Хроматографические методы идентификации.

Газовая хроматография, Жидкостная хроматография Время выхода пика анализируемого вещества на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают со временем выхода вещества на хроматограмме, полученной для раствора стандартного образца (раствора сравнения).

ТСХ Испытание на подлинность проводится при одновременном хроматографировании одинакового количества анализируемого вещества и стандартного образца на одной и той же хроматограмме. При этом если вещества идентичны, то соответствующие им хроматографические зоны имеют одинаковую форму, интенсивность поглощения или окраски и равные величины Rf.

Количественный анализ фарм. субстанций инструментальными методами.

При выборе метода анализа руководствуются следующими принципами:

1. Чувствительность метода – минимальное количество в-ва, кот. можно определять данным методом. Сравнивая чувствительность различных методов и примерное содержание определяемого компонента в пробе, выбирают тот или иной метод анализа.

2. Избирательность (селективность) метода, т.е. возможность определения данного вещества в многокомпонентных пробах. Методы, позволяющие определять только один компонент в пробе на фоне большого количества других называют специфичными.

3. Точность анализа включает в себя правильность и воспроизводимость. Точность часто характеризуют относительной погрешностью определения (в %).

4. Экспрессность метода. Существуют методы, позволяющие проводить анализ очень быстро (ионометрия, ИК-спектроскопия). Стадия измерения в большинстве методов является достаточно быстрой, а основное время затрачивается на пробоподготовку. Поэтому при прочих равных условиях выбирают наиболее избирательные, не требующие специальной пробоподготовки, методы.

5. Стоимость анализа. В стоимость химического анализа входит стоимость используемой аппаратуры, реактивов, рабочего времени химика-аналитика и т.д. Наиболее дешевыми с точки зрения аппаратуры являются титриметрические, гравиметрические методы, потенциометрия. Наиболее дорогой является аппаратура, используемая в хромато-масс-спектрометрии, ВЭЖХи др. методах. При прочих равных условиях для решения поставл. задачи стараются выбирать наиболее дешевые методы анализа.

6. Автоматизация анализа. При проведении массовых однородных анализов следует выбирать метод, допускающий автоматизацию анализа, которая позволяет облегчить труд аналитика, заменив многие ручные, трудоемкие операции автоматическими, снизить погрешности отдельных операций, увеличить скорость проведения анализа, снизить его стоимость, проводить анализ на расстоянии и т.д.

 

При анализе ЛФ, содержащих 3 компонента и более, не удается найти единого метода, позволяющего определить все компоненты. Поэтому используют сочетание нескольких методов, основываясь на растворимость, кислотно-основные, окислительно-восстановительные свойства, возможность взаимодействия с различными титрантами и реактивами. Количественный хим. анализ ЛВ в многокомпонентных смесях выполняют без разделения компонентов смеси (два компонента и более) и после предварительного разделения смеси на отдельные компоненты.

Колич. анализ без разделения компонентов смеси. Подбирают условия, при которых определение одного компонента не мешает определению других. Метод основан на различии свойств веществ смеси (кислотно-основных произведения растворимости, констант комплексообразования). Например, одновременное титрование суммы 2 компонентов. Количественно определяют содержание 1-го компонента, используя методы определения свойств, присущих только данному веществу. Расчет проводят по разности между количеством мл титрантов, затраченных на первое и второе титрование. Один из компонентов может быть определен окислительно-восстановительным способом при отсутствии в смеси других окисляющих компонентов:

 1) Кислота + соль или основание = сначала титруют кислоту, затем сумму образовавшейся соли или основания. Расчет – по разности количеств титрования кислоты и щелочи.

2) Основание + основание, различающееся по основности = разные индикаторы.

3) Полярография, потенциометрия, фотоколориметрия, спектрофотометрия.

Колич. анализ смесей после предварительного разделения компонентов смеси. Разделение смеси с помощью экстракции основано на различии растворимости компонентов в воде и органических растворителях или на различии кислотно-основных свойств. По этому принципу ЛВ могут быть распределены на группы. Разделение компонентов след. методами:

Хорошо растворимое + мало растворимое =обработка смеси водой, фильтрование. На фильтре—нерастворимое

Растворимое в органике + нерастворимое в органике = разделение путем экстракции хлороформом

ЛВ, растворимые в хлороформе + орган. основания = основания нейтрализуют кислотами, соли оснований остаются в водном растворе.

Экстракционная фотометрия, ионообменная хроматография, ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ.

Спектрометрические методы.

Атомно-абсорбционная спектрофотометрия чаще всего метод используют для количественного определения элементосодеращих лекарственных веществ, поливитаминных препаратов, аминокислот, барбитуратов, некоторых антибиотиков, алкалоидов, галогенсодержащих ЛВ, ртутьсодержащих соединений, для количественного определения мышьяка в качестве контролируемой примеси.

Ультрафиолетовая и видимая спектрофотометрия – наиболее простой и широкоприменяемый в фармации метод анализа. Его используют на всех этапах фармацевтического анализа (испытания чистоты, подлинности, количественного определения), однако наиболее достоверные данные получаются при использовании метода для количественного определения лекарственных веществ. Хорошими объектами для спектрофотометрии являются ароматические и гетероароматические соединения.

Известны различные способы использования УФ спектроскопии для количественного определения ЛВ – витаминов (ретинола ацетат, рутин, цианокобаламин), стероиднымх гормонов (кортизона ацетат, преднизон, прегнин, тестостерона пропионат), антибиотиков (натриевые соли оксациллина и метициллина, феноксиметилпенциллин, левомицетина стеарат, гризеофульвин).

