Метод ГЖХ.
Для анализа используют не сами жирные кислоты, а их производные – метиловые эфиры.
ГЖХ метиловых эфиров жирных кислот может быть проведена как на наполненных, так и на капиллярных колонках при условии получения хроматограмм, дающих возможность количественного расчета содержания отдельных компонентов смеси.
В качестве газа-носителя используют азот, гелий или аргон.
Метод ТСХ (силикагеля) и денситометрии хроматограмм позволяет определить классы липидов, в том числе и стеринов.
Принцип метода в том, что перед анализом к силикагелю добавляют краситель метиловый красный. Липиды проявляются в виде пурпурных пятен на розовом, а затем желтом фоне. После обесцвечивания фона парами аммиака хроматограмму фотографируют, а затем фотокопии денситометрируют, сравнивая со стандартом.
Количественный анализ разделенных фракций липидов осуществляют следующими методами:
непосредственным фотометрированием окрашенных хроматографических зон;
элюированием с последующим определением вещества после проведения цветной реакции.
Доброкачественность жиров характеризуется сохранностью их составных компонентов и отсутствием примесей и подмесей.
Присутствие продуктов гидролиза (избытка кислот) и окисления (продуктов разложения жира) можно установить по изменению органолептических и числовых показателей.
При окислении жиров меняется цвет - идет обесцвечивание липохромов, появляется резкий запах и раздражающий вкус благодаря присутствию перекисей, альдегидов, кетонов.
Примеси продуктов окисления меняют интервал температуры плавления и застывания, увеличивается растворимость в спирте, повышается плотность и показатель преломления - т.е. все физические константы.
1 - Резко увеличивается кислотное число и число омыления (низкомолекулярные продукты окисления возрастают), уменьшается йодное число.
2 - Проводят специальную пробу Крейса на перекиси, альдегиды, кетоны, т.е. проба на прогоркание жира. Масло взбалтывают с равными объемами конц.. НС1 и эфирного раствора флороглюцина - не должно быть розового окрашивания. В основе определения - образование п-хиноидной структуры.
3 - Проводят пробу на способ получения жира - определяют наличие сопутствующих жирам веществ, растворимых в органических растворителях и жирах. Эти вещества попадают в жиры при горячем прессовании и экстракции.
Проба с конц. серной кислотой и хлороформом: масло полученное холодным прессованием окрасится в красно-бурый цвет за счет окисления, дегидратации, полимеризации;
если масло получено горячим прессованием или экстракцией, то в черно-бурый цвет.
4 - Для невысыхающих жирных масел для парентерального применения (масло персиковое, миндальное) частными статьями предусмотрено определение белков, воды, цианидов, синильной кислоты и мыла.
5 - Отсутствие примесей белков и воды в персиковом и миндальном масле определяют растворением в бензине. Определение основано на разной растворимости жира и примесей.
6 - Отсутствие цианидов и синильной кислоты определяют реакциями образования берлинской лазури - не должно быть синего окрашивания жидкости и бумаги.
HCN + NaOH NaCN + H2 O
6 NaCN + FeSO4 Na4 {Fe(CN)6} + Na2SO4
4FeCl3 + 3 Na4{Fe(CN)6} Fe4 {Fe(CN)6}3 + 12 NaCl
берлинская лазурь
7 - Определение мыла в жирах основано на установлении щелочной реакции среды солей жирных кислот. Определяют индикатором фенолфталеином - не должно быть розового окрашивания.
Если жирное масло предназначено для изготовления инъекционных растворов (миндальное, персиковое масло), то определение мыла проводят после сжигания навески жира. Остаток после сжигания растворяют в воде и прибавляют индикатор - мыла в масле должно быть не более 0,001%.
Если жирное масло не предназначено для приготовления инъекционных растворов, то определение мыла проводят после кипячения навески жира с водой в присутствии индикатора - мыла в масле должно быть не более 0.01%.
8 - Посторонние примеси - подмеси - фальсификаторы определяют косвенно по изменению числовых или органолептических показателей или прямым определением.
Наличие подмесей меняет физические константы: повышается плотность и показатель преломления, характерные для данного масла.
Воск, вазелин (парафин), смолы (ВМС) - снижают показатель числа омыления, йодное и кислотное число.
- Прямое определение вазелинового масла, парафина, восков, смол в составе жира проводят омылением раствором щелочи.
В результате реакции омыления образуются соли и глицерин, которые легко растворимы в воде; подмеси — высокомолекулярные углеводороды, воски и смолы - в этих же условиях не омыляются и при разведении водой вызывают помутнение раствора.
Подмеси низкоценных жирных масел определяют, как правило, по сопутствующим веществам и липохромам. В основе определения: реакции с различными окислителями с образованием окрашенных продуктов.
