Виконати лабораторні роботи:
Завдання 1. Визначити тотожність та доброякісність подрібненої ЛРС за зовнішніми та мікроскопічними діагностичними ознаками.
Об'єкти аналізу: листки мучниці, листки брусниці; кора крушини, листя сени, корінь ревеню; трава гірчаку перцевого, почечуйного, пташиного; корінь вовчуга, трава собачої кропиви п'ятилопатевої, череди трироздільної; корінь родовика, кореневище змійовика, кора дуба, листя скупмії.
Методичні вказівки: коротко опишіть зовнішні ознаки досліджуваної подрібненої ЛРС, приготуйте з неї мікропрепарат. Вивчіть мікроскопічні ознаки, замалюйте найбільш характерні діагностичні елементи анатомії, опишіть їх. Встановіть тотожніть ЛРС за визначником.
Завдання 2. Приготувати витяжки з ЛРС (1 об’єкт).
Об'єкти аналізу: листки мучниці, кора крушини, листя сени, корінь щавлю, кореневище з коренями марени, плоди амі зубної, трава буркуну, плоди кропу, трава гречки, звіробою плямистого, квіти пижма, квіти цмину піскового, корінь родовика, кора дуба, супліддя вільхи.
Методичні вказівки:
Водна витяжка: 5,0 г подрібненої рослинної сировини помістіть в колбу об’ємом 100 мл, залийте 50 мл гарячої води і залишіть на 15 хв. на киплячій водяній бані. Приблизно 5 мл витяжки профільтруйте гарячою (фільтрат досліджуйте на вміст арбутину). Решту вмісту колби охолодіть і профільтруйте через шматочок вати. Одержану витяжку використовуйте для виявлення антраценпохідних, хромонів та дубильних речовин.
Спиртова витяжка: 1 г подрібненої сировини помістіть в термостійку колбу на 100 мл і залийте 25 мл 80% етилового спирту. Колбу з’єднайте зі зворотнім холодильником і нагрівайте на киплячій водяній бані протягом 30 хв. Охолоджену спиртову витяжку відфільтруйте і досліджуйте на вміст кумаринів та флавоноїдів.
Завдання 3. Виявлення БАР у одержаних витяжках за допомогою реакцій ідентифікації.
Водна витяжка:
Виявлення простих фенолів:
1) до 1 мл фільтрату додають кристалик заліза (ІІ) сульфату. Відмітьте забарвлення та зробіть висновок про наявність арбутину.
2) до 1 мл фільтрату доливають 4 мл розчину аміаку та 1 мл 10% розчину натрію фосфорно-молібденово кислого у хлористоводневій кислоті. Відмітьте забарвлення.
Виявлення антраценпохідних:
1) до 2 мл фільтрату додати 5% спиртовий розчин NaOH. Відмітьте забарвлення.
Записати хімізм реакції.
Виявлення хромонів:
1) 15 мл витяжки випарюйте у фарфоровій чашці. До сухого залишку додайте кристалик гідроксиду калію. Відмітьте результат реакції, наведіть хімізм.
Виявлення дубильних речовин:
1) до 2 мл досліджуваної витяжки додайте по краплях 1 % розчин желатину, не допускаючи його надлишку. Опишіть зміни, які спостерігаєте і зробіть висновок про наявність дубильних речовин.
2) до 2 мл досліджуваної витяжки додайте 4-5 краплин залізо-амонійного галуну; хімічну групу дубильних речовин визначте за забарвленням утвореного комплексу.
3) до 2 мл досліджуваної витяжки додайте 4 мл 10 % розчину ацетатної кислоти і 2 мл 10 % розчину ацетату свинцю. Утворюється осад (яка група дубильних сполук?), який відфільтруйте. До фільтрату додайте кілька краплин 1 % розчину залізо-амонійного галуну. Опишіть зміни, які спостерігаєте і зробіть висновки.
Спиртова витяжка:
Виявлення кумаринів:
1) до 3-5 мл витяжки додайте 5 крапель 5% розчину натрію гідроксиду і нагрівайте на водяній бані 5-7 хв. Відмітьте зміну забарвлення (при наявності кумаринів розчин жовтіє), дайте пояснення.
а) лактонна проба: 1 мл підлужненої витяжки розведіть чотирикратною кількістю води, суміш нейтралізуйте 20% розчином сульфатної кислоти. Який продукт утворюється при наявності кумаринів? Що відбувається в ході реакції? Напишіть схему реакції.
б) реакція утворення азобарвника: до 1 мл підлужненої витяжки додайте 3-5 крапель свіжоприготованого розчину п-нітроаніліну (до 1 мл 0,1н. хлористоводневої кислоти додайте 1 мл 5% розчину нітриту натрію і 0,5 мл цього розчину змішайте з 1 мл 0,5% розчину п-нітроаніліну). Що спостерігається в результаті реакції? Напишіть схему реакції.
Виявлення флавоноїдів:
1) до 1 мл витяжки додайте 5-8 крапель відповідного реактиву: 10 % розчину NaOH, 3 % розчину FeCl3, 10 % розчину AlCl3, 2 % розчину основного ацетату свинцю. Відмітьте результати реакцій.
2) Ціанідинова реакція. До 2 мл витяжки додайте 0,5 мл етанолу і 5-6 крапель конц. хлористоводневої кислоти. Реакційну суміш нагрівайте 4-5 хв на киплячій водяній бані, потім додайте 10-15 мг металічного магнію або цинку. Через 3-5 хв відмітьте результат реакції.
Всі результати якісних реакцій оформіть у вигляді таблиці:
Таблиця 1. Результати якісних реакцій на групи біологічно активних речовин.
| № п/п | Група БАР | Реактив | Результат реакції (колір, осад, інші зміни) | Висновок про наявність чи відсутність групи БАР |
