Микробиологическая диагностика менингококковой инфек­ции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость, кровь, мазки со слизистой оболочки верхних отделов носоглотки, аспират из высыпных элементов.

При обследовании на носительство материал из верхних отделов носоглотки берут специальным носоглоточным тампо­ном (который на ³/4 Длины сгибают под углом 45°). При доставке в лабораторию его предохраняют от охлаждения и высушивания, поскольку менингококк очень чувствителен к воздействию этих факторов.

Спинномозговую жидкость берут в количестве 2—5 мл и делят на две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдер­живают при 37 "С для накопления бактерий. Из исследуемого материала готовят мазки и производят посевы.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 14.2.1). Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по методу Гра-ма и микроскопируют. При наличии гноя в большинстве слу­чаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплокок­ки, имеющие характерное расположение внутри лейкоцитов, что позволяет сделать окончательное заключение о менинго­кокковой инфекции. При микроскопии мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, а также непатогенные нейссерии (Moraxella spp. и др.). Дифференциро­вать их по морфологическим признакам не представляется возможным.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с питательным агаром, содержа­щим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. В среды добавляют антибиотик ристомицин (150 ЕД/мл), который задерживает размножение грамположительных кок­ков, содержащихся в исследуемом материале, и тем самым способствует выделению чистой культуры менингококка. Образование колоний менингококка на этих средах наблю­дается через 48 ч после инкубации посевов при 37 "С в атмосфере с повышенным содержанием С0₂ (3—10 %) и вы­сокой влажностью. В отличие от других кокков колонии ме­нингококка величиной с булавочную головку прозрачны, име­ют голубоватый оттенок и ровные края. Такие колонии пере­севают в пробирку со скошенным агаром для получения чистой культуры.

Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сап­рофитных нейссерии, обитающих в носоглотке, проводят по ряду культуральных и биохимических признаков. Так, менин­гококк растет только в присутствии нативного белка, в то время как другие нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент; на средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментирует глюкозу и мальтозу до кис­лоты (табл. 14.2.1).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала использу­ют метод ИФ.

 

Таблица 14.2.1. Дифференциальные признаки некоторых видов Neis­seria и Moraxella catarrhalis

N.gonor-rhoeae

M. catar­rhalis

N.men­ingitidis

N.sub-flava

N.mu-cosa

Признак

+	+	+	+	+
+	+	+	+	+
±	±	+	+	+
±	±	+	+	+
+	+	+	+	+

Продукция каталазы

Продукция оксидазы

Образование пигмента

Рост при 22 °С

Потребность для роста в сыворотке или крови

Образование кислоты при расщеплении углеводов:

+	+	+	+	±
+	±	±	[+]	±
+	±	+	±	±
±	±	+	±	±
±	±	+	+	±

глюкозы лактозы мальтозы сахарозы

Восстановление нитратов

Условные обозначения: (+) — 85—100 % штаммов положитель­ны; (±) — 16—84 % штаммов положительны; [+] — положительная замед­ленная реакция.

Для обнаружения в спинномозговой жидкости специфичес­кого полисахаридного менингококкового антигена применяют метод встречного иммуноэлектрофореза: в агаровых пластин­ках на стекле размером 9x12 см вырезают два параллельных ряда лунок диаметром около 3 мм. В лунки одного ряда вносят исследуемую жидкость, в лунки другого ряда — преципитирую-щие антименингококковые сыворотки разных серогрупп. Для реакции используют веронал-мединаловый буфер. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40—45 мин при комнатной температуре и силе тока около 30 А. При положительном результате между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой образуются 1— 2 полосы преципитации.

Антигены возбудителя также могут быть обнаружены в ма­териале от больного в реакциях непрямой латекс-агглютина­ции, РИГА и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Для ретроспективного подтверждения диа­гноза используют РИГА с парными сыворотками.