Виконати лабораторні роботи:
ЗАВДАННЯ 1. Приготувати витяжку із рослинної сировини.
У вигляді алкалоїдів – основ. Біля 5г подрібненої рослинної сировини помістити в колбу об’ємом 250 мл з притертим корком, зволожте 5 мл розчину гідроксиду амонію, старанно перемішайте і залийте 70 мл хлороформу. Колбу закрийте корком і перемішайте на апараті для струшування (АВУ - 1) протягом 40 хв (для запобігання викидів витяжки, внаслідок збільшення виділення парів розчинника, необхідно час від часу відкривати корок колби). Витяжку відфільтруйте через вату в колбу, прикриваючи лійку годинниковим склом. З отриманої хлоформної витяжки розчинник відженіть на водяному огрівнику до об’єму 1 – 2 мл, залишок в колбі перенесіть в фарфорову чашку і випарте досуха на водяному огрівнику. Сухий залишок розчиніть в 5 мл розчину хлористоводневої кислоти і проведіть якісні реакції та хроматографічний аналіз.
У вигляді алкалоїдів – солей. Зважте 3 г подрібненої рослинної сировини, перенесіть її в колбу із шліфом і залийте 40 мл 1% розчину хлористоводневої кислоти. Екстракцію алкалоїдів проводьте на киплячому водяному огрівнику із зворотнім холодильником протягом 20 хв. Після охолодження витяжку відфільтруйте і розчином гідроксиду натрію підлужніть до рН 10 – 12. Основи алкалоїдів відекстрагуйте 10 – 30 мл. органічного розчинника (хлороформ, дихлоритан), перемішуючи в роздільній лійці протягом 5 – 10 хв. Органічну фракцію відділіть від водної і помістіть у фарфорову чашку. Органічний розчинник випарте досуха на водяному огрівнику, а сухий залишок розчиніть в 5 мл розчину хлористоводневої кислоти. З отриманою витяжкою проведіть якісні реакції на алкалоїди та її хроматографічний аналіз.
ЗАВДАННЯ 2 Виявити алкалоїди у витяжці за допомогою якісних реакцій і хроматографії.
Загальноосадові реакції на алкалоїди:
На предметне скло нанесіть 6 окремих крапель досліджуваної витяжки. Поряд з кожною краплею нанесіть по дві краплі реактивів: Бушерда, Драгендорфа, Майєра, Зонненштейна, розчину таніну і пікринової кислоти. Скляною паличкою з’єднайте краплю витяжки з краплею реактиву. Спостерігайте утворення помутніння або утворення осаду, що свідчить про наявність у витяжці алкалоїдів. Відмітьте результати реакцій і запишіть у вигляді таблиці.
Таблиця 1. Результати якісних реакцій на алкалоїди.
| № з/п | Реактив | Результати реакцій |
Кольорові реакції на алкалоїди. Реакція Віталі-Морена.
2 мл досліджуваної витяжки випарте в фарфоровій чашці досуха. Сухий залишок розчиніть в 1 мл концентрованої азотної кислоти. Розчин випарте досуха на водяній бані, додайте декілька крапель ацетону і 1-2 краплі 0,5 н спиртового розчину калію гідроксиду. Зафіксуйте результати реакції в протоколі з зазначенням хімізму реакції.
Хроматографічне виявлення алкалоїдів.
На хроматографічну пластинку із закріпленим шаром силікагелю нанесіть 5-8 крапель хлороформної витяжки і поряд 2-3 краплі розчину достовірного зразку алкалоїду (“свідка”). Пластинку з нанесеною витяжку і зразками “свідків” помістіть у камеру і хроматографуйте в системі: ефір-ацетон-діетиламін (80:20:25) або хлороформ-ацетон-амонію гідроксид (40:20:1), після чого підсушіть в сушильній шафі при температурі 45-500С і проявіть реактивом Драгендорфа в модифікації Муньє.
На основі величини Rf ідентифікуйте окремі алкалоїди.
ЗАВДАННЯ 3. Визначити кількісний вміст алкалоїдів у сировині за ДФ ХІ.
