Наркотические и снотворные вещества

 

В процессе наблюдения за действием исследуемых веществ на интактных мышах и изолированных органах выявляется ряд эффектов, присущих веществам с наркотической активностью (см. табл. 4).

При изучении действия веществ, вызывающих ингаляционный наркоз, мышей помещают под стеклянный колпак или в небольшой контейнер (емкостью до 20-30 л) с вентилятором для смешивания паров исследуемых ве­ществ. Объем паров вещества в 1 л при стандартной температуре и давлении может быть высчитан по формуле Mason (1964):

Устанавливается максимальный объем паров, не вызывающий бокового положения у животных в течение 20 мин., и объем паров, приводящий к летальному исходу в течение 20 мин. В последнем случае отмечают состояние животных в период с момента контакта его с наркотиком до принятия бокового положения, с момента потери рефлексов положения до полной анальгезии (отсутствие реакции на укол в надкостницу) и в терминальную стадию. Особое внимание обращают на такие тесты, как рефлексы положения, болевая реакция, роговичный и. зрачковый рефлексы. У крупных животных в бокс можно поместить только голову, что позволяет исследовать некоторые тесты (флексорный ипсилатеральный рефлекс и др.) без нарушения постоянства концентрации паров во вдыхаемом воздухе (рис. 4). С аналогичной целью может быть использована подача летучих наркотических веществ с по­мощью маски. Для проведения динамических длительных наблюдений могут применяться устройства с рециркуляцией и очисткой воздуха (Raventos, 1956). Однако приборы, используемые в этих случаях для дозирования ве­ществ, вызывающих ингаляционный наркоз, весьма сложны и требуют скрупулезной предварительной калибровки перед использованием.

 

 

Рис. 4. Схема камеры для изучения воздействия летучих веществ (М. Л. Рылова, 1962).

 

Вслед за определением наркотического эффекта и его терапевтической широты исследуют местное раздражающее действие наркотика, его влияние на сердечно-сосудистую систему, действие на паренхиматозные органы и т. д.

Общепринятые методы первичного фармакологического исследования довольно полно представлены в работе Р. А. Альтшулера (1962), посвященной фармакологии фторотана.

Следует, однако, отметить, что первичный отбор летучих наркотических средств не представляет больших трудностей и необходимость в нем практически возникает довольно редко, в связи с чем подробное описание методов фармакологического исследования этой группы веществ не представляется целесообразным.

Нелетучие наркотические средства. Первичный отбор нелетучих наркотических, как и снотворных веществ, с достаточной достоверностью осуществляется при общем скриннинге на мышах (см. табл. 4). Дальнейший этап фармакологического исследования преследует задачи определения токсичности, широты терапевтического действия и продолжительности эффекта.

Определение широты терапевтического действия веществ, вызывающих не ингаляционный наркоз. Крысам одного пола, весом 180-200 г внутривенно вводят препарат в объеме 1 мл раствора в течение 1 мин. Определяют минимальную дозу, вызывающую боковое положение крыс, и дозу, приводящую к остановке дыхания в течение 20 мин наблюдения. Каждую дозу изучают на группе животных, состоящей из 6 крыс.

Отмечаются также время от момента принятия бокового положения и исчезновения болевой реакции (раздельно) до появления двигательной активности (длительность сна) и реакции на сжатие лапы (длительность анальгезии). Для более точного определения продолжительности действия снотворных и веществ, вызывающих неингаляционный наркоз, используют методику комплексного наблюдения на собаках. Объем исследования на собаках определяется степенью развивающейся непосредственно после инъекции вещества общей депрессии. Если собака в состоянии передвигаться, наблюдения ведут до появления атаксии. Отмечают спонтанную активность, рефлекс положения головы.

Если собака теряет способность поднимать голову и передвигаться, ей вводят эндотрахеально трубку и проводят исследования по тестам в указанной ниже последовательности.

