Лекции.Орг


Поиск:




Категории:

Астрономия
Биология
География
Другие языки
Интернет
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Механика
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Транспорт
Физика
Философия
Финансы
Химия
Экология
Экономика
Электроника

 

 

 

 


Приготування поживних середовищ




Загальні вимоги до виготовлення ПС викладені в ГОСТ 10444.1 - 84.

З метою підвищення достовірності та якості досліджень, перевагу слід віддавати ПС та діагностичним препаратам промислового виробництва, зареєстрованих та рекомендованих до використання в Україні.

ПС промислового виготовлення, названі в п. 6.3.2, готують відповідно до прописів на етикетці або відповідно до рекомендацій фірми виробника.

Допускається застосування ПС, приготовлених безпосередньо в лабораторії з окремих компонентів за п.п. 7.2.1 - 7.2.10.

Готові середовища розливають у стерильний посуд і зберігають у захищених від світла умовах при температурі (2-8)0С.

7.2.1. Поживний агар (МПА) з 1 % глюкози і поживний бульйон (МПБ) з 1 % глюкози готують відповідно до ГОСТ 10444.1.

7.2.2. Триптон-соєвий бульйон із дріжджовим екстрактом (TSYEB)/ Триптон-соєвий агар із дріжджовим екстрактом (TS YEA).

Склад (г/дм3): гідролізат казеїну - 17,0; папаїновий перевар соєвого борошна -3,0; натрій хлористий - 5,0; калію гідрофосфат - 2,5; глюкоза - 2,5; дріжджовий екстракт - 6,0; агар-агар (для TSYEA) - 15,0.

Компоненти розчиняють у 1 дм3 дистильованої води, ретельно перемішують, установлюють рН (7,3±0,2) і автоклавують при (121±1)0С протягом 15 хвилин.

7.2.3. Середовища селективного збагачення типу бульйону Фрейзера.

Приготування основи середовища (г/дм3): ферментативний гідролізат казеїну - 5,0; пептон - 5,0; м'ясний екстракт - 5,0; дріжджовий екстракт - 5,0; натрію хлорид - 20,0; калію дигідрофосфат -1,35; натрію гідрофосфат - 12,0; ескулін - 1,0; літій хлористий -3,0, заліза амонійного цитрат -0,25 розчиняють у 1 дм3 дистильованої води, ретельно перемішують, встановлюють рН (7,2±0,2) і автоклавують при (121±1)0 С 15 хвилин.

Перед застосуванням до основи середовища додають асептично розчин селективних компонентів наступного складу:

Середовище типу бульйону Фрейзера
первинного збагачення* вторинного збагачення
налідиксова кислота - 10 мг - 20 мг
акрифлавіну гідрохлорид - 12,5 мг - 25 мг

*Допускається при приготуванні середовища типу бульйону Фрезера первинного збагачення готувати основу середовища без додавання ескуліну та цитрату заліза амонійного.

 

Спосіб приготування: зазначені компоненти розчинити в 10 см3 стерильного 0,2 N гідроксиду натрію.

7.2.4. PALCAM-агар (поліміксин-акрифлавін-літію хлорид-цефтазидім-ескулін-манітол - агар) - селективне диференційно-діагностичне середовище для виділення лістерій.

Приготування основи середовища (г/дм3): пептон м'ясний ферментативний - 23,0; дріжджовий екстракт - 3,0; крохмаль - 1,0; натрію хлорид - 5,0; ескулін - 0,8; літію хлорид - 15,0; заліза амонію цитрат - 0,5; глюкоза - 0,5; маніт - 10,0; феноловий червоний - 0,08; агар -15,0 розчиняють у 1 дм3 дистильованої води, ретельно перемішують, установлюють рН (7,0±0,2) і автоклавують при (121±1)0С 15 хв.

До стерильної розплавленої основи середовища додають асептично розчин селективних компонентів наступного складу: акрифлавін - 0,005; поліміксин “В” - 100 000 од.; цефтазидім - 0,02 у 10 см3 стерильної дистильованої води.

