Складність виконання кількісного аналізу залежить від кількості компонентів, входять до складуЛФ. Більшість застосовуваних медицині рідкихЛФ містить одну ЛРУ. Та й у таких розчинах можливо освіту продуктів взаємодії міжЛВ і розчинником, що слід зважати на і під час аналізу. Іноді рідкіЛФ містять, крімЛВ, різні стабілізатори (>сульфит,гидросульфит натрію), антибактеріальні добавки (бензойна кислота), т. е. є розчини кількох компонентів.
При аналізі таблеток, драже, гранул,линиментов, мазей, пігулок, капсул, які включають самаЛВ, зазвичай, його попередньо відділяють від основи чи наповнювача.
Аналіз готових лікарських форм (>ГЛФ). Виготовлені на заводах медичної промисловостіЛФ називають готовими лікарськими формами (>ГЛФ). Контроль його якості ведуть у відповідно до вимог нормативної документації У заголовкуФС дається найменуванняЛФ латинською і російською мовою. РозділиФС вони дають у такий послідовності: склад; опис; розчинність; справжність; прозорість і кольоровість; межа кислотності, лужності чи рН; сухий залишок; зміст спирту; температура кипіння; щільність; показник заломлення; кут обертання; в'язкість; визначення води; важкі метали; кількісне визначення; методи контролю; упаковка; маркірування; транспортування; зберігання; термін придатності. Окремі розділи можуть поєднуватися, а разі потреби можуть вводитися інші розділи (випробування на токсичність,пирогенность, стерильність тощо.).
Більшість розділівФС наЛФ зі свого обсягу та змісту мало від відповідних розділівФС наЛВ. Але є й світло деякі характерні риси. Головна полягає у цьому, що переважна більшістьЛФ є багатокомпонентні системи. Вони або містять чи кількаЛВ, або одна-єдинаЛВ разом із різними з хімічного структурі допоміжними речовинами. Перед приготуваннямЛФ окреслені компоненти піддаються випробувань відповідно до вимогами НП. У процесі отримання й зберігання можуть перетерплювати різні фізичні і хімічні перетворення як під впливом зовнішніх чинників, і у результаті взаємодії друг з одним. Саме тому розробляються нормативні вимоги до якостіЛФ, зокрема доГЛФ.
У ГФ наведено загальні статті наЛФ. Вони описані основні вимоги до якості Л Ф, дано вказівки з проведення випробувань різних характеристик і параметрів, вказані допустимі норми відхилень маси, обсягу, розмірів частинок та інших. Але тут вказані вимоги до упаковки, маркуванню і збереженняЛФ.
Аналіз гомеопатичних лікарських засобів. Труднощі оцінки якості гомеопатичних лікарських засобів обумовлені низькою концентрацією. Якщо біологічно активну речовину міститься унастойках,ессенциях, мазях,суппозиториях,опподельдоках в розведенні до 2 З (>2-сотенное, чи 0,0001), їх аналіз політики та стандартизація мало від контролю за якістюЛФ, які у алопатичної практиці. ЛЗ на розведенні 2-3 З (>1(Н-10'6) аналізують після проведення спеціальних прийомів концентрування з допомогоюупарювання, спалювання які у нихЛВ, з наступним визначенням однією з фізико-хімічних методів виходячи з її роздільної здатності. За більш ніж 3С-разведении (10~6) досить встановити справжність Л У, що міститься лише у разової чи добової дозі. При дуже високих розведеннях, до 50 З (>1О10°), контроль якості гомеопатичного кошти існуючими методами виконати неможливо. Для таких ЛЗ контроль якості здійснюють на стадії отримання, суворо контролюючи технологічний процес. Якість контролюють при закладанні інгредієнтів і фіксують в акті завантаження. Кожен інгредієнт піддають попереднім аналізом.
