Лабораторная работа 13. Осаждение белков органическими растворителями

Белки нерастворимы во многих органических растворителях (спирт, ацетон, эфир). При добавлении к раствору бел­ка больших количеств спирта или ацетона выпадает осадок белка.

Реакция обусловлена обезвоживанием (дегидратацией) коллоидных частиц белка. Осаждение происходит только из нейтральных или слабокислых растворов и лучше в присут­ствии электролитов, например, хлористого натрия, кратко­временное воздействие органических растворителей при низкой температуре – от 0 до -15 °С сохраняет белок в нативном состоянии, длительное воздействие приводит к денату­рации белка.

 

1 Цель работы – провести осаждение белка органическими растворителями

 

Приборы и материалы

 

Белок 1 %

Этиловый спирт или ацетон

Сульфат аммония (насыщенный раствор)

 

Описание работы

К пяти каплям 1% раствора белка приливают 15 – 20 капель этилового спирта (или ацетона) - раствор мутнеет. Добавляют одну каплю насыщенного раствора сульфата ам­мония. Через некоторое время выпа­дает осадок белка.

 

Контрольные вопросы

 

За счет чего происходит осаждение белков органическими растворителями?

 

Лабораторная работа 14. Осаждение белков солями тяжелых металлов

 

Белки осаждаются солями меди, цинка, свинца, ртути, се­ребра и др., при этом происходит денатурация белковой мо­лекулы.

Ионы тяжелых металлов образуют довольно прочные сое­динения с полярными группами белков, искажая систему ионных и водородных связей нативной белковой молекулы и образуя нерастворимые комплексы.

При осаждении белков некоторыми солями тяжелых ме­таллов, например, уксуснокислым свинцом и сульфатом ме­ди, избыток этих солей ведет к растворению (пептизации) осадка. Ионы металла, адсорбируясь на поверхности белко­вых мицелл, придают им положительные заряды. Одноимен­но заряженные мицеллы отталкиваются, что способствует их переходу из осадка в раствор. При избытке солей серебра и ртути пептизации не наблюдается.

1 Цель работы – провести осаждение белков солями тяжелых металлов

 

Приборы и материалы

 

Белок 1 %

Сульфат меди 7 %

Уксуснокислый свинец 5 %

 

Описание работы

В две пробирки вносят по пять капель 1 % раствора белка и по две капли: в 1-ю пробирку 7 % раствора суль­фата меди, во 2-ю пробирку – 5 % раствора уксусного свинца. Наблюдают образование осадка. Затем в обе про­бирки добавляют еще 5 – 10капель осадителя и наблюдают растворение осадка.

 

Контрольные вопросы

 

За счет чего происходит осаждение белков тяжелыми металлами?

Лабораторная работа 15. Осаждение белков минеральными кислотами

 

Концентрированные минеральные кислоты (азотная, сер­ная, соляная) вызывают дегидратацию белковых частиц и нейтрализацию их заряда, при этом происходит образование комплексных соединений. Все это приводит к необратимой денатурации белка. В избытке серной или соляной кислот, а также при их длительном воздействии, выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азот­ной кислоты этого растворения не происходит.

1 Цель работы – провести осаждение белка минеральными кислотами

 

Приборы и материалы

Белок 1 %

Азотная кислота (конц.)

Серная кислота (конц.)

 

Описание работы

 

В две пробирки наливают по пять капель концентриро­ванной азотной и серной кислот. Затем, наклонив пробирки под углом 45°, осторожно по стенке пробирки (чтобы жидко­сти не смешивались) наливают такой же объем раствора белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкого белого кольца. Осторожно встряхи­вают пробирки, обнаруживают растворение осадка белка при осаждении серной кислотой, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется.

 

Контрольные вопросы

 

За счет чего происходит осаждение белков неорганическими кислотами?