Положительный результат - цвет субстрата меняется на красный (от светлого до вишневого)
Отрицательный результат - цвет бледно-розовый или не меняется
Качественный бактериологический уреазный тест
Приготовление реактивов
Растворяют в 1 л дистиллированной воды 1 г пептона, 1 г декстрозы, 5 г NaCI, 0.4 г KH2P04, 20 г мочевины, 1 мл 1% раствора фенола красного, 0.1 мл Твин 80 (или 10% раствора Твин 80). Конечный рH доводят NaOH до 5,8±0,1. Раствор стерилизуют фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные пробирки по 1,5 мл. Хранение при 5°C до 2 месяцев.
Контроли
В качестве положительного контроля используется M. scrofulaceum или M. fortuitum.
Отрицательным контролем служит незасеянная пробирка или уреаза-негативная M.gordonae
Методика
Полную лопатку свежей культуры добавляют в мочевинный бульон, инкубируют при 37°C в присутствии CO2. Результаты учитывают на 1, 3 и 7 день.
Результаты и их интерпретация
Положительный результат - цвет меняется с желтого до темно-розового или красного.
Отрицательный результат - цвет не меняется.Светло-розовый цвет субстрата регистрируется как сомнительный (или отрицательный) результат и требующий повторения исследования. Рекомендуется использовать стандарт цвета нитратредуктазного теста.
Культуральные методы идентификации микобактерий
Для идентификации микобактерий туберкулеза может быть использовано определение способности к росту при 37°С на среде Левенштейна-Йенсена, содержащей паранитробензойную кислоту (ПНБ-тест) либо салициловокислый натрий, на выбор лаборатории.
Тест с паранитробензойной кислотой (ПНБ-тест)
Принцип метода. Паранитробензойная кислота оказывает ингибирующее действие на рост микобактерий туберкулеза.
Приготовление среды с паранитробензойной кислотой.
К 50 мг паранитробензойной кислоты добавляют 5 мл дистиллированной воды и примерно 20 капель (1,0 мл) 4% едкого натра до pH 8. После полного растворения ПНБ добавляют 2–3 капли 6% соляной кислоты, доводя pH до 7,0. Полученный раствор добавляют к 95 мл предварительно профильтрованной яичной среды, получая таким образом конечную концентрацию паранитробензойной кислоты в среде 500 мкг/мл. Свертывание среды производят при 85°С в течение 45 минут
Методика
Производят посев в две пробирки со средой Левенштейна-Йенсена, одна из которых содержит паранитробензойную кислоту в концентрации 500 мкг/мл, другая – контрольная без паранитробензойной кислоты.
В процессе инкубации при 37°С пробирки исследуют на 3-й, 7-й, 14-й и 21-й день.
Результаты и их интерпретация
Положительный результат - наличие роста в контроле и на среде с ПНБ
Отрицательный результат - рост только в контроле.
Тест с салициловокислым натрием
Принцип метода. Микобактерии комплекса M. tuberculosis не обладают способностью утилизировать салициловокислый натрий, который оказывает на рост микобактерий туберкулеза угнетающее воздействие. Это свойство салицилата натрия используется как один из методов дифференциации M. tuberculosis и нетуберкулезных микобактерий.
Приготовление среды с салициловокислым натрием
500 мг салициловокислого натрия растворяют в 5 мл дистиллированной воды, получая разведение 100000 мкг/мл. 1 мл полученного раствора добавляют к 99 мл среды Левенштейна-Йенсана до свертывания, получая таким образом конечную концентрацию салициловокислого натрия 1000 мкг/мл. Свертывание среды производят при 85°С в течение 45 минут
Методика
Производят посев в две пробирки со средой Левенштейна-Йенсена, одна из которых содержит салициловокислый натрий в концентрации 1000 мкг/мл, другая – контрольная без салициловокислого натрия.
В процессе инкубации при 37°С пробирки исследуют на 3-й, 7-й, 14-й и 21-й день.
