Противосудорожные и антипаркинсонические средства

Противосудорожные и антипаркинсонические средства обладают широкой биологической активностью. Некоторые стороны их активности могут быть установлены при наблюдениях на мышах и в опытах на изолированных органах (см. табл.4).

Противосудорожные средства. Для исследования специфической противосудорожной активности в основном используют приемы экспериментальной терапии искусственно вызываемых судорожных состояний (К.С. Раевский, 1961).

Судороги, вызываемые электрическим током. Эффективность действия оценивают по способности противосудорожных средств устранять тонический, экстензорный компонент судорог мышц конечностей белых крыс или мышей при раздражении током силой 150 или 50 мА соответственно и экспозиции 0,2 с. Для сравнительной оценки противосудорожной активности испытуемых средств в качестве эталона может служить фенобарбитал в дозах 10-30 мг/кг (Kerley е. а., 1961).

Судороги, вызываемые введением коразола. Исследуемое вещество в определенных дозах назначают взрослым крысам. Через 45 мин внутримышечно вводят коразол в дозе 112 мг/кг. Отсутствие судорог (тремор во внимание не принимают) является показателем противосудорожного действия исследуемого вещества. Наблюдение продолжают в течение 60 мин после введения коразола. ED₅₀ по этому тесту для триметина и фенобарбитала равны соответственно 368 и 35 мг/кг (Soaje-Echague, Lim, 1962).

В другой модификации исследуемые вещества вводят за 30 мин до внутривенного введения коразола в дозе 38 мг/кг (время введения не должно превышать 4 с). Тест расценивают как позитивный, если предварительное вве­дение исследуемого вещества предупреждает появление тонических судорог задних конечностей мышей.

Судороги, вызываемые введением никотина. ED₉₉ никотина, вызывающая судороги при внутривенном введении, составляет для мышей 430 мг/кг (Holland е. а., 1961). Исследуемые вещества вводят внутрибрюшинно за 1 ч до инъекции никотина. Их активность оценивают по степени торможения судорожного эффекта.

Судороги, вызываемые введением триптамина. Взрослым белым крысам (по 8 животных в группе) вводят внутривенно различные дозы триптами-на. Регистрируют число животных, отвечающих на каждую дозу 3-секундным или более продолжительным периодом непрерывных судорог клонического характера. Эффект может варьировать от 3-секундного унилатерального клонуса передней лапы до 40-секундного периода билатерального клонуса передних и задних конечностей. Процент реагирующих на триптамин животных наносят в пробитах против логарифма дозы. По графику находят дозы, вызывающие эффект в 4 и 98% случаев. Они соответственно равнв15 и 40 мг/кг (Tedeschi е. а., 1959).

Каждую дозу исследуемого вещества изучают на 5 крысах. В различные интервалы времени после введения исследуемого вещества вводят ED₉₈ триптамина. Оценивают способность вещества предупреждать появление 5-секундных и более продолжительных непрерывных клонических судорог. Вычисляют ED₅₀. Действие триптамина связано с активизацией серотониновых структур мозга, поэтому этот тест может быть интересен для понимания механизма действия некоторых противосудорожных средств.

Антипаркинсонические средства. Наибольшую ценность для выявления активности этой группы средств представляют опыты на животных с экспериментальным тремором, вызванным 1,4-дипирролидино-2-бутил-дигид-рохлоридом (треморин).

Треморин в дозе 20 мг/кг вызывает у мышей холинергические эффекты: слюно- и слезотечение, диарею, усиление диуреза и тремор центрального генеза. Исследуемое вещество вводят внутрибрюшинно за 60 мин до внутрибрюшинной инъекции треморина в дозе 20 мг/кг (Everett е. а., 1956).

Более точно антитреморная активность исследуемых веществ может быть оценена путем регистрации интенсивности тремора у мышей при помощи высокочувствительного актографа.

Торможение кататонических реакций. По методике Морпурго (1962) для воспроизведения кататонии белым крысам самцам весом 200-300 г внутрибрюшинно вводят этаперазин в дозе 5 мг/кг. Различают 4 стадии кататонии: первую — животное сидит без движений, однако легкий толчок может вызвать небольшую моторную активность; вторую — крыса не реагирует на толчок; третью — животное сохраняет неудобную позу; четвертую — крыса сохраняет приданную ей позу на задних лапах, в то время как одной передней лапой она опирается на пластинку высотой. 9 см, а вторая находится в свободном положении.