Дифференциальные методы позволяют расширить область применения спектрофотометрии в фармацевтическом анализе. Они позволяют повысить ее объективность и точность, а также анализировать высокие концентрации веществ. Кроме того этими методами можно анализировать многокомпонентные системы без их предварительного разделения.

Новые возможности в области количественного определения открывает использование производной УФ-спектрофотометрии. Точность такого метода существенно ниже, но он позволяет без больших затрат и сложных экстракций производить анализ смесей. При наличии хроматографии значимость такого метода снижается и он почти не используется на практике.

Разновидностью спектрофотометрии является фотоколориметрия – метод количественного определения веществ в видимой области. Метод используют для количественного определения (фурацилин, фурадонин), используют его и для определения веществ в лекарственных формах.

На современном этапе начала достаточно успешно применяться ИК-Фурье спектроскопия, позволяющая практически без пробоподготовки определять ряд параметров, в том числе концентрацию воды, содержание основного вещества, а при наличии стандартного образца определять концентрации примесей. Этот метод является одним из наиболее перспективных методов неразрушающего контроля.

Хроматографические методы.

Для количественного определения в фармацевтическом анализе используют адсорбционную – ТСХ или бумажную хроматографию. Количественное определение с помощью ТСХ метод достаточно доступный и простой в осуществлении, но в сравнении с другими менее точный. Преимуществом ТСХ является простота приемов и оборудования, высокая чувствительность, широкий набор стандартизированных сорбентов и пластин, их устойчивость к температурным и химическим воздействиям и дешевизна анализа. Метод широко используют для анализа наркотикотических в-в, веществ, поглощающих или флуоресцирующих в ультрафиолетовом или видимом свете, веществ, содержащих радионуклиды. Вещества количественно определяют либо после снятия с пластины приборными методами, либо по размерам пятна на пластине. Первый метод более точный и достоверный.

Газожидкостная хроматография − доступный метод анализа летучих веществ или их дериватов. Достоинством метода является совмещение идентификации лекарственного вещества, оценки его чистоты и примесей и количественное определение. Недостатком – необходимость стандартного образца для количественного определения, т.к. метод хроматографии сам по себе дает только относительное количество. Еще одним достоинством метода является его высокая точность (до 0,1%), малое количество испытуемого образца (до 10^-4г), дешевизна и надежность приборов.

Метод ВЭЖХ –один из наиболее применимых сейчас методов количественного определения как в субстанциях, так и в готовых формах. Метод дает относительные результаты и для количественного определения требуется стандарт. Чувствительность метода достигает 10^-6г. Недостатки: дороговизна анализа, сложность перестройки прибора с одного вещества на другое.

Метод ВЭЖХ успешно применен для количественной оценки ряда наркотических, ядовитых и сильнодействующих ЛВ. Метод ВЭЖХ рекомендован во всех ФС, разработанных на стандартные образцы антибиотиков. В Фармакопее США метод ВЭЖХ применен для анализа большинства антибиотиков противоопухолевого действия и цефалоспоринового ряда.

Электрохимические, радиометрические, биологические и др. методы

Определения неорганических и органических (азотсодержащих) лекарственных веществ с помощью ионоселективных электродов отличаются от других методов высокой, чувствительностью, экспрессностью, хорошей воспроизводимостью результатов, несложным оборудованием, доступными реагентами. Ионометрически определяют калия, натрия, галогенидов и кальций содержащих лекарственных веществ в таблетках и в солевых кровезамещающих жидкостях. С помощью рН-метров, ионометра и калий селективных электродов определяют калиевые соли различных кислот (оротовой, аспарагиновой и др.).

С помощью потенциометрического титрования можно проанализировать сильно окрашенные, коллоидные и мутные растворы, а также растворы, содержащие окислители. Кроме того, можно последовательно оттитровать в смеси несколько компонентов в водных и неводных средах.

Амперометрическое титрование наиболее часто используют для нитрито- и иодометрического титрования.

Полярографию широко используют в анализе неорганических веществ, а также алкалоидов, витаминов, гормонов, антибиотиков, сердечных гликозидов. Весьма перспективны вследствие высокой чувствительности современные методы: дифференциальная пульс-полярография, осциллографическая полярография и др.

Далеко не исчерпаны возможности электрохимических методов в фармацевтическом анализе. Разрабатываются новые варианты потенциометрии: инверсионная бестоковаяхронопотенциометрия, прямая потенциометрия с помощью газового аммоний-селективного электрода и др. Расширяются исследования в области применения в фармацевтическом анализе кондуктометрии, кулонометрии.

Кулонометрический метод применяют при определении малых количеств анаболических стероидов, местно-анестезирующих и других ЛВ. Определению не мешают наполнители таблеток. Методики отличаются простотой, экспрессностью, быстротой и чувствительностью.

Радиохимические методы находят все более широкое применение в фарм. анализе.

Методы количественного определения действующего вещества биологическими методами применяют, когда с помощью физико-химических или химических методов не удается сделать заключение о количестве действующего вещества или суммы действующих веществ. Примером могут служить некоторые антибиотики, эритромицин, канамицин, суммарные экстракты сердечных гликозидов, ядовитые вещества типа яда змей или пчел.

Биологические методы используют также для оценки пирогенности раствором ЛС.