12.3 Фармакопейний аналіз однокомпонентних та багатокомпонентних ЛФ
Методи аналізуоднокомпонентних лікарських форм
В усіх фармакопеях світу важливе місце відведено аналізуЛФ. Близько 30% приватнихФС містять вимоги до якості ін'єкційних розчинів, таблеток, драже, мазей, присипок. Переважна більшість їх включає однеЛВ.Систематизація відомостей про випробування справжності й кількісному визначенню однокомпонентнихЛФ дозволяє: зробити висновок про принципи оцінки їхньої якості.
Випробування на справжність виконують, зазвичай, з допомогою хімічних реакцій, вказаних уФС на індивідуальні речовини, що входять до склад рідких і сухихЛФ. ДеякіЛВ попередньо беруть ізЛФ органічними розчинниками, та був виконують випробування. Іноді розчин рідкоїЛФ випарюють насухо, та був із залишком виконують одне чи кілька випробувань на справжність.Пігулки і драже перед випробуванням на справжність розтирають на порох, збовтують із жовтою водою або іншими розчинником (етанолом, ефіром, хлороформом, ацетоном, бензолом, розчиномхлороводородной чи оцтової кислоти, розчином аміаку чигидроксида натрію) і фільтрують. Потім із фільтратом виконують випробування на справжність, використовуючи реакції, рекомендовані ГФ (>ФС) для даногоЛФ. Олійні розчини перед виконанням випробувань розчиняють в бензолі,петролейном ефірі, хлороформі чиЛВ витягають сумішшю розчинників. Справжність витягнутогоЛВ підтверджують або за температурі плавлення (самогоЛВ або його похідного), або кольоровими чи осадовими реакціями, або з допомогоютонкослойной хроматографії.
Для випробування дійсності таблеток ГФ (>ФС) рекомендує використовувати спектрофотометрію в ІК- чиУФ-области. З порошкурастертих таблеток чи драже витягаютьЛВ (водою або іншими розчинником). Потім вимірюютьУФ-спектр і встановлюють наявність максимумусветопоглощения при визначеної довжини хвилі чи оптичну щільність в максимумісветопоглощения або розраховують значення відносин оптичнихплотностей що за різнихмаксимумах. Більше об'єктивна ідентифікаціяЛВ шляхом перевіркиИК-спектрами стандартних зразків.
Кількісний аналізоднокомпонентнихЛФ виконують у кілька етапів.
Відбір проби і взяття навішення. При аналізі твердих (таблетки, драже, гранули) і рідких (розчини, сиропи)ЛФ зазвичай керуються загальними правилами відбору проб. Спочатку відбирається необхідну кількість таблеток (драже) чи рідини. Він повинен бути достатнім у тому, щоб результати аналізу були точними для всієїЛФ. Потім після перемішування чи розтирання відважують навішення. Процес розтирання необхідний отримання гомогенної маси, у якійЛВ було б рівномірно розподілено всього обсягу проби. Не піддають розтиранню лише таблетки, покриті оболонкою, і драже.ЛВ у яких розподілено нерівномірно, коливання у своїй окремих таблеток будуть значно проводити результати визначення. Кількісний аналіз таких лікарських форм проводять з певної кількості таблеток (драже).
Підготовка лікарської форми до аналізу. Аналізуючи цей етап проводять розчинення (ми інколи з нагріванням).Вилучення лікарського речовини з лікарської форми. Вилучення Л У здійснюють ще правильною теорією і точної оцінки її змісту вЛФ. Цей етап є неминучим, як уЛФ присутні інгредієнти, заважають кількісному визначеннюЛВ. Тому необхідно або виділяти індивідуальне Л У, або відокремлювати заважають компоненти. Для поділу компонентівЛФ використовують різні способи: фільтрування, центрифугування, екстракцію, і навіть екстракцію разом із відгоном. Найчастіше відділенняЛВ застосовують фільтрування. Доекстракционним методам можна віднести вилученняЛВ чи продуктів його перетворення (органічного підстави, комплексу чи іонного асоціата). Для поділу використовують також екстракцію разом із паперової хроматографією чиТСХ.