Интенсивность торможения кататонии определяют в сравнении с данными контрольной группы опытов. Исследуемые вещества вводят за 15 мин до этаперазина. Максимум кататонической активности последнего наблюдается через час. Центральные холинолитики, эффективные при паркинсонизме, ослабляют симптомы кататонии. Помимо указанных выше тестов на противосудорожную активность, большой интерес представляют эксперименты с использованием крупных лабораторных животных, в частности исследование антиникотиновой противотреморной активности на кроликах, изыскание антагонистов треморина на собаках (Everett, 1964). Заслуживает внимания использование метода ЭЭГ моторных зон коры для оценки действия противосудорожных средств (Killam, 1962). В этом же плане представляет определенный интерес моделирование аудиогенных судорог (Р. А. Хаунина, И. Б. Прахье, 1972). В ходе изыскания средств с противосудорожной активностью установлен ряд интересных в физиологическом аспекте фактов, в частности выявлено уменьшение степени спазма гладкой мускулатуры под влиянием L-Дофа — предшественника катехоламинов, запасы которого локализуются преимущественно в каудальном ядре (Birkenmayer, Hornykiewcz, 1961).

Эти данные, как и тест с применением триптамина, указывают на перспективность поисков средств терапии гиперкинезов среди веществ, влияющих на обмен биогенных аминов в структурах головного мозга.

 

Противорвотные средства

 

Изыскание противорвотных средств имеет существенное практическое значение в связи с необходимостью лечения болезней движения, токсикозов беременности, осложнений при радиотерапии и ряда других патологических состояний.

В результате специальных исследований была показана противорвотная активность транквилизаторов, центральных холинолитиков и противогистаминных средств. С другой стороны, отбор противорвотных средств может приводить к выявлению веществ с вероятным центральным холино- и адренолитическим действием. При скриннинге противорвотных средств широко используется оценка степени торможения специфического действия апоморфина.

Использование апоморфина как средства, вызывающего рвоту, заслуживает предпочтения в связи с установленным центральным действием этого препарата и соответственно большей определенностью в интерпретации получаемых данных.

Наиболее ценными представляются исследования противорвотной активности веществ на собаках, которые получают корм непосредственно перед введением исследуемого вещества. Час спустя им внутривенно вводят апоморфин в дозе 50 мг/кг. Если рвота отсутствует после троекратного введения контрольной дозы, испытание прекращают. Показателем противорвотного действия исследуемого вещества может также служить удлинение скрытого периода действия апоморфина.

Скриннинг может быть также проведен на крысах-самцах, помещаемых в клетки со стружками на полу и окном для наблюдения (Janssen, 1961).

Спустя час после введения исследуемого вещества, каждой крысе внутривенно вводят апоморфина гидрохлорид в дозе 1,25 мг/кг. Через 5, 10 и 20 мин отмечают наличие или отсутствие симптома непроизвольного жевания. Отсутствие этого симптома указывает на противорвотную активность исследуемых веществ.

Для более точного определения противорвотной активности может быть применен метод Burkman (1962), основанный на параллелизме эффектов торможения рвоты и симптома «клевания». Производится перекрестное те­стирование исследуемого вещества и препарата-эталона. Исследуемое вещество и препарат-эталон вводят внутрибрюшинно в малой и высокоэффективной дозах 12 голубям-самцам весом 335-500 г за 15-30 мин до инъекции апоморфина в дозе 2 мг/кг. «Клевание» в контроле продолжается в течение 2 ч, латентный период — около 7 мин. Если активность аминазина по этому тесту принять за 1, то эффект пропазина составляет 0,1, трифлупромазина— 4,4, метеразина —2,3, этаперазина — 10,2 и фторфеназина — 26,7 (Deshpande е. а., 1961).