Мигательный рефлекс – сокращение круговой мышцы глаза – вызывают при легком ударе указательным пальцем по внутреннему краю глаза. Глотательный рефлекс определяют при широком раскрытии челюстей собаки и потягивании за язык. Эндотрахеальный рефлекс вызывают энергичными движениями трубки, введенной в трахею. Он проявляется спастическими со­кращениями мышц живота и диафрагмы. Степень разгибания конечности при постукивании по сухожилию четырехглавой мышцы характеризует состояние коленного рефлекса.

При быстром и резком расширении анального сфинктера регистрируются дыхательный (изменение дыхания) и двигательный (движение конечности) рефлексы. Исследование повторяют каждые 5 мин в течение первого часа после введения вещества, каждые 10 мин в течение второго часа и затем через каждые 15 мин. В период восстановления функций трубку, введенную в трахею, удаляют после 2-3 положительных тестов.

После того как у собаки появляется способность держать голову, определяют лишь такие рефлексы, которые еще не стали положительными.

Данные исследования барбитала-натрия, тиопентала-натрия, трихлорэтанола, паральдегида и этанола (Мау-nert, 1960) показывают, что степень расстройств может быть удовлетворительно оценена путем использования следующей шкалы, характеризующей интенсивность действия: 0 - отсутствие атаксии; 1 – способность ходить с явлениями атаксии; 2 – рефлекс положения головы сохранен; 3 – сохранены глотательный или двигательный рефлекс, собака подвижна; 4 – сохранены один или более из следующих рефлексов – мигательный, роговичный, эндотрахеальный; 5 – отсутствуют все указанные выше рефлексы, коленный рефлекс сохранен.

 

 

Рис. 5. Установка для многоканальной актографии.

 

Оценка стадии депрессии производится по симптоматике низшей фазы интенсивности действия, несмотря на возникновение или сохранность некоторых признаков более высокого уровня депрессии.

Определение глубины и продолжительности действия снотворных с помощью актографии (Э. Г.Цейтлин, Т. А. Бутцева, 1965). Крысу, получившую парентерально или внутрь исследуемое вещество, помещают в актограф с электромагнитным датчиком — сейсмографом (рис. 5). Предварительно в течение 10 мин регистрируют актограмму, затем каждые 30 мин актограмму регистрируют повторно в течение 10 мин.

Начиная с конца первого часа, в момент актографии включают зуммер (в течение 5 с) с постоянно возрастающей силой звучания (через 30 с повторно) до появления двигательной реакции, которая автоматически приводит к выключению зуммера.

Указанная методика позволяет проводить наблюдения во время естественного физиологического сна и может быть использована для оценки действия транквилизаторов. -Изготовление автоматического командного устройства для запуска актографа и системы включения и блокирования зуммера не представляет трудностей для любой электромеханической лаборатории.

 

Нейролептические средства

(транквилизаторы, атарактики)

 

Методы выявления специфической активности больших и малых транквилизаторов имеют много общего с первичным фармакологическим исследованием веществ, вызывающих неингаляционный наркоз, и снотворных средств. На начальных этапах скриннинга все эти вещества проявляют сходное действие (см. табл. 4), в частности, фенобарбитал может вызвать почти все виды активности, характерные для транквилизаторов. В связи с этим обстоятельством особый интерес представляет дифференциация действия веществ, вызывающих депрессию по центральному типу и выявление специфических черт активности транквилизаторов. Для этого предложен ряд методик (Е. А. Щелкунов, 1968, и др.) и большое число других специальных тестов. Следует, однако, отметить, что до настоящего времени нет удовлетворительных методик для выявления мягкого транквилизирующего, атарактического и антифобического действия препаратов и, следовательно, нет уверенности в том, что все полезные для лечебной практики вещества выявляются при скриннинге. Определенный интерес в аспекте развития методических приемов исследования представляют тесты, оценивающие сдвиги сложных форм поведения и условно-рефлекторной деятельности. Однако при современном уровне изучения природы патологических расстройств высшей нервной деятельности ценность таких тестов в применении к клинической практике остается дискутабельной.

Это обстоятельство подчеркивает важную роль сопоставления активности новых препаратов со спектром биологической активности уже хорошо изученных и клинически испытанных препаратов — эталонов.

