Результаты работы заносят в табл. 6.
Таблица 6 – Высаливание белков
| Название белка | Используемая соль | Степень Насыщения | Образование осадка |
| Глобулин | |||
| Альбумин |
Контрольные вопросы
Каким образом можно разделить яичный альбумин и глобулин?
СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ
Лабораторная работа 20. Гидролиз нуклеопротеидов дрожжей
Сложными белками называются белки, которые кроме белковой части содержат небелковый компонент, называемый простетической группой. В зависимости от химической природы простетической группы сложные белки делятся на нуклеопротеиды, хромопротеиды, фосфопротеиды, глюкопротеиды, липопротеиды и металлопротеиды.
Нуклеопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части – нуклеиновых кислот. Нуклеопротеиды являются необходимой составной частью клеток тканей, растений, микробов. Они обнаруживаются как в ядре, так и в цитоплазме.
1 Цель работы – изучить химический состав сложных белков – нуклеопротеидов
Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят гидролиз дрожжей, которые берут в качестве источника богатого нуклеопротеидами. При проведении частичного гидролиза нуклеопротеиды распадаются на белки, преимущественно основного характера (протамины и гистоны), и нуклеиновые кислоты. При более полном гидролизе белки и нуклеиновые кислоты распадаются на свои основные компоненты. Это можно представить в виде следующей схемы:
Нуклеопротеиды
Белок Нуклеиновые кислоты
(протамин или гистон) (полинуклеотиды)
 | |||
 | |||
Полипетиды Мононуклеотиды
Пуриновые или Фосфорная
пиримидиновые основания кислота
Рибоза или дезоксирибоза
Приборы и материалы
Песчаная баня
Электроплитка
Фильтр
Дрожжи
Серная кислота 10 %
Гидроксид натрия 10 %
Гидроксид натрия 30 %
Сульфат меди 1%
Сульфат меди 7 %
Молибденовый реактив
Описание работы
В колбу помещают 1 г дрожжей, приливают 8 мл 10 % серной кислоты, закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника трубка длиной 25 – 30 см, взбалтывают и закрепляют в штативе под углом 45°.
Гидролиз проводят при нагревании около часа, считая от момента закипания. После окончания гидролиза жидкость охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр. С фильтратом проводят следующие реакции.
1. Биуретовая реакция на полипептиды.
К пяти каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и 1 – 2 капли 1 % раствора сернокислой меди до появления сине-фиолетового окрашивания, что свидетельствует о присутствии в пробе полипептидов.
2. Проба на пуриновые основания.
К десяти каплям гидролизата прибавляют одну каплю концентрированного раствора аммиака для нейтрализации и пять капель 1 % раствора азотнокислого серебра. Постепенно образуется осадок серебряных соединений пуриновых оснований.
3. Качественная реакция на углевод (рибозу и дезоксирибозу).
Качественные реакции основаны на способности моносахаридов, имеющих свободный гликозидный гидроксил, восстанавливать металлы (медь, висмут, железо) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или (в случае закиси) до свободного состояния; сахара же дают различные продукты окисления.
Проба Троммера заключается в восстановлении гидроксида меди (II) в гидрооксид меди (I) в щелочной среде под влиянием рибозы и дезоксирибозы, присутствующих в гидролизате дрожжей:
CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4;
Рибоза рибоновая кислота + 2CuOH
Cu2O + H2O
К пяти каплям гидролизата добавляют пять капель 30 % гидроксида натрия и несколько капель 7 % раствора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидрата оксида меди (II) и красный осадок оксида меди (I).
4. Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К пяти каплям гидролизата добавляют десять капель молибденового реактива, представляющего собой раствор молибденовокнелого аммония в азотной кислоте, и кипятят. При охлаждении пробирки под струей холодной водопроводной воды выпадает кристаллический осадок лимонно-желтого цвета, обусловленный образованием фосфорно-молибденово-кислого аммония.
