Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ѕор€док работы. 1. ѕолучают суспензию тимоцитов в концентрации 12×106/мл среды R–ћI 1640, содержащей 10% сыворотки эмбрионов коров и 2-меркаптоэтанол (5×10-5

1. ѕолучают суспензию тимоцитов в концентрации 12×106/мл среды R–ћI 1640, содержащей 10% сыворотки эмбрионов коров и 2-меркаптоэтанол (5×10-5 ћ).

2. √отов€т р€д последовательных двукратных разведений опытных (биологические жидкости организма) и контрольных образцов. ¬ качестве контрольных используют биологические жидкости, содержащие »Ћ-1 или образцы, полученные при инкубации мононуклеарных клеток без Ћѕ—, и лабораторный стандартный »Ћ-1-содержащий препарат. ¬ 96-луночные круглодонные планшеты из каждого разведени€ перенос€т по 50 мкл в 6 лунок.

3. ¬ три лунки каждого разведени€ добавл€ют по 50 мкл растворенного в полной среде очищенного ‘√ј (Wellcome) в концентрации 3 мкг/мл, а в другие 3 лунки - по 50 мкл среды.

 

4. ¬ каждую лунку добавл€ют по 50 мкл суспензии тимоцитов и инкубируют в течение 48 ч при 37 ∞—.

6. ѕеред завершением культивировани€ в лунки внос€т по 50 мкл раствора (1 мк и/мл) ['3Ќ]-тимидина и инкубируют еще 20 ч.

7. ƒл€ определени€ уровн€ радиоактивности клетки культуры перенос€т на фильтровальную бумагу с помощью автоматического сборщика клеток, фильтры высушивают и определ€ют включение метки жидкостным сцинтилл€ционным счетчиком.

8. –езультаты выражают в виде коэффициента стимул€ции.

где mcp - среднее число импульсов в 3 лунках.

≈сли тимоциты отвечают на стимул€цию стандартным »Ћ-1, то индекс стимул€ции исследуемого образца, превышающий 3, достоверно свидетельствует об »Ћ-1-активности.

Ѕиоанализ €вл€етс€ единственным методом дл€ оценки функционировани€ цитокина, но данный метод должен быть дополнен разными видами соответствующего контрол€ на специфичность с использованием моноклональных антител. ƒобавление определенных моноклональных антител к цитокину в культуру блокирует биологическую активность цитокина, что доказывает: сигналом к пролиферации клеточной линии служит определ€емый цитокин.

»спользование биоанализа дл€ вы€влени€ интерферона. ѕринцип оценки биологической активности »‘Ќ основан на его противовирусном действии, которое определ€етс€ по степени ингибиции размножени€ тест-вируса в культуре клеток.

¬ работе могут быть использованы клетки, чувствительные к действию »‘Ќ: первично трипсинизированные клетки-фибробласты эмбрионов кур и человека, перевиваемые клетки диплоидных фибробластов человека и культура мышиных клеток (L929).

ѕри оценке противовирусного действи€ »‘Ќ целесообразно использовать вирусы с коротким циклом размножени€, высокой чувствительностью к действию »‘Ќ: вирус энцефаломиелита мышей, везикул€рного стоматита мыши и др.

 


<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
III. ќценка клеток-мишеней | ќпределение активности интерферона
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 350 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

≈сть только один способ избежать критики: ничего не делайте, ничего не говорите и будьте никем. © јристотель
==> читать все изречени€...

453 - | 415 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.