При первичном фармакологическом исследовании наиболее часто используется индикация следующих признаков фармакодинамики транквилизаторов: 1) динамики сдвигов поведения и двигательной активности подопытных животных; 2) потенцирования действия барбитуратов и анальгетиков; 3) гипотермии; 4) влияния на условно-рефлекторную деятельность; 5) снижения агрессивности поведения животных; 5) торможения действия средств, возбуждающих центральную нервную систему.

Поведение и двигательная активность. Для первичного отбора нейроплегических средств используется группа тестов, которая позволяет сделать предположительное заключение о возможной нейроплегической активности. Предварительно исследователь оценивает результаты наблюдений за общим действием препарата в опытах на интактных животных, однако это не исключает некоторого дублирования тестов, используемых в нейрофармаколо-гической части скриннинга.

Поведение. Транквилизаторы (особенно в больших дозах) обычно вызывают состояние успокоения или пассивное поведение мышей. Наличие или отсутствие успокоения у мышей, получивших исследуемое вещество, про­токолируется (эффект проявляется наиболее постоянно при дозах, близких к LD₅₀).

Актография. Для регистрации двигательной активности животных могут быть использованы актографы различных систем (Э. Г. Цейтлин, Т. А. Бутцева, 1965; К. С. Раевский, В. А. Тимофеев, 1965; В. Г. Малаховский с соавторами, 1969). Регистрация актограммы проводится в течение 10 мин в исходном состоянии и через 5 и 30 мин после введения вещества. Определенный интерес может представлять регистрация двигательной активности в це­лом всей группы мышей с использованием фотосчетчиков (Dews, 1953). Мышей помещают в индивидуальные клетки за 1 – 2 ч до внутрибрюшинной инъекции препарата. Через 50 мин после инъекции мышей переводят в счетный бокс. Группа состоит из 5 животных, которым введена одна и та же доза. Прерывание луча света двигающимися животными фиксируется фотоэлементом и суммируется на счетчике. Подсчет продолжается в течение 90 мин. Эффект препарата выражается в процентах по отношению к активности контрольной группы. Например, фенобарбитал (200 мг/кг) вызывал снижение активности мышей до 40% контрольного уровня, гексобарбитал (70 мг/кг) – до 20%, в то время как фенобарбитал в дозе 100 мг/кг повышал активность до 190% исходного уровня (Kuhn, /Van Maanen, 1961).

Проба с вращающимся стержнем. Мышей помещают на гладкий деревянный стержень диаметром 2 см, вращающийся со скоростью 10 об/мин. Круговые секции делят стержень на 10 отделов, что позволяет проводить исследование на 10 мышах одновременно (рис. 6). Контрольные мыши, как правило, остаются на стержне более 30 с. Регистрируют число мышей, падающих со стержня в течение 30 с. При необходимости вычисляется ED₅₀ для каждого отрезка времени после введения исследуемого вещества. По методике Janssen с соавторами (1960) исследуемых мышей помещают на стержень, имеющий диаметр 32 см и вращающийся со скоростью 5 об/мин. Для опыта отбирают животных, остающихся на стержне 3 и более минуты в двух испытаниях. Каждой группе из 8 мышей затем подкожно вводят исследуемое вещество и помещают на стержень через 30, 60, 90, 120 и 150 мин после введения препарата. Если животному не удается удержаться на стержне более 3 мин как минимум 2 раза, тест расценивают как положительный, т. е. налицо угнетение двигательной активности животных.

 

Рис. 6. Схема установки для оценки координации моторной деятельности.

Тест на мышечную координацию (сцепление). Мышей подвешивают за передние лапы к металлической проволоке, натянутой горизонтально. Конт­рольные мыши в течение 5 с цепляются за проволоку всеми 4 лапами. Отмечают число мышей, которые не способны коснуться сетки по крайней мере одной из задних лап. ED₅₀ (на 30-й мин после введения вещества) подсчи­тывают обычным путем. Этот простой тест может быть использован в программе слепого скриннинга.

