Оформление результатов работы

Приводят значения R _f для аминокислот свидетелей и аминокислот в задаче. Делают заключение о составе аминокислот в задаче.

 

Контрольные вопросы

1. На чем основан метод хроматографического разделения аминокислот?

2. От чего зависит скорость перемещения аминокислот на бумаге?

3. Как можно обнаружить положение аминокислот на бумаге?

Лабораторная работа 11. Количественное определение белка по биуретовой реакции

Самым распространенным химическим методом количе­ственного определения белка является колориметрический метод. Он основан на измерении интенсивности цветных реакций, развивающихся при взаимодействии белков со специ­фическим реагентом.

Биуретовая реакция белков (см. лабораторную работу 1) не отличает­ся высокой чувствительностью. Поэтому она применяется в тех случаях, когда содержание белка в исследуемом образце достаточно велико (не ниже нескольких мг/мл). Чтобы рассчитать концентрацию белка строят калибровочный график.

 

1 Цель работы – определить концентрацию белка колорометрическим методом с использованием биуретовой реакции

 

Приборы и материалы

Фотоэлектроколориметр КФК-2УХЛ 4.2

Стандартный раствор белка с концентрацией 10 мг/мл

Биуретовый реактив

Дистиллированная вода для приготовления разведений

Раствор белка с неизвестной концентрацией (задача)

 

Описание работы

3.1 Построение калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой в десять пронуме­рованных пробирок наливают стандартный раствор белка от 0,1 до 1 мл, в девяти пробирках доводят объем до 1 мл до­бавлением дистиллированной воды. Во все про­бирки приливают по 8 мл биуретового реактива, перемешивают. Выдержи­вают 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют при длине волны 540 нм против контроля (вместо раствора белка берут 1 мл дистиллированной воды).

 

Таблица 3 - Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой

Номер пробы	Дист. вода, мл	Стандартный раствор белка, мл	Биуретовый реактив, мл	Концентрация белка, мг/мл	D540
	0,9	0,1
	0,8	0,2
	0,7	0,3
	0,6	0,4
	0,5	0,5
	0,4	0,6
	0,3	0,7
	0,2	0,8
	0,1	0,9
	-	1,0

Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой представлена в табл. 3. По полученным значениям оптических плотностей строят калибровочную кривую (рису­нок 1).

 

Определение количества белка

Для определения количества белка в исследуемом образце к 1 мл исследуемого раствора приливают 8 мл биуретового реактива. Оставляют на 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют в кюветах при 540 им против контроля.

 

Оформление результатов работы

 

По калибровочному графику (график зависимости оптической плотности раствора от концентрации белка в нем), представленному на рисунке 1, определяют содержание бел­ка в пробе.

 

Рисунок 1 – Калибровочная кривая по белку