Створення умов, необхідні виконання визначення. Після завершення попередніх операцій можливо визначенняЛВ з допомогоютитриметрических чи фізико-хімічних методів. Проте найчастіше необхідно додаткове створення спеціальних умов. Вони диктуються передусім методом, з допомогою якого проводять кількісну оцінкуЛВ у ційЛФ. Длякомплексонометрии — це створення необхідного рН середовища; для методу нейтралізації не водних середовищах — додавання ацетату ртуті (II) Виконання вимірів з визначення змісту лікарського речовини. Кількісний аналіз може бути здійсненийгравиметрическим,титриметрическими, фізико-хімічними і біологічними методами.
. Методи аналізу багатокомпонентних лікарських форм
Якісний аналіз
Труднощі в ідентифікації багатокомпонентних Л Ф у тому, що перший інгредієнт може заважати виявлення іншого чи реактив одночасно реагує з цими двома чи декількома компонентами суміші. Це відбувається у разі відсутності продукції специфічних реакцій кожен з компонентів. Разом про те одні компоненти суміші можуть сприяти відкриттю інших. Тож у на відміну від аналізуоднокомпонентнихЛФ можливі такі варіанти ідентифікаціїЛВ за спільної присутності.
1. Для ідентифікації підібрані специфічні реакції (на іони чи функціональні групи), і під час яких виявлення одного компонента корисно присутність іншого.
2.Использован реактив, який послідовно реагує спочатку з однією компонентом, потім із іншим. Наприклад, розчин формальдегіду в концентрованої сірчаної кислоті для виявлення кодеїну в суміші з кислотою ацетилсаліцилової спочатку утворюєсине-фиолетовое (кодеїн), та був червоне забарвлення (кислота ацетилсаліцилова).
3.Реактив взаємодіє зі обома компонентами, але продукти взаємодії легко можна розділити. Прикладомслужити аналіз суміші натріюбензоата і натріюсалицилата при вплив розчином сульфату міді у присутності хлороформу.Хлороформний шарнабуває блакитне забарвлення (>бензоат-ион), водний — зелене (>салицилат-ион).
4. Одне з компонентівЛФ у присутності реактиву дає кольорову реакцію в інший компонент. Так знайти первинні ароматні аміни реакцієюазосочетания, тоді як суміші присутнійрезорцин (зайвими в додаваннір-нафтола).
5. При додаванні реактивів спочатку виявляють один компонент, та був послідовно відкривають інші. Прикладом може бути виявленнябензокаина в суміші з натріюгидрокарбонатоміметамизолом-натрия реакцією освітиазокрасителя. Після поповненняхлороводородной кислоти виділяються бульбашки газу (>гидрокарбонат-ион), при наступному додаванні розчину нітриту натрію з'являється швидко зникаючесине-фиолетовое забарвлення (>метамизол-натрий) і, нарешті, від додавання лужного розчинур-нафтола суміш набуває червоний колір (>бензокаин).
6. Виявити один компонент у присутності інших неможливо без попереднього їх поділу. З цією метою використовують воду, розчини кислот чи лугів, органічні розчинники (етанол, ефір, хлороформ). Потім у отриманих екстрактах ідентифікують кожен із компонентів.
7. Використання різних видів хроматографії (>ВЭЖХ,ГЖХ,ТСХ) потреби ділити та ідентифікації компонентів твердихЛФ. Наприклад, вТСХ-анализе використання платівок «>СилуфолУФ-254». Там завдають розчин чихлороформное вилучення зЛФ і розчин стандартного зразка. Післяхроматографирования плями нахроматограмме виявляють з допомогою кольорових реакцій чиУФ-света. Такі методики застосовні в аналізі багатокомпонентних мазей і аерозолів.
8. При аналізі рідких багатокомпонентнихЛФ присутність у нихгаленових препаратів (настоянок, екстрактів), і навіть настоїв і відварів нерідко заважає виявлення інших інгредієнтів. Тому ідентифікації має екстракція чи поділ компонентів з допомогою паперової,тонкослойной чи інших напрямів хроматографії.
