Результаты и их интерпретация. Положительный результат - субстрат меняется от розового цвета к красному.

Положительный результат - субстрат меняется от розового цвета к красному.

Отрицательный результат - субстрат остается янтарного цвета до 10 дня инкубации.

Предосторожности

Иногда в янтарной жидкости появляется красный осадок. Это положительная реакция нейтрального красного, но отрицательный тест на гидролиз Твина 80. Положительный гидролиз регистрируют, когда вся жидкая среда меняет цвет от бледно-розового до красного.

В редких случаях во время инкубирования супернатант белеет. В этом случае тестирование необходимо повторить. В случае повторного посветления регистрируют отрицательный результат.

Пиразинамидаза

Принцип метода. Тест основан на способности M tuberculosis в течение 4-х дней дезаминировать пиразинамид до пиразиновой кислоты и аммония, что указывает на наличие пиразинамидазы. Это исследование помогает такжеотличить M marinum (положительный результат до 4 дней) от M kansasii (отрицательный результат), и ниацин-положительные штаммы M. bovis от M. tuberculosis и M avium комплекс. У M. bovis пиразинамидаза отрицательна и на 7 день, тогда как M. tuberculosis и M avium комплекс дают положительный результат уже на 4 день. Тест применяется как дополнительный для дифференциации M. tuberculosis от M. bovis.

Реактивы

Среда для субстрата

Растворяют 6,5 г основы среды Дюбуа (Dubos) в 1 л дистиллированной воды. Добавляют 0,1 г пиразинамида (его можно заменить пиразиновой кислотой в том же количестве), 2,0 г пируват натрия, и 15,0 г агара. Подогревают до растворения агара и разливают в пробирки по 5 мл. Автоклавируют в течение 15 минут при 121°С. Остужают до застывания в вертикальном положении. Хранят в холодильнике в течение нескольких месяцев.

1% сульфат аммонийного железа

Готовят 1% раствор сульфата аммонийного железа сразу перед использованием: к 0,1 г сульфата аммонийного железа добавляют 10 мл дистиллированной воды.

Контроли

В качестве положительного контроля используют M. avium комплекс.

В качестве отрицательного контроля используют засеянную пробирку с M.bovis или M.kansasii.

Методика

Добавляют на поверхность среды двух пробирок полную лопатку 2-3 недельной культуры микобактерий, инкубируют при 37°C.

Через 4 дня добавляют 1,0 мл свежеприготовленного 1% раствора сульфата аммонийного железа к исследуемой культуре, контролю стандарта цвета, положительному и отрицательному контролям.

Оставляют пробирки на 30 минут при комнатной температуре, затем регистрируют покраснение среды. Среда приобретает розовый цвет, что свидетельствует о ферментативном гидролизе пиразинамида до свободной кислоты. Цвет в исследуемой пробирке легко определить на белом фоне при комнатном освещении.

Для минимизации контаминации нестерильного раствора сульфата аммонийного железа пробирки с отрицательным результатом помещают на 4 часа в холодильник и проверяют цвет среды (покраснение).

Если на четвертый день результат отрицательный или сомнительный, повторяют тестирование со второй пробиркой. Если результат положительный, то вторую пробирку можно сбросить.

Результаты и их интерпретация

Положительный результат - розовый цвет агара.

Отрицательный результат - цвет агара не меняется. 7.2.1.7. Уреаза

Принцип метода. Способность культуры гидролизировать мочевину (с высвобождением аммиака) используется для идентификации скотохромогенных и нефотохромогенных микобактерий.

M. scrofulaceum, M. szulgai, M. flavescens, M. bovis, M. tuberculosis, и M. gastri дают положительный результат, тогда как M. avium комплекс, M. xenopi, M. terrae комплекс, M. gordonae - отрицательны.

Дисковый метод

Приготовление реактивов

Помещают в пробирку с дистиллированной водой диск с уреазой.

Контроли

В качестве положительного контроля используют M. scrofulaceum или M.fortuitum. Отрицательным контролем служит незасеянная пробирка или уреаза-негативная M.gordonae.

Методика

В пробирку с субстратом вносят полную лопатку 3-недельной исследуемой культуры, выросшей на яичной среде, инкубируют при 37°C. Результат учитывают через 1 час и до 3 дней.