Біля 5г подрібненої рослинної сировини внести в колбу об’ємом 250 мл з притертим корком, зволожте 5 мл розчину гідроксиду амонію, старанно перемішайте і залийте 70 мл хлороформу. Колбу закрийте корком і перемішайте на апараті для струшування (АВУ - 1) протягом 40 хв (для запобігання викидів витяжки, внаслідок збільшення виділення парів розчинника, необхідно час від часу відкривати корок колби). Витяжку відфільтруйте через вату в колбу, прикриваючи лійку годинниковим склом. Для визначення алкалоїдів у сировині відміряйте 50 мл витяжки, а ту кількість, що залишилась використайте для реакцій ідентифікації і хроматографії. 50 мл одержаної витяжки перенесіть в роздільну лійку. Мірний циліндр двічі промийте хлороформом по 5 мл, який приєднайте до витяжки. Із хлороформної витяжки алкалоїди максимально екстрагуйте послідовно 15,10,5мл 1% розчином хлористоводневої кислоти. Солянокислу витяжку профільтруйте через змочений водою фільтр, який промийте двічі 1% розчином хлористоводневої кислоти по 5мл приєднуючи промивні води до витяжки. До одержаної витяжки додайте розчин амонію гідроксиду до лужної реакції (за фенолфталеїном або універсальним індикатором) і алкалоїди екстрагуйте послідовно 10,10,5 мл хлороформу, збовтуючи по 3 хв. Хлороформну витяжку профільтруйте через паперовий фільтр з 2 – 2.5 г безводного сульфату натрію, змоченого хлороформом. Фільтр промийте хлороформом двічі по 5 мл, приєднайте його до загального об’єму хлороформної витяжки.
Кількісне визначення алкалоїдів проведіть одним з наведених методів (за вказівкою викладача).
1. Кількісне визначення алкалоїдів у листках беладонни, дурману звичайного і блекоти (ДФ ХІ, с.251 - 253).
З одержаної хлороформної витяжки розчинник відженіть на водяному огрівнику до об’єму 1-2 мл, залишок хлороформу в колбі висушіть продуванням повітря до повного зникнення запаху. Сухий залишок розчиніть в 15 мл розчину хлористоводневої кислоти (0,22 моль/л) при нагріванні на водяному огрівнику, додайте 2 краплі розчину метиленового червоного і 1 краплю розчину метиленового синього і надлишок хлористоводневої кислоти відтитруйте розчином натрію гідроксиду (0,02 моль/л) до появи зеленого забарвлення.
Вміст суми алкалоїдів у перерахунку на гіосціамін у абсолютно сухій сировині в процентах (Х) розрахуйте за формулою:
, де
0,005780 – кількість алкалоїдів у перерахунках на гіосціамін, що відповідає 1мл розчину хлористоводневої кислоти (0,02 моль/л), в г;
V – об’єм розчину натрію гідроксиду (0,02 моль/л), що витрачено на
титрування, в мл;
m – маса сировини, що відповідає взятому об’єму хлороформної
витяжки, в г;
w – втрата в масі при висушуванні сировини, в %.
2. Кількісне визначення алкалоїдів у траві чистотілу (ДФ ХІ, с.309 - 311).
Об’єднані хлороформні витяжки перенесіть в круглодонну колбу і відженіть хлороформ досуху на ротаційному випарювачі.
Сухий залишок кількісно перенесіть за допомогою 5 мл хлороформу, 10 мл льодяної оцтової кислоти, 10 мл ацетонітрилу і титруйте потенціометрично розчином хлорної кислоти (0.05 моль/л).
Паралельно проведіть контрольний дослід.
Вміст суми алкалоїдів у перерахунку на хелідонін в абсолютно сухій сировині в процентах (Х) розрахуйте за формулою:
, де
0,01765 – кількість суми алкалоїдів у перерахунку на хелідонін, що відповідає
1 мл розчину хлорної кислоти, в г;
V – об’єм хлорної кислоти, що йде на титрування суми алкалоїдів, в мл;
V1 – об’єм хлорної кислоти, що йде на титрування в контрольному досліді, в мл;
M – маса сировини, в г;
W – втрата в масі при висушуванні сировини, в %.
3. Кількісне визначення алкалоїдів у траві термопсису ланцетного (ДФ ХІ, с.335 - 338).
50 мл одержаної витяжки перенесіть в колбу ємкістю 100мл і хлороформ відженіть до об’му 1 – 2 мл. Залишок хлороформу висушіть продуванням повітря. До залишку додайте 2мл розчину натрію гідроксиду (0,1 моль/л) і протріть скляною палочкою до повного зникнення комочків, потім прибавте 8мл води і перемішайте. До вмісту додайте 10мл розчину хлористоводневої кислоти (0,1 моль/л), обережно перемішайте і залишіть на 8 – 10хв, потім збовтайте на апараті для струшування 8 – 10хв і профільтруйте через складчастий фільтр.