Рефлексы положения. Группе из 10 белых мышей-самок подкожно вводят исследуемое вещество. Через 15, 30, 60, 120, 180, 240 и 300 мин каждое животное осторожно кладут на бок на рифленую поверхность листа белой жести, поставленного под углом 30°. Если животное остается на боку в течение 30 с, отмечают потерю рефлексов положения. Вычисляют ED₅₀ для различных интервалов времени действия препарата (Janssen, 1959).

Тест с изменением угла наклона поверхности. Методика используется для оценки координации движений при воздействиях фармакологических веществ (Friedman, Ingalls, 1960). Устройство состоит из доски с рифленой поверхностью, наклон которой измеряется по шкале. После введения препарата крысу помещают на плоскость, которая медленно поднимается до тех пор, пока животное не соскальзывает вниз. Эта процедура повторяется 5 раз для установления критического угла наклона. Крысу ставят в стандартную позицию — головой к приподнимаемому краю поверхности. Подъем производят равномерно со скоростью 18°/с Разница между углом скольжения в опыте и контроле может быть использована для оценки эффекта. Условно принятая константа различия может быть основанием для деления эффектов на «положительные» и «отрицательные» с последующей их количественной оценкой.

Мышечная гипотония является одним из первых проявлений угнетения центральной нервной системы в опытах на мышах. Описываемый тест может быть также использован как специфическая проба для выявления миорелаксантов и показан для начального скриннинга антагонистов стрихнина. Исследуемое вещество назначают через рот в возрастающих дозах 10 взрослым мышам (линии Webster —Swiss). Тонус мышц определяют неспособности мышей держаться на сетчатой поверхности вращающегося цилиндрического барабана. Вычисляют ED₅₀, вызывающую мышечную гипотонию. Гипотония может быть обнаружена по этому тесту при введении веществ в дозах менее 10% LD₅₀. (Hassert е. а., 1961).

Влияние на работоспособность (плавание). Этот тест обнаруживает неблагоприятный эффект веществ на двигательную активность, развивающуюся главным образом за счет нарушения координации движений. Проба может быть использована для скриннинга седативных средств, транквилизаторов с целью изучения действия веществ на предельные физические нагрузки. Используют мышей обоего пола весом 18—22 г. Плавательный бассейн имеет следующие размеры: длина 50 см, ширина 30 см, высота 25 см, глубина в резервуаре 18 см. Температура воды поддерживается на постоянном уровне (20+0,5°), так как самые незначительные отклонения температуры могут резко влиять на продолжительность плавания мышей. Для укорочения времени плавания введением сжатого воздуха создают искусственные волны. Вещество вводят подкожно 5 мышам, которых затем помещают в резервуар. Мышь считается обессиленной при погружении под воду более чем на 7 секунд. По истечении этого времени мышей немедленно извлекают из воды, в противном случае они выживают довольно редко. Регистрируют время плавания. Среднее время плавания для контрольных животных по Jacob, Michaud (1961) равняется 5-6 мин, стандартное отклонение от средней для 40 групп по 5 мышей – 0,6. Принятый лимит был рассчитан с помощью индекса асимметрии и равнялся 4,6-7,4 мин при р = 0,01. Следовательно, если среднее время плавания в. группе из 5 мышей было ниже 4 или выше 8 мин, оно расценивалось как существенно измененное. В заключение следует, однако, отметить, что этот метод дает значительный разброс результатов и требует большого количества животных для получения достоверных данных (М. Л. Рылова, 1964).

Тест смыкания век. Этот тест используется для выявления начальной стадии седативного действия исследуемых веществ в связи с тем, что при торможении центральной нервной системы, как правило, наблюдается не­которое расслабление век (Janssen, 1961). Отбирают 8 пар взрослых крыс-самцов. Одна крыса из каждой пары получает подкожно исследуемое вещество, другая — растворитель.

Морфин, анальгетики и некоторые стимуляторы центральной нервной системы вызывают экзофтальм, тогда как депрессанты центральной нервной системы приводят к некоторому сужению век. Оценка теста довольно субъ­ективна, но методика может служить в качестве первичного теста при отборе депрессантов, а также может быть использована для сравнения испытываемых веществ с другими уже известными депрессантами.