Несомненного внимания заслуживает тестирование противорвотной активности и при моделировании расстройств вестибулярного аппарата адекватными раздражителями (В. Е. Бусыгин, Ю. Г. Григорьев, 1962). Этот аспект исследований представляется наиболее перспективным в плане изыскания средств профилактики синдрома «укачивания».

 

Анальгетики

Выявление обезболивающей активности веществ важно не только в плане поисков новых анальгетических средств, но и для понимания некоторых сторон их фармакодинамики. Некоторые проявления обезболивающего действия веществ выявляются уже в процессе изучения их общего действия в опытах на мышах и в тестах на изолированных органах (см. табл. 4). В связи с общепринятым делением обезболивающих средств на наркотические и ненаркотические анальгетики ниже представлены в. соответствующей последовательности основные наиболее простые методы их первичного фармакологического исследования.

 

Наркотические анальгетики

 

Тест сдавления хвоста. Мышам через 30 мин после введения исследуемого вещества на основание хвоста накладывают зажим с браншами, покрытыми резиной. Контрольные мыши в течение 30 с пытаются снять его. Отсутствие защитной реакции на сдавление хвоста свидетельствует об анальгетическом действии препарата. При изучении серии доз исследуемого вещества может быть вычислена ED₅₀.

Более точные данные дают эксперименты на крысах. Хвост крысы, находящейся в специальной плексиглазовой камере, помещают на резиновый баллон, соединенный с манометром. Хвост постепенно сдавливают при равномерном движении специального вертикального стержня универсального штатива (рис. 8). Для обеспечения равномерности движения удобнее использовать привод от электромотора. Степень давления на хвост регистрируется манометром и выражается в миллиметрах ртутного столба. Показателем болевой реакции служит писк животного. Предварительно в 5 пробах устанавливают среднее пороговое давление, вызывающее писк, а затем определяют его значения через определенные интервалы после введения исследуемого вещества (А. К. Сангайло, 1961). Для оценки анальгетического эффекта иногда используется индекс (Blair, Stephenson, 1960), представляющий собой отношение минимального порогового давления после введения исследуемого вещества к исходному пороговому давлению. В ряде работ для сдавления хвоста использовали специальные калиброванные зажимы (Dandiya, Menon, 1963, и др.), однако эти методические приемы не имеют заметных преимуществ перед описанными выше и не получили широкого распространения в скриннинге анальгетиков.

 

 

Торможение болевой реакции при термическом воздействии. Белых мышей самцов (вес 20-30 г) осторожно помещают на нагретую до 55-55,5° площадку с ограничительным цилиндром.

Подобным же образом могут быть использованы и крысы (диаметр площадки и высота ограничительного цилиндра 25 см). Учитывают время от момента помещения мыши на горячую площадку до момента выпрыгивания из цилиндра. Все другие симптомы дискомфорта не учитывают.

Каждую дозу препарата испытывают на 5 мышах. Отмечают время появления реакции за 5 и 10 мин до введения исследуемого вещества и затем каждые 10-15 мин до окончания эффекта. Объем вводимого раствора не должен превышать 0,1 мл на 10 г веса тела. Исходное время реакции представляет собой среднюю величину контрольных измерений. Удлинение латентного периода реакции более чем на 30 сек при 3 или более измерениях расценивается как положительный эффект. Среднее время реакции в контрольных опытах на 10 000 мышей составляло около 5 с. Почти все мыши облизывали лапы в пределах первых 10 с (Janssen, Jageneau, 1957). В качестве объективного теста может быть использована актографическая регистрация двигательного компонента болевой реакции (И. С. Ниловская,1959).

Определяют ED₅₀ — дозу вещества, вызывающую в течение 30 мин торможение реакции ускользания у 50% мышей.

В модификации этого метода, предложенной Jacob, Bosovski (1961), учитываются три параметра: 1 — облизывание, 2 — прыжки, 3 — прыжок на край цилиндра. Мышей помещают на горячую поверхность (65°), ограни­ченную стеклянным цилиндром высотой 17 и диаметром 13 см. Каждую дозу испытуемого вещества вводят 10 мышам. Время наблюдения 45 с. В контроле первичная реакция у 75% животных проявляется облизыванием лап. При четвертом испытании все животные быстро взбираются на край цилиндра, облизывание лап наблюдается редко.