Готове середовище розливають у стерильні чашки Петрі.

7.2.5. Селективне диференційно-діагностичне середовище для виділення лістерій типу Оксфордського агару.

Приготування основи середовища (г/дм3): пептон м'ясний ферментативний - 23,0; крохмаль кукурудзяний - 1,0; натрію хлорид - 15,0; ескулін - 1,0; літію хлорид - 15,0; заліза амонію цитрат - 0,5; глюкоза - 0,5; агар - 15,0 розчиняють у 1 дм3 дистильованої води, ретельно перемішують, установлюють рН (7,0±0,2) і автоклавують при (121±1)0С 15 хвилин.

До стерильної розплавленої основи середовища додають асептично розчин селективних компонентів наступного складу: акрифлавіну гідрохлорид - 0,005; циклогексамід - 0,4, колістину сульфат* - 0,02, цефатетан* - 0,002, фосфоміцин* - 0,01 мг у 10 см3 50 % етанолу.

Готове середовище розливають у стерильні чашки Петрі.

*Допускається заміна комплексу перелічених антибіотиків на поліміксин у кількості 500 000 од. на 1 дм3.

4.2.6. Кров'яний агар. До розтопленого й охолодженого до 45-500С поживного агару з 1 % глюкози (п. 7.2.1) додають 5 % об’єму дефібринованої крові тварин. Розливають по 15 см3 у чашки Петрі діаметром 90мм і підсушують при (37±1)0С.

Посів роблять у теплі чашки.

7.2.7. Поживний агар з еритроцитами барана. Дефібриновану або стабілізовану цитратом кров барана центрифугують в асептичних умовах 30 хв. при 900 об/хв. Надосадову рідину зливають. Осад суспендують у стерильному фізіологічному розчині до первісного об’єму, додають у кількості 5 % об’єму до розтопленого й охолодженого до 45-50 °С поживного агару (п. 7.2.1). Розливають у чашки Петрі діаметром 90мм по 15 см3, підсушують при (37±1)0С. Чашки використовують для посіву теплими.

7.2.8. Середовище для визначення рухливості: 20 г гідролізату казеїну ферментативного, 6 г пептону м'ясного ферментативного і 5 г агару розчиняють у 1 дм3 дистильованої води, установлюють рН (7,3±0,2), розливають у пробірки по 5-7 см3 і автоклавують при (121±1)0С 15 хвилин.

7.2.9. Середовища Гіса за ГОСТ 10444.1 з манітом, рамнозою, ксилозою. 10 г пептону ферментативного і 5 г натрію хлористого розчиняють у 1 дм3 дистильованої води і додають 10 г відповідного вуглеводу. Встановлюють рН (7,1±0,1), вносять 10 см3 індикатора Андреде (можливе використання індикатора бромкрезолового пурпурного, “ВР” і ін.), розливають у пробірки і стерилізують при (112±1)0С 20 хвилин.

7.2.10. Середовище для визначення лецитиназної активності лістерій. До поживного агару (п. 7.2.1) перед стерилізацією додають активоване вугілля, розтерте до порошкоподібного стану, до концентрації 0,5% (вага/об’єм). Жовток курячого яйця змішують з 150 см3 фізіологічного розчину і додають 5 % цієї суміші за об’ємом до стерилізованого й охолодженого до 40-500С поживного агару. Розливають у чашки Петрі по 20 см3 і підсушують при (37±1)0С. Аналогічно готують середовище з жовтком, але без активованого вугілля.

 





Поделиться с друзьями:


Дата добавления: 2015-10-19; Мы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 601 | Нарушение авторских прав


Поиск на сайте:

Лучшие изречения:

80% успеха - это появиться в нужном месте в нужное время. © Вуди Аллен
==> читать все изречения...

2240 - | 2105 -


© 2015-2024 lektsii.org - Контакты - Последнее добавление

Ген: 0.016 с.