Роговичный и зрачковый рефлексы используют для выявления угнетающего действия депрессантов па центральную нервную систему. Десяти взрослым крысам подкожно вводят исследуемое вещество.

Роговичный и зрачковый рефлексы определяют через 15, 30 мин, 1, 2, 4 и 8 ч. Определяют ED₅₀ для изучения времени действия исследуемого вещества (ED₅₀ морфина для роговичного рефлекса составляет 4 мг/кг).

Соотношение роговичного и зрачкового рефлекса у мышей используется при скриннинге атарактиков, снотворных и центральных мефенезинопо-добных миорелаксантов[1] (Within е. а., 1959.) для их дифференциации.

Случайно отобранным мышам (по 10 в группе, половина – самки) вводят исследуемое вещество в постепенно возрастающих дозах. Для определения роговичного рефлекса прикасаются тонким волосом к роговице и конъюнктиве. Если раздражение не вызывает ответа в течение секунды, фиксируют отсутствие рефлекса. Торможение зрачкового рефлекса контролируют при раздражении наружного слухового прохода электрическим током. Изучение рефлексов удобно проводить, помещая животных в специальные клетки с выведенными наружу головой и хвостом. Для количественной оценки используют три фиксированные дозы. Вычисляют соотношение ED₅₀, тормозящей роговичный рефлекс, к ED₅o, тормозящей зрачковый рефлекс. Атарактики блокируют зрачковый рефлекс в малых дозах, тогда как роговичный не изменяется даже при введении доз, близких к летальным. Для барбитуратов и мианезина это соотношение составляет соответственно 0,6 и более 1.

Рефлекс отдергивания головы наблюдается у мышей при прикосновении к усам (Wylie, 1959). Если мышь после введения ей препарата теряет способность отдергивать голову по крайней мере на протяжении 5 секунд, рефлекс считается утраченным. Исследуют ряд доз на различных группах мышей для определения ED₅₀.-Седативные вещества не влияют на рефлекс отдергивания головы. Производные фенотиазина имеют ED₅₀ на уровне 5-15 мг/кг (Wylie, 1959).

Время ориентации. Группу из 10 мышей помещают в прямоугольную клетку, находящуюся в наклонном положении, из который мыши могут выпрыгнуть. Определяют ED₅₀ – дозу, тормозящую у 50% мышей реакцию ускользания из клетки.

Потенцирование действия барбитуратов и анальгетиков. Барбитураты. Исследуемые вещества назначают за 30 мин и более перед внутрибрюшинным введением 30 мг/кг этаминала-натрия. Каждые 5 мин на протяжении 1 ч регистрируют число животных, у которых препарат вызывает атаксию, анестезию и седативное действие. Внутрибрюшинное введение ED₅₀ атарактика после прекращения действия этаминала-натрия может вызвать повторный гипнотический эффект. Так, в частности, время сна контрольных животных, получивших гексобарбитал, составляло 44±6 мин. Аминазин в дозе 5 мг/кг вызывал увеличение продолжительности сна до 111 минут; ипразид (50 мг/кг) —до 163 мин (Kuhn, Van Maanen, 1961).

Потенцирование действия морфина. Используется тест с подогретой пластинкой с учетом сдвигов времени реакции (см. стр. 39).

Гипотермия. Тест проводят на мышах. Каждую дозу исследуют на 6 животных. Температуру регистрируют в сигмовидной кишке с помощью термисторного термометра каждые 30 мин. Температура тела контрольных мышей, измеряемая в течение 6 часов, обычно колеблется в пределах 37-38,2°. Транквилизаторы вызывают понижение -температуры тела до 30° и ниже пропорционально увеличению дозы. Эксперименты проводят в помещении с постоянной температурой (25°).

