Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей и обнаруживают продукты гидролиза- полипептиды, азотистые основания, углеводы и фосфорную кислоту.
Ход работы:
1) Гидролиз нуклеопротеидов. Отвешивают 1 г прессованных дрожжей или 0,2 г сухих дрожжей и переносят в круглодонную колбу, вливают 15-20 мл 10%-ного раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой с воздушным холодильником и ставят в водяную баню на 1 час с момента закипания жидкости. Затем колбу охлаждают, содержимое фильтруют и проделывают следующие реакции.
2) Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10%-ного раствора NaOH и 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в сине-фиолетовый цвет вследствие образования биуретового комплекса между пептидной группировкой и ионами меди.
3) Открытие пуриновых оснований. К 1 мл фильтрата добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции на лакмус и приливают 0,5 мл аммиачного раствора окиси серебра. Выпадают в осадок серебряные соли пуриновых оснований.
4) Качественные реакции на рибозу и дезоксирибозу.
Окрытие рибозы и дезоксирибозы основано на их способности восстанавливать соли металлов (меди, висмут, серебро) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или в случае закиси - до свободного состояния; пентозы при этом окисляются с образованием соответствующих кислот.
Реакция Троммера заключается в восстановлении окисной меди в закисную под влиянием рибозы и дезоксирибозы, образующихся в результате гидролиза нуклеопротеидов дрожжей. Реакции протекают по уравнениям:
CuSO4 + 2NaOH®Cu(OH)2 + Na2SO4
К 5 каплям гидролизата добавляют 5 капель 30%-ного раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO4 до появления осадка гидроокиси меди Cu(OH)2. Жидкость перемешивают и кипятят. Выпадает осадок желтого цвета (CuOH) или красного (Cu2O).
Пентозы можно определить и по реакции с тимолом и концентрированной серной кислотой. Последняя вызывает дегидратацию пентоз и образование фурфурола, который с тимолом дает соединение красного цвета:
К 5 каплям фильтрата добавляют 1 каплю 1%-ного спиртового раствора тимола и осторожно наслаивают 5 капель концентрированной кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет.
5) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
К 10 каплям молибденового реактива (молибденовокислый аммоний в азотной кислоте) добавляют 5 капель гидролизата дрожжей и кипятят на пламени спиртовки. Жидкость окрашивается в лимонно - желтый цвет. После охлаждения пробирки выпадает желтый осадок комплексного соединения фосфорномолибденовокислого аммония:
12(NH4)2 MoO4 + H3 PO4 + 2I HNO3 =2INH4 NO3 + (NH4)3 PO4 ·12 MoO3 + 12H2O
Материалы и реактивы: дрожжи хлебопекарные, пресованные или сушеные; 10%-ный раствор серной кислоты; 10%-ный раствор едкого натра; 1%-ный раствор сернокислой меди; концентрированный раствор аммиака; 30%-ный раствор едкого натра; 7%-ный раствор сернокислой меди; 1%-ный спиртовой раствор тимола; концентрированная азотная кислота; молибденовый реактив (см. приложение Б, п.15)
Оборудование:. пробирки обыкновенные; колбы с воздушным холодильником; водяная баня; спиртовка; пипетки; лакмус.
