Listeria Enrichment Medium (UVM Medium) (М890)

Приготування. Розмішати 54,37 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до 50⁰С і асептично додати стерилізований фільтруванням розчин акрифлавіну гідрохлориду (до кінцевої концентрації 12 мкг/ см³ або 25 мкг/ см³). Готове середовище має янтарне забарвлення, з легкою опалесценцією з голубуватим відтінком.

Принцип і оцінка результату. Середовище використовують для двоступеневого селективного збагачення лістерій, що дозволяє збільшити висів Listeria monocytogenes з м'ясних продуктів протягом 3-4 днів. Це середовище рекомендують як середовище первинного збагачення для виділення лістерій, пошкоджених при термічній обробці.

Гідролізат казеїну, протеозопептон, дріжджовий і м'ясний екстракти є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Ескулін надає середовищу диференціюючи властивостей. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, що, разом з підвищеною концентрацією фосфату, додає середовищу селективних властивостей по відношенню до лістерій.

Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см³ матеріалу додають 225 см³ середовища, що містить 12 мкг/см³ акрифлавіну і інкубують при 30⁰С протягом 4 годин, після чого висівають 0,2 см³ культури на чашки з Селективним агаром для лістерій. Через 24 год. інкубації 0,1 см³ культури вносять в 10,0 см³ того ж середовища, що містить 25 мкг/ см³ акрифлавіну гідрохлориду, і через 24 год. знову роблять висів на чашки з Селективним агаром для лістерій. Бульйонні культури лістерій представляють велику небезпеку, в порівнянні з колоніями на агарі, тому при роботі з ними треба дотримуватися особливої обережності.

Бульйон збагачення для лістерій, модифікований –

Listeria Enrichment Broth, Modified (М888)

Приготування. Розмішати 52,0 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти (при необхідності) для повного розчинення частинок. Розлити у відповідні ємкості. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або з легкою опалесценцією з блакитним відтінком.

Принцип і оцінка результату. Це середовище використовують для селективного збагачення видів Listeria з молока, молочних і інших харчових продуктів. Середовище містить триптозу, дріжджовий і м'ясний екстракти, які є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій, у тому числі вітамінів, амінокислот, мікроелементів. Хлорид натрію підтримує оптимальний осмотичний тиск середовища, а фосфати надають йому буферних властивостей. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів, за винятком лістерій.

Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см³ матеріалу додають 225 см³ середовища і, при необхідності, подрібнюють. Інкубацію ведуть при 30⁰С протягом 7 діб, роблячи висів через 1, 2, і 7 днів на Селективний агар для лістерій.

Основа бульйону вторинного збагачення для лістерій –

Fraser Secondary Enrichment Broth Base (М1083)

Це середовище із спеціальною добавкою рекомендують для виділення, культивування і збагачення Listeria monocytogenes з харчових продуктів і об'єктів довкілля.

Приготування. Розмішати 57,85 г порошку в 990 см³ дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Остудити до 45-50⁰С і асептично додати розчинений в 10 см³ 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з однією з добавок Фрейзера (FD064 або FD065). Ретельно перемішати і розлити у відповідний посуд.

Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре, з легким преципітатом. Після введення добавки середовище набуває флюоресцентно-жовтого забарвлення і має легкий преципітат.

Принцип і оцінка результату. Протеозопептон, гідролізат казеїну, дріжджовий і м'ясний екстракти є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Хлорид літію пригнічує ріст ентерококів. Усі лістерії гідролізують ескулін до ескулетина, який з іонами заліза формує коричнево-чорний або чорний комплекс. Цитрат амонійного заліза стимулює ріст Listeria monocytogenes. Цей бульйон засівають матеріалом з середовища первинного збагачення. Культури, що виросли на бульйоні Фразера, відсівають на щільні середовища для підтвердження присутності лістерій.

Основа селективного бульйону для лістерій –

Listeria Selective Broth Base (М889)

Це середовище з додаванням селективних речовин рекомендують для селективного виділення і культивування Listeria monocytogenes.

Приготування. Розмішати 36,0 г порошку в 1000 см³ дистильованої води. Підігріти для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121⁰С) протягом 15 хв. Охолодити до кімнатної температури і асептично додати розчинений в 5 см³ 0,2 N NaOH вміст 1 флакона з Селективною добавкою для лістерій II (FD163) або 2 флаконів з Селективною добавкою для лістерій I (FD163I). Перед розливом ретельно перемішати.

Готове середовище має жовте флуоресціююче забарвлення, прозоре, без будь-якого преципітату.

Принцип і оцінка результату. Гідролізат казеїну, папаїновий перевар соєвого борошна і дріжджовий екстракт є джерелом необхідних поживних речовин для росту бактерій. Глюкоза є джерелом енергії. Добавки, що вносяться, надають середовищу селективних властивостей. Циклогексамід пригнічує ріст сапрофітних грибів. Налідиксова кислота і акрифлавін пригнічують ріст, відповідно, грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів.

Для збагачення до 25,0 г або 25,0 см³ матеріалу додають 225 см³ середовища і, при необхідності, подрібнюють. Інкубацію ведуть при 30⁰С до 7 доби. Вказаний період інкубації підходить для більш ефективного виділення пошкоджених зовнішніми чинниками лістерій з молока і молочних продуктів. Через 1, 2, і 7 днів інкубації матеріал висівають на Селективний агар для лістерій.