Влияние на условнорефлекторную деятельность. Торможение ситуационного рефлекса. В этом случае крысам необходимо пробежать двухметровый путь к воде (Негг е. а., 1961). Дорожку шириной 12 см делят двумя перегородками с отверстиями на три части: исходная (30 см), промежуточная (120 см) и бокс «подкрепления» с водой (50 см). Регистрируют длительность латентного периода (время с момента помещения крысы в стартовый бокс до выхода из первого отверстия) и время пробежки (от момента перехода в промежуточный бокс до входа в бокс «поощрения», где животное пьет воду). Предварительно животных тренируют в течение 6-10 дней, пока среднее время пробежки не станет равным 1-2 с и регистрируют время двух контрольных пробежек до введения исследуемого вещества. Каждую дозу вещества исследуют на 10 животных через 30 мин. Наиболее лабильным является латентный период. Эффект выражается в процентах животных, у которых скрытый период увеличивается до 10 с и более.

Эффективные дозы имизина и аминазина, тормозящие пробежку, составляют соответственно 9,8 и около 3 мг/кг.

Интересно отметить, что ED₅₀ имизина по этому тесту меньше ED₅₀ по тесту «вращения» более чем в 5 раз, тогда как для аминазина эти дозы почти одинаковы (Негг е. а., 1961). Таким образом, сопоставление этих тестов открывает некоторые возможности, дифференциации антидепрессантного и транквилизирующего эффектов.

Рис. 7. Схема камеры для выработки условных оборонительных рефлексов у белых мышей (А. А. Голубев, 1959).

 

Торможение условных оборонительных рефлексов. Вырабатывается условный оборонительный рефлекс на звук зуммера (длительность звучания 10 с) – взбирание на расположенную в центре клетки деревянную площадку (рис. 7). Безусловный раздражитель – ток, пропускаемый через металлическую решетку пола клетки. Характеристика тока: 0,1 мл, 40 В, 60 Гц, длительность раздражения не более 30 секунд.. После выработки стойкого условного рефлекса на зуммер крысам (по 10 животных в группе) вводят внутрибрюшинно исследуемые вещества. Затем каждый час в течение 5 ч изучают ответ на условный раздражитель по средним данным трех проб. Торможение условного рефлекса является показателем активности транквилизаторов. Для количественного выражения зависимости между силой и длительностью действия может быть использовано соотношение ED₅₀ через 5 и 2 ч после введения препарата (Piala e. a., 1959).

При первичном фармакологическом исследовании транквилизаторов широко используются и другие варианты выработки условных оборонительных рефлексов (Knoll, Knoll, 1958; Winter, Flotaker, 1951, и др.). Автоматизация методики групповой выработки условных рефлексов у крыс (Н. П. Сперанская, В. А. Криволапов, 1965) и регистрации параметров поведения крыс (Т. А. Клыгуль, В. А. Криволапов, 1966) снижает затраты времени и обеспечивает максимальную объективность получаемых данных.

Снижение агрессивности поведения животных. Тест подавления агрессивности мышей благодаря своей высокой чувствительности получил довольно широкое распространение при отборе транквилизаторов, несмотря на то что методика условных рефлексов является, несомненно, методом выбора при скриннинге депрессантов центральной нервной системы.

Влияние на агрессивность мышей, возникающую при их трехнедельной изоляции. Мышей-самцов не моложе 4-недельного возраста изолируют в одиночных клетках на 3 недели (Gen е. а., 1959). По истечении указанного периода около 67% мышей становятся агрессивными и нападают на помещенного к ним самца. Мышей, активно атаковавших самца в течение 5 мин, отбирают для дальнейших наблюдений.

Определяют агрессивность животных до введения веществ, каждый час в течение 4 ч после введения и затем до восстановления реакции. Торможение агрессивности является показателем силы транквилизирующего действия.

Торможение агрессивности мышей-самцов, изолируемых в течение ночи, может быть также использовано для тестирования транквилизаторов, однако агрессивность за этот период изоляции приобретают лишь около 10% мышей (Janssen е. а., 1960). Используют взрослых беспородных мышей весом 23-33 г в группах по 5 животных. Вещества назначают подкожно в дозах, возрастающих в геометрической прогрессии.

