Принцип метода. Белки, полипептиды, как и свободные a-аминокислоты, дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином (гидрат трикетогидриндена). Реакция характерна для a-аминогрупп аминокислот.
На I стадии реакции образуется восстановленный нингидрин за счет окислительного дезаминирования (образование NН3) и декарбоксилирования (образование СО2) a-аминокислот:
Окисленный Восстановленный
нингидрин нингидрин
На II стадии образовавшийся аммиак реагирует с эквимолярными количествами окисленного и восстановленного нингидрина, образуя сине-фиолетовый продукт, интенсивность окраски которого (при 570нм) пропорциональна количеству аминокислоты:
Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1%-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1%-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли 0,5%-ного раствора нингидрина и нагревают до кипения. Через 2–3 минуты в пробирках появляется розовое, красное, а затем сине-фиолетовое окрашивание.