против логарифма его доз, получается прямая линия. Для количественной оценки раздражающего действия вещества желательно использовать три или более дозы на 10 различных кроликах. Таким образом, если используется 8 полей на каждом кролике из 10, то представляется возможным получение на графике 8 точек (Luduena, Hoppe, 1952).

Заключительным этапом ориентировочного исследования раздражающего действия являются наблюдения на людях-добровольцах. Раздражающие вещества используют в постепенно возрастающих концентрациях и экспо­зициях. Если известна химическая структура раздражающего вещества и оно не обладает высокой токсичностью, то представляется возможным решение вопроса о его пригодности для клинической практики по данным изучения раздражающего действия на людях-добровольцах.

 

 

Таблица 6

ОЦЕНКА РАЗДРАЖАЮЩЕГО ЭФФЕКТА ПО ИНТЕНСИВНОСТИ

ОКРАШИВАНИЯ ТКАНЕЙ

 

Интенсивность окрашивания в зоне введения	Оценка	Раздражающий эффект
Нет окраски Слабо различимая окраска Различимая равномерная голу­бая окраска Глубокое равномерное окрашивание Ишёмический центр с выраженным голубым ореолом	0 2 4   6   8	Отсутствует Очень слабый Слабый   Умеренный   Выраженный

Желчегонные средства

 

Первичному фармакологическому исследованию средств, влияющих на желчеобразование и желчевыделение, предшествует отбор препаратов, которые по своим физико-химическим свойствам могут представлять интерес в этом аспекте. Представляется также интересным исследование таких препаратов, биологическая активность которых не может быть определена на основании имеющихся фармакологических материалов. Процедура скриннинга холеретиков довольно сложна и трудоемка, в связи с этим очень важен тщательный предварительный анализ предпосылок, свидетельствующих в пользу возможного действия исследуемого препарата.

В крупных лабораториях, где проводится всесторонний фармакологический скриннинг, наиболее ценные данные получают в опытах на собаках с фистулой желчного пузыря и выведенным по методу И. П. Павлова (1902) желчным протоком. Влияние фармакологических веществ на процесс желчеобразования может быть исследовано и на более мелких животных с фистулой желчного пузыря.

X оледоходуоденостомия. У кролика в асептических условиях вскрывают брюшную полость по среднем линии. Перевязывают общий желчный проток, в центральный его отрезок вводят резиновую или эластичную полиэтиленовую трубку и фиксируют лигатурой. Свободный конец трубки выводят из брюшной полости и затем вставляют в фистулу, накладываемую на двенадцатиперстную кишку. На 5—7-й день можно проводить опыты с учетом действия веществ на объем и качественный состав желчи. Желчь собирают в течение часа до введения вещества, отмечая ее количество каждые 15 мин, затем в течение 3 ч после введения препарата. Вычисляют средние величины и достоверность их различий с контрольными данными (Т. А. Штессель, 1954).

Фистула желчного протока у морских свинок является удобным приемом для скриннинга холеретиков. Морские свинки дают постоянный объем секреции (0,40-0,65 мл) желчи в 10-минутные интервалы наблюдения. Животных наркотизируют внутрибрюшинным введением уретана в дозе 1 г/кг веса. От нижнего края грудины производят срединный разрез длиной 2-3 см. Выделяют желчный проток, через разрез вводят тонкостенную полиэтиленовую трубку и фиксируют ее там. Двенадцатиперстную кишку канюлируют полиэтиленовой трубкой для введения исследуемых веществ. Рану закрывают. Желчь собирают шприцем ёмкостью 1 мл и делениями в 0,01 мл. Объем измеряют каждые 10 мин. Пищу не дают животным в течение 6 ч до эксперимента для поддержания регулярности секреции. Если секреция желчи неравномерна, то рану вскрывают и перевязывают привратник, препятствуя переходу желудочного содержимого в кишечник. Процент повышения секреции вычисляют по формуле:

 

где Vi — средний объем секреции за аналогичный период действия исследуемого вещества; V ₂ — исходный объем секреции, определяемый в течение 40-60 мин (отклонения от средней не должны превышать 7%).