Мышей изолируют в индивидуальных деревянных клетках (30×15×10 см) на 16 ч, затем в клетку помещают другую мышь из бокса общего содержания. Процедуру повторяют через 6 ч. Используют лишь мышей, агрессивно настроенных в обеих пробах в течение минуты. Мышей-«бойцов» отбирают для опыта, если они проявляют агрессивность в каждом из четырех испытаний в течение 2 дней. Все подопытные животные получают изотонический раствор натрия хлорида или исследуемого вещества: отсутствие агрессивности через 1, 4 или 25 ч после инъекции расценивают как проявление действия введенного вещества. Каждую дозу вещества исследуют на 10 мышах. Дозу, тормозящую агрессивность у 50% «бойцов», определяют как ED₅₀. Результаты исследования ряда нейротропных веществ с помощью этого теста подробно описаны в работе Janssen с соавторами (1960).

Электрическая стимуляция мышей. Пару мышей весом 20-30 г помещают на металлические пластины и закрывают стеклянным колпаком. Для раздражения используют слабый электрический ток (прямоугольные импульсы 0,5 м/с, 20 Гц, 60 В), вызывающий приблизительно у половины мышей две или три агрессивных реакции в минуту. Этих мышей отбирают для дальнейшего исследования. Вещества назначают за 30 мин до раздражения электрическим током. Отсутствие реакции при раздражении в течение минуты расценивают как отрицательную пробу. При необходимости сравнительной оценки препаратов вычисляют ED₅₀ – дозу, необходимую для подавления агрессивных ответов в 50% случаев. Интересные материалы о результатах и перспективах использования теста угнетения агрессивности мышей при фармакологическом скриннинге приведены в обзоре Теdeschi с соавторами (1959).

Сравнительная характеристика различных форм воспроизведения агрессивности белых мышей дана в работе Л. Г. Полевого (1967), показавшего целесообразность использования в ходе отбора транквилизаторов как спон­танной агрессивности, так и вызываемой электростимуляцией.

Торможение действия средств, возбуждающих центральную нервную систему. Торможение возбуждающего действия морфина. Предварительно отбирают кошек, отвечающих, как правило, возбуждением на подкожное введение 20 мг/кг морфина гидрохлорида. Затем через неделю исследуют влияние испытуемого вещества на этот синдром.

Антикоразоловый эффект. Коразол обладает большой широтой терапевтического действия и расценивается как один из мягких стимуляторов центральной нервной системы. Варьирование доз центральных депрессантов при использовании этого теста позволяет обнаруживать не только седативный, гипнотический и наркотический эффекты, но и в определенной степени транквилизирующее действие. Пробу проводят на крысах одного пола, весом 80-160 г, получающих испытуемый препарат внутрибрюшинно или внутрь. Через 30 мин внутримышечно вводят коразол. Животные находятся под наблюдением в течение 30 мин. Подергивание головы и спазм мышц головы свидетельствуют о минимальном судорожном действии. Трем группам крыс (по 10 животных) вводят в возрастающих дозах коразол (20-30% судорожной дозы) для определения ED₅₀. Результаты опытов обрабатывают по методу Миллера и Тэйнтера. График позволяет определить сдвиги ED₅₀ коразола или его пороговой дозы, вызывающей судороги, в каждую из трех стадий депрес­сии (гипнотическую, базисную и наркотическую). Следует отметить, что для применения метода требуется большое число животных и он довольно трудоемок. Его главное достоинство состоит в возможности довольно точного со­поставления активности исследуемого вещества с препаратом-эталоном (табл.6).

 

Таблица 5

АНТИКОРАЗОЛОВЫЙ ЭФФЕКТ НЕКОТОРЫХ ДЕПРЕССАНТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА МЫШАХ (по Kuhn, Maanen, 1961)

¹    Время после введения депрессантов.

²    В числителе – число животных, у которых развились судороги, в знаменателе – общее число использованных животных.

 

Торможение действия никотина. Никотин тартрат вводят мышам в вену хвоста в дозе 200 mг/кг в водном растворе. Клонические судороги развиваются немедленно, через 5-10 с наступает фаза тонического разгибания конечностей и смерть животного.

Исследуют угнетающее влияние нейроплегических препаратов на клонический и тонический компоненты судорог.

