Диференційно-діагностичні селективні середовища

Агар для ідентифікації лістерій (PALCAM) –

Listeria Identification Agar (PALCAM) (M1064) Поліміксин (Polymyxin) – Акрифлавін (Acriflavine) – Літій (Lithium-chloride) – Цефтазідім (Ceftazidime) Ескулін (Esculin) – Маніт (Mannitol) агар з добавкою FD061 рекомендований для виділення лістерій з харчових продуктів

Приготування. Розмішати 34,5 г порошку в 500 см³ дистильованої води. Прокип'ятити до повного розчинення середовища. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до 50⁰С і асептично додати розчинений в дистильованій воді вміст 1 флакона з Селективною добавкою для лістерій (PALCAM) (FD061). Ретельно перемішати і розлити середовище в стерильні чашки Петрі. Готове середовище має червоне забарвлення, прозоре, із злегка опалесцуючою поверхнею.

Принцип і оцінка результату. Середовище є високо селективним через наявність в ньому хлориду літію, цефтазідіму, поліміксину і акрифлавіну. PALCAM агар - диференційно-діагностичне середовище. Використовуються 2 індикаторні системи: ескулінова і манітна.

Listeria monocytogenes гідролізує ескулін на ескулетин і глюкозу. Реагуючи з цитратом заліза, ескулетин утворює коричнево-чорний комплекс, що приводить до потемніння середовища навкруги колоній. Лістерії не ферментують маніт, тому зброджуючі маніт ентерококи і стафілококи формують кольорові колонії (від червоного до жовтого). Мікроаерофільні умови обмежують ріст аеробів, наприклад, представників родів Bacillus і Pseudomonas.

Введення до складу середовища яєчного жовтка (2,5%) сприяє відновленню пошкоджених клітин. Додавання середовища з кров'ю поверх PALCAM агару дозволяє диференціювати і підрахувати кількість гемолітичних лістерій.

Залежно від типу аналізованого зразка перед висівом на PALCAM агар повинне бути проведено збагачення в різних бульйонах для селективного збагачення.

Основа Оксфордського середовища для лістерій –

Listeria Oxford Medium Base (M1145)

Рекомендовано для виділення Listeria monocytogenes з клінічного матеріалу і зразків харчових продуктів.

Приготування. Розмішати 27,75 г порошку в 500 см³ дистильованої води. Прокип'ятити до повного розчинення середовища. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до 50⁰С і асептично додати розчинений в 5 см³ 50%-го етанолу вміст 1 флакона з селективною добавкою для виділення лістерій (FD172). Ретельно перемішати і розлити середовище в стерильні чашки Петрі. Готове середовище має темно-бурштинове забарвлення з блакитним відблиском.

Принцип і оцінка результату. Хлорид літію і антибіотики пригнічують ріст грамнегативної мікрофлори і більшості грампозитивних мікроорганізмів (окремі штами Staphylococcus утворюють ескулін-негативні колонії). Listeria monocytogenes гідролізує ескулін на ескулетин і глюкозу. Реагуючи з цитратом заліза, ескулетин утворює коричнево-чорний комплекс, що приводить до потемніння середовища навкруги колоній.

Методика виділення лістерій залежить від досліджуваних зразків. Для всіх зразків рекомендується селективне і холодове збагачення.

Для зразків харчових продуктів і матеріалу з об’єктів довкілля звичайно використовують селективне збагачення.

Селективний агар для лістерій (двокомпонентне середовище) –

Listeria Selective Agar (M567)

Середовище запропоновано для культивування і виділення видів Listeria з клінічного і іншого матеріалу

Приготування Розмішати 39,0 г порошку частини А і 37,5 г порошку частини В в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або злегка опалесцує.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну і пептичний перевар тваринної тканини є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Тіамін (вітамін групи В) стимулює ріст лістерій. Роданід і налідиксова кислота пригнічують ріст грамнегативних бактерій. Комбінація селективних речовин і акридинових фарбників пригнічує ріст ентерококів. Контаміновані зразки засівають в Бульйон збагачення для лістерій безпосередньо або проводять холодове збагачення в Триптозному бульйоні (М179), після чого культури відсівають на Селективний агар для лістерій. Гемоліз можна перевірити шляхом висіву на Кров'яний агар (М073).