Кількісний аналіз
Застосуваннятитриметрических методів грунтується на особливостях фізичних і хімічних властивостей інгредієнтів, входять до складуЛФ, причому, чим більше подібності у тих властивості, важче з достатньої точністю здійснити визначення кожного з компонентів. При аналізіЛФ, містять три інгредієнта і більше, рідко знаходить єдиний метод, дозволяє визначити все компоненти. Тому використовують поєднання кількох методів, виходячи з особливостях таких фізичних і хімічних властивостей інгредієнтів, як розчинність,кислотно-основние, окислювально-відновні властивості, можливість взаємодії з різнимититрантами і реактивами.
Кількісний хімічний аналіз лікарських речовин, у багатокомпонентних сумішах можуть виконати без поділу компонентів суміші чи ж після попереднього поділу суміші деякі компоненти.
Любі одногрупники, текст виділений червоним не є обов’язковим, якщо вам мало вищеописаного можете збагатити свої знання ще цими деталями, проте на мою думку це лишнє. Удачі на к.р! Гідним перекладом червоного тексту я не страждала, так як вважаю його не потрібним, але все ж таки хочу щоб ви самі вирішили чи воно вам потрібно.
Кількісний аналіз без поділу компонентів суміші
>Титриметрический аналіз лікарської суміші, що включає два інгредієнта і більше, можна виконати без поділу компонентів. І тому підбирають умови, у яких визначення одного компонента корисно визначенню інших. У цьому використовуютьтитриметрические методи, засновані на відмінності властивостей речовин, які у суміші (>кислотно-основних властивостей, констант комплексоутворення, творів розчинності та інших.).Найчастіше застосовують методи, засновані на одночасномутитровании суми двох компонентів. Потім кількісно визначають на утримання однієї з цих компонентів, використовуючи методи, засновані на властивості, властивих лише даному речовини. Розрахунок роблять за різниці між кількістю мілілітрівтитрантов (однаковоюмолярности), витрачених першу й інше титрування.Так, за наявності в суміші солей органічних підстав (>гидрохлоридов,гидробромидов,гидройодидов) ігалогенидов (хлориди натрію, розжарював)титруютспочаткуаргентометрическисумугидрогалогенидовігалогенидов (індикаторбромфеноловий синій), та був методом нейтралізації визначають пов'язану кислоту (індикаторфенолфталеин). Змістгалогенида встановлюють по різниці.Одне з компонентів то, можливо визначеноокислительно-восстановительним методом за відсутності в суміші іншихокисляющихся компонентів. Похідні фенолів (>резорцин) призначають у сумішахброматометрическим методом. Якщо суміші міститьсялегкоокисляющееся речовина, то фенолу спочатку екстрагують ефіром.Первинні ароматні аміни (похідніл-аминобензойной кислоти, сульфаніламіди) за відсутності іншихокисляющихся компонентів вибірково визначають методомнитритометрии. Цим самим методом після попередньогогидрирования можна визначатинитропроизводние (левоміцетин), а після гідролізу —ацетиламинопроизводние (парацетамол).>Комплексонометрию використовують тоді, коли один компонентів суміші є сіль кальцію, магнію, цинку, ртуті чи інших важких металів. Якщо попередньо іншим засобом булаоттитрована суміш солей занионами, то встановленийкомплексонометрически кількість одній з солей потім віднімають від суми компонентів.>Кислотно-основное титрування сумішей грунтується на відмінності констант дисоціації компонентів. Тому цей метод використовують за наявності в суміші кількох компонентів зкислотно-основнимивластивостями.Дифференцированное титрування сумішей кислот, підстав чи його солей можливо, якщо константи дисоціації компонентів суміші різняться щонайменше ніж у 1000 раз.