Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


III. ќценка клеток-мишеней




1. ќпределение экспрессии рецепторов цитокинов на уровне генов и белковой молекулы (ѕ÷–, метод проточной цитофлуориметрии).

2. ќпределение сигнальных молекул во внутриклеточном содержимом.

3. ќпределение функциональной активности клеток-мишеней.

¬ насто€щее врем€ разработаны многочисленные методы оценки системы цитокинов, которые дают разноплановую информацию. —реди них различают:

1) молекул€рно-биологические методы;

2) методы количественного определени€ цитокинов с помощью иммуноанализа;

3) тестирование биологической активности цитокинов;

 

4) внутриклеточное окрашивание цитокинов;

5) метод ELISPOT, позвол€ющий вы€вить цитокины вокруг единичной цитокинпродуцирующей клетки;

6) иммунофлюоресценцию.

ѕриводим краткую характеристику этих методов.

— помощью молекул€рно-биологических методов можно исследовать экспрессию генов цитокинов, их рецепторов, сигнальных молекул, изучать полиморфизм указанных генов. ¬ последние годы выполнено большое число работ, вы€вивших ассоциации между вариантами аллелей генов молекул системы цитокинов и предрасположенностью

к р€ду заболеваний. »зучение аллельных вариантов генов цитокинов может дать информацию о генетически запрограммированной продукции того или иного цитокина. Ќаиболее чувствительной считаетс€ полимеразна€ цепна€ реакци€ в реальном времени - ѕ÷–-–¬ (см. гл. 6). ћетод гибридизации in situ позвол€ет уточнить тканевую и клеточную локализацию экспрессиии цитокиновых генов.

 оличественное определение цитокинов в биологических жидкост€х и в культурах мононуклеарных клеток периферической крови методом »‘ј можно охарактеризовать следующим образом. ѕоскольку цитокины €вл€ютс€ локальными медиаторами, более целесообразно измер€ть их уровни в соответствующих ткан€х после экстракции тканевых протеинов или в естественных жидкост€х, например в слезе, смывах из полостей, моче, амниотической жидкости, спинномозговой жидкости и т.д. ”ровни цитокинов в сыворотке или других биологических жидкост€х отражают текущее состо€ние иммунной системы, т.е. синтез цитокинов клетками организма in vivo.

ќпределение уровней продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови (ћЌ ) показывает функциональное состо€ние клеток. —понтанна€ продукци€ цитокинов ћЌ  в культуре свидетельствует, что клетки уже активированы in vivo. »ндуцированный (различными стимул€торами, митогенами) синтез цитокинов отражает потенциальную, резервную способность клеток отвечать на антигенный стимул (в частности, на действие лекарственных препаратов). —ниженна€ индуцированна€ продукци€ цитокинов может служить одним из признаков иммунодефицитного состо€ни€. ÷итокины не специфичны в отношении конкретного антигена. ѕоэтому специфическа€ диагностика инфекционных, аутоиммунных и аллергических заболеваний с помощью определени€ уровн€ тех или иных цитокинов невозможна. ¬ то же врем€ оценка уровней цитокинов позвол€ет получить данные о т€жести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и прогнозе, функциональной активности клеток иммунной системы, о соотношении Th1- и Th2-клеток, что очень важно при дифференциальной диагностике р€да инфекционных и иммунопатологических процессов.

 

¬ биологических средах можно определить цитокины количественно с помощью целого р€да методов иммуноанализа, использу€ поликлональные и моноклональные антитела (см. гл. 4). »‘ј позвол€ет узнать, каковы точные концентрации цитокинов в био-

логических жидкост€х организма. »ммуноферментное вы€вление цитокинов имеет р€д преимуществ перед другими методами (высока€ чувствительность, специфичность, независимость от присутстви€ антагонистов, возможность точного автоматизированного учета, стандартизации учета). ќднако и этот метод имеет свои ограничени€: »‘ј не характеризует биологическую активность цитокинов, может давать ложные результаты за счет перекрестно-реагирующих эпитопов.

Ѕиологическое тестирование провод€т на основе знани€ основных свойств цитокинов, их действи€ на клетки-мишени. »зучение биологических эффектов цитокинов позволило разработать четыре разновидности тестировани€ цитокинов:

1) по индукции пролиферации клеток-мишеней;

2) по цитотоксическому эффекту;

3) по индукции дифференцировки костно-мозговых предшественников;

4) по противовирусному действию.

»Ћ-1 определ€ют по стимулирующему действию на пролиферацию мышиных тимоцитов, активированных митогеном in vitro; »Ћ-2 - по способности стимулировать пролиферативную активность лимфобластов; по цитотоксическому действию на мышиные фибробласты (L929) тестируют ‘Ќќа и лимфотоксины.  олониестимулирующие факторы оценивают по их способности поддерживать рост костномозговых предшественников в виде колоний в агаре. ѕротивовирусную активность »‘Ќ вы€вл€ют по угнетению цитопатического действи€ вирусов в культуре диплоидных фибробластов человека и опухолевой линии фибробластов мышей L-929.

—озданы клеточные линии, рост которых зависит от присутстви€ определенных цитокинов. ¬ табл. 7.1 представлен список клеточных линий, используемых дл€ тестировани€ цитокинов. ѕо способности индуцировать пролиферацию чувствительных клеток-мишеней провод€т биотестирование »Ћ-1, »Ћ-2, »Ћ-4, »Ћ-6, »Ћ-7, »Ћ-15 и др. ќднако эти методы тестировани€ отличаютс€ недостаточной чувствительностью и информативностью. ћолекулы ингибиторов и антагонистов могут маскировать биологическую активность цитокинов. Ќекоторые цитокины про€вл€ют общую биологическую активность. “ем не менее эти методы идеальны дл€ тестировани€ специфической активности рекомбинантных цитокинов.

 

“аблица 7.1.  леточные линии, используемые дл€ тестировани€ биологической активности цитокинов

ќкончание табл. 7.1

Ћабораторна€ работа 7-1





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 582 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќаглость Ц это ругатьс€ с преподавателем по поводу четверки, хот€ перед экзаменом уверен, что не знаешь даже на два. © Ќеизвестно
==> читать все изречени€...

1751 - | 1423 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.011 с.