Составляют график зависимости времени реакции (ордината) от дозы (абсцисса). Определяют достоверность сдвигов времени облизывания при первой экспозиции, времени до начала прыжков в цилиндре и выпрыгивания — при третьей экспозиции.

Тест с использованием горячей пластинки может быть применен для последующего скриннинга веществ, относящихся к группе наркотических анальгетиков (Osterberg е. а., 1958). Горячая пластинка имеет температуру 50± 0,5. В контроле мышь реагирует на это воздействие облизыванием лап в среднем через 8,3 с. Исследуемые вещества вводят подкожно и через 15, 30, 45 и 60 мин * у каждой из 3 мышей, составляющих группу, регистрируют время первой реакции облизывания. Высчитывают среднее время реакции для каждой мыши и произведение трех средних делят на (8.3)³ или 572 для выяснения соотношения с нормой. Если соотношение меньше чем 1,22, исследуемое вещество отвергают; если соотношение более 6,58, продолжают специальное фармакологическое исследование вещества. С помощью этого теста в 75% случаев выявляют анальгетическую активность исследуемых соединений. Вещества с промежуточными величинами этого отношения снова тестируются по описанной выше методике.

Заслуживает внимания использование для термостимуляции лучистого тепла, что позволяет раздражать различные рецепторные зоны (Ercoli, Lewis, 1945). Электрический свет от лампы в 1000 Вт фокусируется двояковы­пуклой линзой диаметром 10 см на пластиковую площадку с отверстием диаметром 1,5 см. Между источником света и линзой помещают асбестовый экран, используемый как заслонка. Крысу фиксируют так, чтобы выбритый участок кожи находился напротив отверстия. Отмечают время реакции крысы на тепловое воздействие. Крысы дают два вида реакций: подергивание кожи в месте облучения и общую двигательную реакцию. Первая реакция появляется на 0,1с раньше второй. Большинство животных начинают реагировать через 4-5 с и обычно напряжение тока регулируют так, чтобы среднее время до начала реакции составляло 4 с.

Установлено, что крысы наиболее пригодны для этого теста. Можно также использовать хомяков, морских свинок и кошек, мыши же дают весьма непостоянные реакции. Средней анальгетической является доза, вызывающая удлинение времени от начала раздражения до ответной реакции до 6 и более секунд у 40-60% групп животных. Исследование начинают через 15, 30, 45, 60, 90, 120и 180 мин после инъекции исследуемого вещества. Если реакция отсутствует в течение 15 с, то раздражение прекращают, так как более длительная экспозиция вызывает ожог, анальгезия обозначается как полная. Минимально эффективные дозы морфина, кодеина и дигидроморфинона равны соответственно 4, 28 и 0,53 мг/кг. Метод непригоден для определения активности ненаркотических анальгетиков.

Тест с погружением хвоста в воду с температурой 58°. После внутрибрюшинного введения исследуемого вещества в индивидуальные тесные клетки помещают мышей с выведенными наружу хвостами. Регистрируют с точностью до 0,1 с время от момента погружения хвоста в горячую воду до первого резкого движения его. Тест повторяется каждые 30 мин, начиная с 15-й мин после инъекции. Проводят два измерения, регистрируя максимальную величину скрытого времени реакции. Если ответная реакция не появляется в течение 6 с, опыт прекращают. LD₅₀ и определенные этим методом ED₅₀ (мг/кг) и терапевтический индекс составляют соответственно для морфина — 335; 4,6; 73; для лидола — 125; 9,1; 13,8; для кодеина фосфата — 130; 20,0; 6,5 и бутадиона — 336; 59,2; 5,7.

Ацетилсалициловая кислота (LD₅₀ =495 мг/кг) в дозе 200 мг/кг не вызывала удлинения латентного периода болевой реакции более чем на 3,7 с. Новые препараты анальгетического ряда должны иметь терапевтический индекс не менее 10.

Налорфиновый тест используется для обнаружения морфиноподобного действия препаратов. Налорфин обладает выраженным антагонистическим действием в отношении морфина. Мышам, крысам или собакам, получившим токсическую дозу исследуемого вещества, в период пика активности вводят от 0,5 до 10 мг/кг налорфина внутривенно. Налорфин в дозе 5 мг/кг устраняет анальгезию, вызываемую 10 мг/кг морфина, а также частично снимает эффект практически всех активных наркотических анальгетиков.