>Ступенчатоекислотно-основное титрування, заснований на послідовному визначенні компонентів суміші лише у пробі з різних індикаторів, застосовують щодо компонентівЛФ, містятькарболовие кислоти та його солі разом із барбітуратами чи органічними підставами, амінокислоти в суміші з кислотою аскорбінової, нікотинової та інших.За наявності суміші лише однуЛВ, виявляє кислотні чи основні властивості, титрування здійснюють відповідноалкалиметрическимчиацидиметрическим методом. Вибір індикатора залежить від константи дисоціації. Для титруванняхлороводородной кислоти використовують метиловий червоний,аминокапроновой—фенолфталеин,глутаминовой—бромтимоловий синій тощо.Варьирование індикаторами можливо також у наступних випадках.1. Якщо суміш містить два компонента, значно різняться поосновности, то використовують дві різні індикатора і послідовнотитруют спочатку один, та був другий інгредієнт. Можна підібрати умови визначення сумішей кислот чи підстав, рН розчинів яких дотримуються друг від друга. Прититровании суміші кислот чи підстав з різними константами дисоціації спочаткутитруются сильніші кислоти (підстави), потім — слабші.2. Якщо хтось із компонентів суміші є кислоту, а інший — сіль чи підставу, то однієїнавескеспочаткутитруют кислоту, та був — суму що виникла солі чи підстави. Розрахунок виконують по різниці кількостей витраченихтитрованних розчинів кислоти і луги.. При аналізі сумішіЛВ, одна з якихнерастворимо чи мало розчинно у питній воді, використовуютьнесмешивающиеся чи змішані розчинники (води і спирт). Підбираючи відповідні розчинники і індикатори, можна послідовнооттитроватьдваЛВ, виявляють кислотні чи основні властивості, але повинні різні константи дисоціації.. Методомневодного титрування можна кількісно визначати без поділудвухкомпонентниеЛФ. І тому використовують два способу. Одне з них залежить відтитровании кожного інгредієнта у цьому розчиннику, у якому виявляються лише його кислотні чи основні властивості. Так визначати суміші кислоти та юридичного грунту, кислоти і солі, основи, а солі. Другий спосіб грунтується на диференційованомутитровании щодо одного розчиннику обохЛВ, мають різні константи іонізації. В такий спосібтитруют суміші підстав з солями і суміш підстав. Прититровании серед крижаної оцтової кислоти можна без поділу послідовно визначати суміш сильнішого і більше слабкого органічного підстави.. Послідовне титрування однієї навішенняЛФ спочатку у водної, потім уневодной середовищі може бути застосована, коли до складу бінарноюЛФ входять слабкі підстави (>пуриновие алкалоїди) і алкалоїди з сильнішими основними властивостями. ЯкщоЛФвключаєпуриновие алкалоїди і ті речовини слабокислого характеру (>барбитурати), то останні визначаютьалкалиметрическим методом після попереднього вилучення ефіром.Пуриновие алкалоїди у тійнавеске призначають уневодной середовищі методомневодного титрування.Кількісний аналіз сумішей після попереднього поділу компонентівПоділ суміші з допомогою екстракції грунтується на відмінності розчинності компонентів у воді й в органічних розчинниках чи відмінностікислотно-основних властивостей. За цим принципом Л У може бути розподілені на групи.>Неорганические речовини, зазвичай, нерозчинні в органічних розчинниках. Оксиди металів нерозчинні у питній воді, але розчиняються у кислотах. Солі більшості неорганічних кислот і лужних,щелочно-земельних і тяжких металів (крім сульфатів кальцію і барію) добре розчиняються у воді.Органічні кислотиалифатического низки,оксикислоти, амінокислоти, зазвичай, розчиняються у воді. Ароматичні кислоти (бензойна, саліцилова, ацетилсаліцилова) практично нерозчинні (мало розчиняються) у воді й розчиняються у органічних розчинниках.Солі органічних кислот (лимонної, оцтової, молочної,глюконовой, бензойної, саліцилової), натрієві солібарбитуратов,сульфаниламидов розчиняються у води та нерозчинні в органічних розчинниках, як хлороформ, ефір.