Принцип метода. Фруктоза (кетоза) ири взаимодействии с концентрированной кислотой теряет 3 молекулы воды и образует оксиметилфурфурол, который при нагревании с резорцином дает вишнево-красное окрашивание, Альдозы практически не вступают в реакцию Селиванова.
Реактивы:
Ход работы. В пробирку наливают 2 капли раствора фруктозы, приливают к нему 1 каплю концентрированной соляной кислоты НСI (агрессивная жидкость!) и 2 кали реактива Селиванова (содержит резорцин). Нагревают на копящей бане в течениа.5 минут.
Результат: ___________________________________________________________________
__________________________
Вывод_______
__________________________
Реакция Фелинга на дисахариды
Принцип метода: Только те дисахариды, которые имеют свободный полуацетальный гидроксил, способны восстанавливать медь сернокислой меди до закиси меди, т.е. давать положительную реакцию Фелинга.
Реактивы:
Ход работы:
| 2 капли мальтозы | 2 капли лактозы | 2 капли сахарозы |
| + 1 капля реактива Фелинга I | + 1 капля реактива Фелинга I | + 1 капля реактива Фелинга I |
| + 2 капли реактива Фелинга II | + 2 капли реактива Фелинга II | + 2 капли реактива Фелинга II |
| Нагреть на кипящей бане в течение 5 минут |
Результат: ___________________________________________________________________
__________________________
Вывод_______
__________________________
Гидролиз сахарозы и определение продуктов гидролиза
Ход работы: В пробирку наливают 10 капель раствора сахарозы и 10 капель 10% раствора серной кислоты. Нагревают в течение 10 минут в кипящей водяной бане. Образуется гидролизат сахарозы.
Реактивы:
| гидролизат | гидролизат |
| + 1 капля реактива Фелинга I | + 1 каплю HCI конц. |
| + 2 капли реактива Фелинга II | +2 капли реактива Селиванова |
| Кипятить 5 минут | Кипятить 5 минут |
Результат: __________________________________________________________________
__________________________
Вывод_______
__________________________
Реакция Фелинга с крахмалом
Принцип метода: В молекулах полисахаридов практически нет свободных полуацетальных гидроксилов, поэтому они не могут восстанавливать Cu+2 до Cu+1
Реактивы:
Ход работы: В пробирку внести 2 капли раствора крахмала, добавить 1 каплю реактива Фелинга I и 2 капли реактива Фелинга II. Нагреть на кипящей бане 5 минут
Результат: __________________________________________________________________
_________________________
Вывод_______
__________________________
Реакция крахмала с йодом.
Принцип метода: Амилоза крахмала образует комплекс с йодом, окрашенный в синий цвет. При нагревании комплекс разрушается, после охлаждения снова образуется.
Реактивы:
Ход работы: В пробирку вносят 1 мл дистиллированной воды и 1 каплю крахмала. После перемешивания добавляют 1 каплю Люголя (содержит йод). Отмечают результат. Нагревают на кипящей водяной бане, а затем охлаждают. Наблюдают за изменением окраски.
Результат: __________________________________________________________________
__________________________
Вывод_______
__________________________
Лабораторная работа № 14
Обнаружение фосфотриоз в мышечной ткани
Принцип метода: Фосфотриозы в отличие от других фосфорилированных метаболитов превращения глюкозы легко подвергаются гидролизу с отщеплением неорганического фосфата в щелочной среде при комнатной температуре.
Реактивы:
1) ТХУ 2,5% раствор;
2) NaОН, 2 моль/л;
3) НСI, 2 моль/л;
4) аскорбиновая кислота, 1% раствор (свежеприготовленный);
5) молибденово-кислый аммоний, 1% раствор в 0,025 моль/л растворе H2SO4.
Ход работы:
1. 0,5 г измельченной мышцы экстрагируют 5 мл холодной ТХУ на льду в течение 10 мин, интенсивно перемешивая. Добавляют 5 мл воды и фильтруют через бумажный фильтр.
2. В опытную пробирку помещают 1 мл без белкового фильтрата и добавляют 1 мл раствора NaОН, перемешивают и спустя 20 мин щелочь нейтрализуют добавлением 1 мл раствора НСI.
3. В контрольную пробирку помещают 1 мл раствора NaОН 1 мл раствора НСI и после перемешивания вносят 1 мл исследуемого без белкового фильтрата мышцы.
4. В опытную и контрольную пробирки приливают по 0,5 мл раствора молибденово-кислого аммония и по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты. Общий объем смеси в обеих пробирках доводят до 10 мл дистиллированной водой. Пробы оставляют при комнатной температуре на 10 мин, после чего их фотометрируют при А=670 нм в кюветах толщиной 10 мм. Опытную пробу колориметрируют против контрольной. По калибровочной кривой оценивают содержание фосфора в пробе.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________
Вывод_______
_______________________________________
Лабораторная работа № 15
Обнаружение дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида
Принцип метода
3-фосфоглицериновый альдегид в ходе анаэробного превращения глюкозы дегидрогеназой 3-фосфоглицеринового альдегида окисляется в 1,3-дифосфоглицериновую кислоту. При этом происходит восстановление НАД, который можно обнаружить по восстановлению метиленового синего в лейкосоединение.
Реактивы:
1) глюкоза, 2% раствор;
2) дрожжи;
3) метиленовый синий, 0,002% раствор.
Ход работы
В пробирку вносят кусочек дрожжей (величиной с горошину), несколько капель раствора глюкозы, растирают содержимое стеклянной палочкой до получения равномерной взвеси. Добавляют каплю раствора метиленового синего, перемешивают содержимое пробирки стеклянной палочкой. Ставят пробирку в штатив и наблюдают обесцвечивание метиленового синего, начинающееся со дна пробирки.
Результат: __________________________________________________________________
_______________________________________
Вывод______
______________________________________