Спазм мышц, вызванный введением окситоцина, тормозится морфином и родственными ему препаратами. Известно, что окситоцин может вызывать спастическое сокращение мышц тела и задних конечностей, с направленным внутрь вращением одной задней лапы.

Крысам-самкам весом 120-140 г имплантируют под кожу бедра таблетку диэтилстильбэстрола (15 мг/кг). Через 10 недель за 15 мин до внутрибрюшинного введения 2 ED окситоцина (ED₈₀) подкожно вводят исследуемое вещество. Каждую дозу исследуют на 10 крысах. Определяют процент снижения судорог и ED₅₀. Тест более чувствителен, чем использование лучистой энергии (Murrey, Miller, 1960).

Помутнение хрусталика. После подкожного введения мышам наркотических анальгетиков в дозе, превышающей ED₅₀ (по тесту сдавливания хвоста) в 4 раза, наблюдается обратимое помутнение хрусталика. Это явление возникает через 15 мни после введения и сохраняется в течение 3 ч.

Реакция довольно специфична для наркотических анальгетиков. Активные анальгетики вызывают более интенсивное помутнение (Weinstook е. а., 1958).

Исследование проводят через 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120, 150 и 180 мин после введения испытуемых веществ. Чувствительность этого теста для производных морфина и папаверина близка к таковой, получаемой при помощи го­рячей пластинки.

 

Ненаркотические анальгетики

Влияние на болевую реакцию, вызываемую химическими агентами. Синдром боли воспроизводят внутрибрюшинным введением мышам-самкам весом 20±2 г 0,2 мл 0,02% водного раствора фенилхинона (2-фенил-1,4-бензохинон). Наблюдение ведут в течение 20 мин. Около 80% мышей не дают реакции «корчения». На следующий день мышам с положительной реак­цией «корчения» повторно вводят фенилхинон через 20 мин после инъекции исследуемого вещества. Устанавливают процент защитного действия для каждой дозы препарата, испытываемой на 6 мышах. ED₅₀ вычисляют по методу Литчфилда и Уилкоксона (1949). Если принять активность профилактического действия натрия салицилата за 1, то активность бутадиона будет составлять 1,61, антипирина — 0,73, фенацетина — 0,52, салициламида — 0,40. Кроме анальгетиков, торможение синдрома «корчения» вызывают противогистаминные препараты, холино-и адреномиметики, стимуляторы центральной нервной системы и адреноблокаторы. Описанный метод довольно чувствителен, прост и может быть использован для скриннинга слабых анальгетиков. Следует отметить, что изолированное применение только этого метода не дает оснований для заключения об анальгетическом действии исследуемого вещества, ибо, как указано выше, этот тест не специфичен для анальгетиков.

Внутрибрющинное введение уксусной кислоты в дозе 300 мг/кг в виде 3% раствора также дает синдром «корчения». Исследуемые вещества назначают мышам за 15 мин до введения уксусной кислоты. Каждую мышь помещают в стеклянную банку, регистрируют общее число приступов экстензорных судорог. Контрольные мыши дают в среднем 35 приступов «корчения» в течение 20 мин после назначения уксусной кислоты. Тест более чувстви­телен, чем определение анальгетической активности морфина с использованием горячей пластинки и хвостовой реакции мышей. Синдром «корчения» не устраняется фенобарбиталом натрия и пентобарбиталом в дозах, вызы­вающих потерю рефлексов положения, и тормозится лишь при введении аминазина и мепротана в дозах, приводящих к резкой общей депрессии.

Влияние на болевую реакцию, вызываемую раздражением электрическим током. Мышь помещают в клетку с полом из металлических полос, позволяющих подавать ток к лапам животных. Определяют минимальное напряжение тока, вызывающего писк животного. Измерения болевого порога проводят каждые 10 мин в течение часа. После ряда измерений среднее пороговое напряжение тока становится довольно постоянным — около 20 В. Каждую дозу вещества исследуют на 10 мышах. Через каждые 10 мин после введения исследуемого вещества и до момента возвращения к контрольному уровню определяют пороговое напряжение тока, Разность между средним пороговым напряжением после введения вещества и контрольными данными наносят на оси ординат, время наблюдения — на оси абсцисс. Кривая позволяет оценить продолжительность и интенсивность действия испытуемого вещества.