10мл фільтрату перенесіть в колбу об’ємом 50мл, прибавте 10мл води, 2 краплі розчину метилового червоного і відтитруйте надлишок кислоти розчином натрію гідроксиду (0,1 моль/л) до появи жовтого забарвлення.
Паралельно проведіть контрольний дослід. В колбу ємкістю 50мл помістіть 1мл розчину натрію гідроксиду (0,1 моль/л), додайте 4 мл води і 5 мл розчину хлористоводневої кислоти (0,1 моль/л), перемішайте. До суміші додайте 2 краплі розчину метилового червоного і відтитруйте надлишок кислоти розчином натрію гідроксиду (0,1 моль/л) до появи жовтого забарвлення.
Вміст суми алкалоїдів у перерахунку на термопсин і абсолютно суху сировину в процентах (X) розрахуйте за формулою:
, де
0,0244 – кількість алкалоїдів у перерахунку на термопсин, що відповідає 1 мл розчину хлористоводневої кислоти, в г;
V1 – об’єм розчину натрію гідроксиду, використаного на титрування контрольного досліду, в мл;
V2 – об’єм розчину натрію гідроксиду, використаного на титрування досліджуваного розчину, в мл;
m – маса сировини, в г;
w – втрата в масі при висушуванні сировини, в %.
ЛІТЕРАТУРА
Основна
4. Ковальов В.М., Павлій О.І., Ісакова Т.І. Фармакогнозія з основами біохімії рослин. – Х.: Прапор, 2000. – С.445 – 551.
5. Муравьева Д.А. Фармакогнозия.- М.: Медицина, 1991. - С.301 – 399.
6. Государственная фармакопея СССР: Вып.2 - ХІ изд. – М.: Медицина, 1989. – С.251 – 253, 260 – 261, 272 – 274, 309 – 311, 335 – 338.
7. Державна Фармакопея України /Державне підприємство “Науково-експертний фармакопейний центр”. – 1-е вид. – Харків: РІРЕГ, 2001
8. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И.Гринкевич, Л.Н. Сафронич.-М.: Высшая школа, 1983. - С. 122-170.
9. Аналітично-нормативна документація:
10. Кореневище кубышки желтой, ФС 42 – 608 – 72;
11. Семя дурмана индейского, ФС 42 – 1005 – 79;
12. Трава термопсиса очередноцветкового, ФС 42 – 1281 – 79;
13. Трава ефедры хвощевой, ФС 42 – 525 – 72;
14. Трава плауна - баранца, ФС 42 – 528 – 72;
15. Трава аконита джунгарского сырая, ФС 42 – 269 – 72;
16. Трава маклеи, ВФС 42 – 950 – 80;
17. Лист унгернии Виктора, ВФС 42 – 1520 – 80;
18. Лист катарантуса розового, ВФС 42 – 1106 – 81.
Додаткова
19. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. – Л.: Наука, 1984; 1986; 1987; 1988; 1990; 1991; 1993.
20. Растительные ресурсы Росcии и сопредельних государств: Цветковые растения, их химический состав, использование.– СПб.:Наука, 1994;1996.
21. Носаль І.М. Від рослини – до людини: Розповіді про лікувальні та лікарські рослини України. –К.: Веселка, 1995.-606с.
22. Лекарственные препараты Украины. 1999 – 2000 / Кол. авторов.- В трех томах.-Х.: Прапор, 1999. – 464, 622, 638с.
23. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух томах. –Х.: Торсинг, 1997. – 560, 592с.
24. Генри Т.А. Химия растительных алкалоидов.- М.: Госхимиздат, 1956.- 904с.
25. Орехов А.П. Химия алкалоидов растений СССР. – М.: Наука, 1965.- 391с.
26. Орехов А.П. Химия алкалоидов. – М.: Изд-во АН СССР, 1955.- 859с.
27. Юнусов С.Ю. Алкалоиды. – Ташкент: Фан,1974. – 318с.
28. Ловкова М.Я. Биосинтез и метаболизм алкалоидов в растениях. - М.: Наука, 1981.-171с.