Для количественной оценки эффекта каждую дозу исследуемого вещества изучают на 6 крысах. Оценивают также относительную продолжительность действия препаратов.

Период активности для натрия дегидрохолата составляет 70 мин, натрия метоксинафтоилпропионата — 162 мин (Pesson е. а., 1959). Если вещество даёт положительные результаты лишь в 5 случаях из 6, то эффект расценивается как неопределенный.

Фистула желчного протока у крыс. Используют крыс самцов 7-месячного возраста весом 300 г, наркотизируемых внутривенным введением этилуретана (1,25 г/кг). Готовят фистулу желчного протока. Перед собиранием желчи животные отдыхают в течение 30-40 мин (желчь в это время оттекает свободно). Для получения контрольных данных желчь собирают в течение 90 мин до введения препарата и затем в течение 300 мин действия исследуемого вещества. Общий объем желчи регистрируют каждые 30 мин. Животных содержат в вентилируемом боксе с постоянной температурой (32°). Каждый час животным подкожно вводят 1,5 мл изотонического раствора натрия хлорида. Для сравнения подкожно инъецируют 10% раствор натрия дегидрохолата или фенилдиметилацетата (Rozuet, Jousse, 1960).

Для оценки холеретического эффекта может быть также использована фистула желчного пузыря у кроликов (М, Паршевский с соавт., 1972) или канюлирование протока доли печени (М. Ф. Нестерин, Р. В. Народецкая, 1967).

 

Слабительные средства

 

Некоторые эффекты, характерные для слабительных средств, могут выявляться уже в наблюдениях на интактных мышах (см. табл. 4).

Важнейшим условием отбора слабительных препаратов является установление элективности их действия и дифференцирование их от холинопозитивных, адренонегативных и других средств, которые также могут усиливать моторику кишечника.

Скорость опорожнения кишечника является простейшим тестом для выявления активности слабительных средств. Для опыта отбирают мышей весом 20-22 г, получавших овес и воду без ограничения. Исследуемые вещества вводят в желудок в объеме 0,2 мл раствора, контрольная группа получает 0,2 мл изотонического раствора натрия хлорида. Учитывают количество, размеры частиц и консистенцию кала, общее количество кала за 12 ч наблюдения. Каждую дозу исследуемого вещества изучают на 8-10 мышах. Эффект выражается в процентах по отношению к контрольным величинам. Определяют достоверность различия средних данных в эксперименте и контроле.

Влияние на моторику желудочно-кишечного тракта оценивают в опытах на мышах весом 20-22 г. Животные не получают пищи в течение 17-22 ч, питье не ограничивается. За 15 мин до введения исследуемого вещества мышам в желудок вводят взвесь (5%) - черного активированного угля в 5% слизи трагаканта. Два часа спустя после введения исследуемого вещества животных забивают хлороформом. Желудок и тонкий кишечник извлекают и растягивают при нагрузке 3 г. Определяют расстояние продвижения угля в кишечнике и вычисляют показатель интенсивности моторики по отношению к данным контрольных опытов (Witkin, 1961).

Фистула кишечника. Для оценки действия препаратов на моторику кишечника могут быть использованы собаки с фистулой дистального отрезка тонкого кишечника. Через 30 мин после стандартного завтрака с красителем или взвесью активированного угля внутрь назначают исследуемое вещество. Каждые 15 мин из кишечной фистулы берут пробу для анализа кишечного содержимого.

Время от момента введения индикатора (с завтраком) до появления его в пробе отмечается как скорость его транспортировки. Производят сопоставление опытных и контрольных данных. Влияние на моторику кишечника выражается в процентах времени «транспорта» индикатора в контрольных опытах.

Для тестирования действия средств, влияющих на моторику кишечника, помимо указанных методик, можно использовать выведение петли тонкого кишечника под кожу по методу И. П. Павлова, эксперименты на изолированных отрезках кишечника, острые опыты на кишечнике кролика in situ, рентгенографические, радиотелеметрические, радиоизотопные и другие методики.