Торможение действия кокаина. Изучают тормозящее влияние депрессантов на «круговые» движения, вызываемые у мышей внутрибрюшинным введением кокаина гидрохлорида в дозе 55 мг/кг. ED₅₀ по этому тесту для некоторых депрессантов следующие: аминазин – 4,3 мг/кг, барбитурат натрия – 140 мг/кг, мепротан – 120 мг/кг (Kuhn, Маапеп, 1961).

Торможение феномена Штрауба. Мышам вводят внутримышечно морфина гидрохлорид в дозе 20 мг/кг. Регистрируют реакцию хвоста каждые 5 мин в течение 50 мин согласно следующей шкале: 1 – подъем на 45°; 1,5 – на 45-90°; 2 – на 90°; 2,5 – на 90-180°; 3 – положение хвоста под углом 180°.

Для вычисления ED₅₀ исследуемого препарата каждую дозу тестируют на 20 мышах. Среднюю величину и стандартную ошибку вычисляют по данным 10 наблюдений. Для контрольной группы животных оценка положения хвоста по указанной выше шкале составляет 1,52+0,10. При внутрибрюшинном введении атропина (5 мг/кг) и аминазина (2,5 мг/кг) за 15 мин до инъекции морфина этот показатель равняется соответственно 1,26 и 0,83.

Фенаминовая проба. Белым мышам-самцам внутрибрюшинно вводят исследуемое вещество, контрольным животным — изотонический раствор натрия хлорида. Спустя час мыши получают 6 мг/кг фенамина. С помощью актографии регистрируют двигательную активность в течение 10 мин с интервалами в 30 мин на протяжении 2 ч.

Проба может быть также проведена на крысах, у которых фенамин вызывает непроизвольные жевательные движения. Крыс-самцов помещают в изолированные клетки со стружками на полу и окнами для наблюдения. Сразу после подкожного введения исследуемого вещества каждая крыса получает внутривенно фенамин в дозе 10 мг/кг. Через 55 и 65 мин регистрируют наличие или отсутствие типичных для действия фенамина жевательных движений. У контрольных крыс эта проба бывает положительной в 95% случаев. При необходимости определяют ED₅₀ испытуемого вещества,

Кроме указанных возбуждающих центральную нервную систему средств, при скриннинге транквилизаторов применяют ряд других препаратов типа йохимбина (Lang, Gersherk, 1963), иминодипропионитрила (Turner, 1966) и др.

* * *

Отсутствие специфических тестов для выявления активности транквилизаторов, особенно так называемых малых транквилизаторов, является причиной использования многочисленных приемов тестирования физиологической активности этой группы веществ. Одной из попыток использования группы тестов для дифференциации действия центральных депрессантов является схема Bastian (1961), при которой на одних и тех же животных определяют двигательную активность, пороговую дозу коразола, вызывающую судороги, экстензорную фазу судорог и сдвиги температуры тела. Весьма перспективным представляется сравнительное исследование спектров фарма­кологической активности транквилизаторов (Ю. И. Вихляев с соавт., 1971).

Такого рода данные представляют существенный интерес для клиники, однако подобные исследования выходят за пределы задач первичного отбора средств транквилизирующего действия. Ряд исследователей пропагандируют введение в схему скриннинга транквилизаторов специальных биохимических тестов ЭЭГ (Ю. В. Буров, К. С. Раевский, 1968) и некоторых других дополнительных методик выявления их активности.

Следует специально отметить, что в скриннинге транквилизаторов в настоящее время важную роль играет токсикологическая характеристика исследуемых веществ и сопоставление их эффектов с уже широко известными препаратами. Уточнение же возможного лечебного действия новых препаратов этого типа на современном этапе является всецело задачей клинических исследований. Последние представляют наиболее достоверный, адекватный и после токсикологических исследований практически безопасный для больного путь оценки эффективности так называемых психофармакологических средств. С этой точки зрения большой интерес представляют такие методики, как исследование влияния атарактиков на эмоцию страха у человека (А. К. Сангайло, М. П. Вихриева, 1967) и другие клинико-физиологические тесты.