Микробиологическая диагностика лептоспирозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, спинномозговая жидкость, моча.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.5). Из исследуемого материала готовят препарат "раздавленная" капля и микроскопируют в темном поле зрения. В положительном случае видны серебристые лептоспиры, представляющие собой подвижные изогнутые нити длиной 6—9 мкм с первичными и вторичными завитками (рис. 16.1.5). Загнутые крючкообразные концы придают лептоспирам S-образную форму. Для живых лептоспир характерны активное поступательное движение (прямолинейное), вращение на месте и перемещение по кругу. Ввиду очень слабой восприимчивости лептоспир к красителям исследуют только нативные препараты.

Бактериоскопия крови (а при менингеальных явлениях и спинномозговой жидкости) позволяет установить диагноз в ранней стадии заболевания (первые 5 дней). Однако отрицательные результаты не исключают лептоспирозной природы заболевания. Исследование мочи рационально проводить начиная с 10-го дня болезни.

Бактериологическое исследование. Культуры лептоспир выделяют на водно-сывороточной или фосфатно-сывороточной среде с добавлением инактивированной кроличьей сыворотки. Исследуемый материал засевают у постели больного в 3—5 пробирок, заливают стерильным вазелиновым маслом (для ограничения доступа кислорода воздуха) и инкубируют при 28 "С не менее 2 мес. Поскольку при росте лептоспир среда остается прозрачной, через каждые 5—6 дней из среды готовят препараты для микроскопии в темном поле. Идентификацию выделенной чистой культуры осуществляют на основании морфологии, подвижности, культу-ральных признаков и антигенных свойств. Для серологической идентификации и сероти-пирования используют РА с набором диагностических сывороток. Используют также моле-кулярно-биологические методы идентификации.

Биопроба. Внутрибрюшинно
или подкожно заражают мор
ских свинок, крольчат или зо-
Рис.16.1.5. Лептоспира в темном лотистых хомячков. Животных
поле зрения. держат под наблюдением в те-

чение месяца. При заболевании или гибели животного готовят препараты из крови, мочи, материала, полученного после вскрытия, микроскопируют их в темном поле и делают посевы для выделения чистой культуры лептоспир.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Антитела в крови пациентов удается обнаружить с конца 1-й недели болезни. Для их выявления используют реакцию агглютинации-лизиса с живыми эталонными культурами лептоспир разных серогрупп и сероваров. Учет результатов реакции проводят методом термопольной микроскопии в препаратах "раздавленная" капля в темном поле. В положительном случае отмечают агглютинацию и лизис лептоспир. При этом в первых разведениях сыворотки наблюдаются полное растворение лептоспир, частичный лизис или зернистое набухание, в последующих разведениях — агглютинация лептоспир и появление агломератов в виде паучков. Диагностический титр реакции 1:100. Максимальный титр антител (1:1000— 1:10 000 и выше) наблюдается на 15—30-й день заболевания. Ввиду того что у части переболевших антитела в высоких титрах сохраняются в течение многих лет, диагностическое значение имеет нарастание титра антител в парных сыворотках.

• Микробиологическая диагностика сапа

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из язвенных поражений, абсцессов, отделяемое из носа.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки и окрашивают по методу Грама. В мазках обнаруживаются мелкие (2—4 х 0,5—1 мкм) грамотрицатель-ные палочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Burkholderia mallei культивируют на простых питательных средах. Они образуют мелкие гладкие колонии, имеющие кремовую окраску, которые появляются на 2—3-й день. Чистую культуру возбудителя идентифицируют по морфологии микробных клеток, подвижности (B.mallei неподвижны), тинкториальным, культуральным и биохимическим признакам.

обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Для обнаружения антител к возбудителю используют реакции агглютинации, РНГА, РСК.

Кожно-аллергическая проба. Диагностическое значение имеет постановка кожно-аллергической пробы с маллеином (аллергеном, приготовленным из B.mallei).

• Микробиологическая диагностика листериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, смывы из зева, спинномозговая жидкость, околоплодные воды, плацента.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. В мазках из исследуемого материала, окрашенных по методу Грама, обнаруживаются мелкие короткие (0,5—2x0,4—0,5 мкм) грамположительные палочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на богатые питательные среды (кровяной агар, сердечно-мозговой бульон и др.), применяют также селективные среды с высоким содержанием NaCl, антибиотиками (полимик-син, цефтазидим) и другими селектирующими агентами. Посевы инкубируют 5—7 дней при 35 °С. На кровяном агаре характерен р-гемолиз. Идентификацию осуществляют по морфологии микробных клеток, культуральным и биохимическим признакам. Для видовой и внутривидовой идентификации осуществляют серотипирование (по жгутиковому антигену и соматическому антигену клеточной стенки) и фаготипирование.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Для быстрого обнаружения антигенов возбудителя в мазках из исследуемого материала используют метод прямой ИФ.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика мало информативна и практически не применяется.