ХОД РАБОТЫ: наносят на тарелку в соответствующие квадраты (лунки) пипеткой крупные капли сывороток двух серий I(0), II(A), III(B) групп (нельзя допускать смешивания сывороток!). Концом чистой стеклянной палочки (или углом предметного стекла) захватывают небольшое количество крови и помещают рядом с каплей сыворотки (капля вносимой крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки), осторожно перемешивают. Вносят кровь и в две остальные капли сывороток, используя другие стеклянные палочки или углы предметного стекла. Слегка покачивая тарелку в течение 5 мин, наблюдают за каплями. Затем добавляют каплю физиологического раствора для исключения ложной агглютинации и оценивают результат. Агглютинация выглядит в виде мелких красных крупинок, постепенно увеличивающихся в размере на фоне светлеющей сыворотки. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности эритроцитов исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.
Б) Метод стандартных эритроцитов.
ХОД РАБОТЫ: на тарелку, разделенную на секторы наносят каплю сыворотки исследуемой крови, которая в 10 раз меньше капли стандартных эритроцитов; рядом поместите каплю стандартных эритроцитов А(II) и В (III) групп. Действия проводят разными стеклянными палочками. Перемешивают капли углом предметного стекла, тарелочку покачивают в течение 3 минут; затем добавляют по капле физиологический раствор для исключения ложной агглютинации, продолжают смешивать покачиванием и через 5 минут оценивают результат. На основании наличия (+) или отсутствия (-) агглютинации делают вывод о принадлежности сыворотки исследуемой крови к определённой группе по системе АВО.
Оценка результатов.
| Группы крови | стандартные сыворотки (их антитела взаимодействуют с антигенами на мембранах эритроцитов исследуемой крови) | Стандартные эритроциты(их антигены взаимодействуют с антителами сыворотки исследуемой крови) | |||
| I ab | II b | III a | А(II) | В (III) | |
| 0(I) ab | - | - | - | + | + |
| A(II)b | + | - | + | - | + |
| B(III)a | + | + | - | + | - |
| АВ (IV) - | + | + | + | - | - |
Определение групповой принадлежности крови по системе АВ0 методом цоликлонов.
Цоликлоны - продукты гибридных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридные клеточные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, полностью идентичных по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.
Цоликлоны анти-А (аналог агглютинина альфа) и анти-В (аналог агглютинина бета) предназначены для определения групп крови человека вместо стандартных сывороток. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается; температура воздуха в помещении должна быть от 15 до 25º С.
ЦЕЛЬ: освоить методику определения групп крови по системе АВ0 методом цоликлонов.
ОСНАЩЕНИЕ: стерильные перчатки, цоликлоны анти-А (розовый цвет) и анти-В (голубой цвет), исследуемая кровь.
ХОД РАБОТЫ: наденьте перчатки. Нанесите на пластинку по одной капле (0,1 мл) реагентов анти-А и анти-В и рядом по одной капле крови (0,1 мл), которая в 10 раз меньше капли сыворотки.
Реактив и кровь тщательно перемешайте стеклянными палочками. Наблюдение за ходом реакции проводите при легком покачивании пластинки в течение 2-5 минут. При положительном результате - агглютинация эритроцитов; при отрицательном результате капля - равномерно окрашена в красный цвет, агглютинаты не обнаруживаются.
| Группа крови | цоликлон анти-А | цоликлон анти-В |
| 0(I) ab | - | - |
| A(II)b | + | - |
| B(III)a | - | + |
| АВ (IV) - | + | + |
Оценка результатов:
| цоликлон анти-А | цоликлон анти-В | Вывод: |
| эритроциты исследуемой крови относятся к группе |