Аналогичным образом оценивают анальгетическую активность при раздражении электрическим током прямой кишки крысы, которую помещают в тесную (фиксирующую) клетку с полом в виде медной пластинки, служащей электродом. Второй электрод вводят в прямую кишку и фиксируют к хвосту. Определяют пороговое напряжение тока, вызывающего писк животного в контроле и после введения исследуемого вещества. Разность этих величин дает представление об анальгетической активности вещества (Charlier е. а., 1961).

 

Жаропонижающие средства

 

Выявление активности антипиретиков проводится в условиях гипертермии, ибо при нормальной температуре их эффект, как правило, не проявляется. Большинство жаропонижающих средств обладает анальгезирующим действием, обнаруживаемым на интактных мышах, что необходимо учитывать при отборе веществ для дальнейшего их изучения. Для воспроизведения гипертермии и лихорадочных состояний в эксперименте использовали более 150 веществ (Н. А. Штакельберг, 1950).

Наиболее удобной является модель гипертермии, вызываемая 2,4-динитрофенолом.

Морским свинкам или крысам (по 6 животных в группе) подкожно вводят 2,4-динитрофенол в дозе 20-25мг/кг. Используют 2% раствор препарата в этиловом спирте или подщелоченном водном растворе. Повышение ректальной температуры начинается через 15-20 мин после введения 2,4-динитрофенола, а через 1—1  ч температура повышается на 2-3° и затем в течение нескольких часов снижается до нормы.

Изучают влияние различных доз исследуемых веществ на интенсивность и длительность гипертермии. Результаты наблюдений обрабатывают статистически и сопоставляют с данными контрольных наблюдений.

Гипертермия, вызываемая диэтиламидом лизергиновой кислоты. Белых кроликов-самцов весом 1,2-2 кг содержат в клетке по два, без ог­раничений в воде и пище.

Ректальную температуру у них измеряют электронным термометром каждые 30 мин в течение 2 ч до введения и в течение 5 ч после инъекции дизтиламида лизергиновой кислоты (ДЛК). В опыте используют лишь кроликов с исходной температурой 39-40°. Температуру в виварии и в лаборатории поддерживают на уровне 25±2°. Животные находятся в лаборатории по крайней мере в течение 16 ч до начала эксперимента. Опыты проводят в одно и то же время дня. Все вещества вводят внутривенно. ДЛК используют в дозе 50 мг/кг. Резерпин, освобождающий депонированный серотонин, введенный непосредственно перед инъекцией ЛСД, усиливает гипертермическое действие последнего и тормозит этот эффект, если его назначают за 24 ч до введения ДЛК (в силу истощения запасов серотонина в головном мозге). Эффект, аналогичный действию ДЛК, наблюдается при введении серотонина. Можно полагать, что феномен гипертермии связан с центральным действием высвобождаемого серотонина. Пентобарбитал и некоторые атарактики устраняют пирогенную реакцию (Piala е. а., 1959).

Каждое подопытное животное при этом тесте используют лишь однажды, так как попытки повторного воспроизведения гипертермии дают неустойчивые результаты (Elder, Shellenberger, 1962).

Для воспроизведения гипертермии у кроликов с успехом может быть использован и пирогенал, вводимый внутривенно в дозе 4 мг/кг (П. П. Денисенко. К, А. Лисицина, 1972).

 

Противокашлевые средства

 

Противокашлевая активность исследуемых веществ оценивается по данным экспериментальной фармакотерапии. Для воспроизведения кашля могут быть использованы различные фармакологические методики (некоторые общие свойства противокашлевых средств, выявляемые при многотестовом наблюдении на интактных животных, представлены в табл. 4).

