Биуретовая реакция на пептидные связи

 

Принцип метода: Группировки -СО-NН-, входящие в пептидную связь, в щелочной среде образуют комплексные соединения с ионами меди (Сu⁺²). Полученные соединения окрашены в фиолетовый цвет с красным или синим оттенком в зависимости от длины полипептидной цепи. Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание, а продукты неполного его гидролиза – розовое или красное.

 

Реактивы:

1) 1 % раствор яичного белка (белок куриного яйца фильтруют через марлю и разводят водой 1:10);

2) 1 % раствор желатина;

3) 10 % раствор NaOH;

4) 1 % раствор CuSO_4.

 

Ход работы. Берут 3 пробирки: в первую внося 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую – 5 капель 1 % раствора желатина, в третью - 5 капель воды. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 капель 10 % NaOH и по 2 капли 1 % CuSO₄. Пробирки встряхивают. Наблюдают за изменением окраски.

 

Результат:

Первая пробирка: _____________________________________________________________

_____________Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Вывод: ______

_______________________________________

Нингидриновая реакция на a-аминокислоты

 

Принцип метода. Раствор белка при нагревании с разбавленным раствором нингидрина окрашивается в синий или фиолетовый цвет. Реакция обусловлена наличием в белке остатков а-аминокислот. При взаимодействии с нингидрином а-аминокислоты и пептиды окисляются и распадаются с образованием NH₃, R-COH и CO₂. Нингидрин восстанавливается и взаимодействует со второй молекулой нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение мурексидного строения, окрашенное в синий или фиолетовый цвет (комплекс Руэмана). Нингидриновая реакция может быть использована для количественного определения а-аминокислот в аминокислотных анализаторах.

Реактивы:

1) 1 % раствор яичного белка;

2) 1 % раствор желатина;

3) 0,5 % раствор нингидрина_.

 

Ход работы. Берут 3 пробирки; в первую вносят 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую- 5 капель 1 % желатина, в третью - 5 капель воды. В каждую пробирку добавляют по 5 капель 0,5 % раствора нингидрина. Кипятят 2 минуты в водяной бане. Следят за изменением окраски.

Результат:

Первая пробирка: _____________________________________________________________

_____________Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Вывод: ______

_______________________________________

Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

 

Принцип метода. При смешивании раствора белка с концентрированной азотной кислоты белок сначала выпадает в осадок, при последующем нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Аминокислоты, имеющие в своем составе бензольное кольцо (фен, тир, три), вступают с азотной кислотой в реакцию нитрования с образованием нитросоединений желтого цвета.

 

Реактивы:

1) 1 % раствор яичного белка;

2) 1 % раствор желатина;

3) азотная кислота концентрированная (HNO₃)_.

 

Ход работы. Берут 3 пробирки: в первую вносят 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую – 5 капель 1 % желатина, в теретью - 5 капель воды. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 капель концентрированной азотной кислоты (HNO₃ - агрессивная жидкость!). Кипятят 2 минуты в водяной бане. Регистрируют изменение цвета.

 

Результат:

Первая пробирка: _____________________________________________________________

_____________Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Вывод: ______

__________________________

Реакция Миллона на тирозин

 

Принцип метода. При добавлении к раствору белка реактива Миллона, (раствор ртути (I и II) в азотной кислоте с небольшим количеством HNO₃), образуется белый осадок (действие соли тяжелого металла), окрашивающийся при нагревании в красный цвет. Реактив Миллона дает окрашивание почти со всеми фенолами, причем у белков реакция обусловлена присутствием в них фенольной группы тирозина. Белки, не содержащие тирозина, этой реакции не дают.

 

Реактивы:

1) 1 % раствор яичного белка;

2) реактив Миллона.

 

Ход работы. Берут 3 пробирки: в первую вносят 10 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую - 10 капель воды, в третью - 10 капель раствора фенола. В каждую пробирку добавляют по 3 капли реактива Миллона (смесь солей ртути в концентрированной азотной кислоте). Нагреть до окрашивания

 

Результат:

 

Первая пробирка:_____________________________________________________________

_____________

Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________

Вывод: ___________________________________________________________

 

Реакция Фоля на цистеин

 

Принцип метода. Присутствующие в белке аминокислоты цистин и цистеин, содержащие слабосвязанную серу дают положительную реакцию Фоля. Метионин, этой реакции не дает, поскольку сера в нем связана прочно. При кипячении белка с реактивом Фоля (плюмбит натрия в избытке NaOH) под действием щелочи от цистеина или цистина легко отщепляется сера в виде сульфид натрия, который с солями свинца дает черный или бурый осадок сульфида свинца.

 

Реактивы:

1) 1 % раствор яичного белка;

2) кератин (светлый волос);

3) реактив Фоля.

 

Ход работы. Берут 2 пробирки: в одну вносят 5 капель 1 % раствора яичного белка, на дно второй пробирки помешают свернутый волос (лучше светлый). В каждую пробирку добавляют по 5 капель реактива Фоля (раствор ацетата свинца). Кипятят до появления черного окрашивания.

 

Результат:

Первая пробирка:_____________________________________________________________

_____________

Вторая пробирка: _____________________________________________________________

_____________

Вывод:_ __________________________________________________________

 

Лабораторная работа № 3