Влияние на порог электрического раздражения гортани. Опыты проводят на собаках с предварительно имплантированными в стенку гортани электродами. Учитывают напряжение тока и частоту импульсов, вызывающих кашель умеренной интенсивности при раздражении в течение 1 с. Оценивают интенсивность кашля и величину порогового раздражения в различные периоды действия исследуемого вещества (Stefko, Benson, 1953).

Влияние на кашлевой эффект, вызываемый механическим раздражением трахеи (Tedeschi е. а., 1959). В трахею собаки вводят небольшой железный шарик (диаметром 3-4 мм). Затем на 3 с включается электромагнит и через 30 с подсчитывают число кашлевых движений, сделанных в течение 33 с (по данным пневмограммы). При каждом испытании такую процедуру повторяют пятикратно.

Противокашлевую активность определяют по изменению силы и частоты кашлевых движений. Сдвиги этих параметров легко поддаются статистической обработке.

Влияние на кашель, вызываемый аммиаком. Согласно методике Эллиса с соавторами (1963) определяют дозу вещества, полностью подавляющую кашель при трех и более пробах. Кошек наркотизируют внутрибрюшинным введением 45 мг/кг этаминала-натрия. Канюлируют трахею и сонную артерию. Исследуемые вещества вводят в бедренную вену. Кашлевые движения регистрируют на барабане кимографа легким пружинным рычагом. Аммиак как фактор, вызывающий кашель, дает наиболее постоянный эффект и поэтому применяется весьма широко. Аммиак испаряется из флакона, содержащего 7% NH₄OH, и через трехходовой кран направляется через трахею в легкие. Пары гидрата окиси аммония дают лишь в течение одного вдоха. Кашель обычно наступает немедленно после вдоха. Пробы проводят каждые 3 мин до получения трех или четырех контрольных реакций приблизительно одинаковой интенсивности и продолжительности. Затем внутривенно вводят исследуемые вещества и раздражения повторяют до получения прежней реакции. Кодеин, вводимый внутривенно в дозах не более 2 мг/кг, используется как стандарт, и его активность обозначается +3, если он полностью подавляет кашель. Если вещество полностью подавляет кашель в дозе 2 мг/кг или меньшей, то эффект равен +3. При торможении кашля кодеином в дозе 4 мг/кг его активность оценивается +2; если кашель при этой дозе подавляется лишь частично, то активность кодеина равна +1. При использовании этого теста активность дигидрокодеина была приблизительно равна активности кодеина.

Кашель, вызываемый лимонной кислотой. При этой методике воспроизведения кашля используют морских свинок (Charlier е. а., 1961). Животное помещают в цилиндрический стеклянный сосуд с трубками для введения и выведения аэрозоля. Трубка для выведения аэрозоля имеет боковое колено, соединенное с капсулой Марея для регистрации давления в сосуде. Винтовым зажимом, помещаемым на отводящую трубку выше бокового колена, чувствительность системы регулируется так, чтобы нормальное дыхание не регистрировалось, а колебания давления во время кашля записывались бы капсулой Марея.

Животное в течение 10 мин находится в атмосфере с 7% аэрозолем лимонной кислоты. Каждое животное исследуют до введения препарата с целью получения контрольных данных. Число кашлевых движений у них составляет в среднем 53 в 1 мин. Час спустя животным дают исследуемое вещество и через 30 мин снова воздействуют аэрозолем. Количество кашлевых движений, выраженное в процентах от исходной величины, является пока­зателем активности вещества. Кодеина фосфат, введенный в желудок, снижает кашлевые движения в. среднем на 51 % (в группе из 10 животных).

Кашель, вызываемый серной кислотой. Собак весом 7-10 кг, голодавших в течение 18-20 ч, помещают в специальный квадратный деревянный ящик (60×60×45 см³) со стеклянными окнами и обитой жестью внутренней поверхностью. С помощью распылителя со сжатым воздухом в ящик вводят легкие пары 0,5 М серной кислоты, Число кашлевых движений (в течение 4 мин) определяют с помощью микрофона, прикрепленного к трахее собаки. При первичном воздействии в двух контрольных пробах определяют 15-35 кашлевых движений. Противокашлевые средства назначают внутрь в желатиновых капсулах. Вычисляют процент интенсивности торможения числа кашлевых движений по сравнению с исходными контрольными данными (Chen е. а., 1960).