Усі органічні підстави зазвичай розчиняються у органічних розчинниках. Але вони мало розчиняються чи практично нерозчинні у питній воді. Більшість органічних підстав і алкалоїдів розчиняються у розчинах кислот (із заснуванням солей).Солі органічних підстав добре розчиняються у воді, етанолі і, зазвичай, нерозчинні в органічних розчинниках, як ефір, хлороформ. Деякі з солей органічних підстав, зокрема алкалоїдів (кокаїнугидрохлорид,папаверинагидрохлорид), розчиняються й у воді, й у хлороформі.>Феноли розчиняються у лугах із заснуваннямфенолятов (>феноксидов). Простіодноатомниеідвухатомние феноли легко розчиняються у воді.Феноли складнішою хімічної структури, зазвичай, у питній воді нерозчинні. Деякі азотомісткі сполуки (сульфаніламіди,алкилуреидисульфокислот, циклічніуреиди) розчиняються у лугах із заснуванням натрієвих солей.Органічні речовини, не що утворюють солей з кислотами і лугами (похідні складних групи органічнихЛВ, які обмаль розчиняються й у воді, й у органічних розчинниках (похіднінитрофурана,4-оксикумарина,урацила).Відрізняються по розчинності природні біологічні активні речовини. Препарати серцевих глікозидів мало розчиняються чи практично нерозчинні у воді й в ефірі. Практично нерозчинні у питній воді препаратистероидних гормонів. Більшість їх розчинно в рослинних мастила й у етанолі. Вітаміни по розчинності поділяються на дві групи: водорозчинні і жиророзчинні. Антибіотики (левоміцетин,феноксиметилпенициллин,гризеофульвин, еритроміцин) мало розчиняються чи практично нерозчинні у питній воді.Натриевие і калієві солі антибіотиків, і навіть їх солі зхлороводородной, сірчаної кислотою, зазвичай, добре розчиняються у воді, але нерозчинні (мало розчиняються) в органічних розчинниках.Використовуючи вказане розбіжність у розчинностіЛВ, можна здійснити поділ компонентів Л Ф такими методами.1. За наявності суміші Л У, добре розчинних у воді й практично у ній нерозчинних, поділ здійснюють обробкою суміші водою з наступним фільтруванням. На фільтрі залишаються нерозчинні у питній воді речовини. Так відокремлювати з інших інгредієнтів розчинні у питній воді неорганічні солі, солі органічних кислот, соліазотсодержащих органічних підстав.2.ЛВ, розчинні в органічних розчинниках, несмешивающихся із жовтою водою (хлороформ, ефір), можна відокремлювати відЛВ, нерозчинних у тих розчинниках. Поділ виконують шляхом екстракції хлороформом чи ефіром. Так відокремлювати ароматні кислоти і органічні підстави від солей неорганічних і органічних кислот, і навіть від солей органічних підстав.3.ЛВ, розчинні в органічних розчинниках, можна відокремлювати від деякихалифатических кислот і похідних фенолів. Останні необхідно попередньо дією лугів перетворити на водорозчинніфеноксиди (>феноляти). Потім розчинником, несмешивающимся із жовтою водою (хлороформом чи ефіром), витягаютьЛВ, розчинні у тих розчинниках.4. Для відділенняЛВ, розчинних в хлороформі чи ефірі, від органічних підстав останні попередньо нейтралізують кислотами. Отримані солі підстав залишаються у водному розчині.5. Солі органічних підстав можна попередньо перетворити на підстави шляхом нейтралізації пов'язаних кислот лугами.Образующиеся органічні підстави потім екстрагують хлороформом чи ефіром.Якщо, користуючись описаними методами, вдається кількісно розділити компоненти суміші, то кожен із новачків потім визначають тим чи іншимтитриметрическим методом. При поділі сумішей, містять три компонента і більше, нерідко виходятьдвухкомпонентние екстракти речовин з однаковим розчинність. Їх аналізують методами осадження чикислотно-основного титрування, послідовно визначаючи кожен із компонентів.Слід враховувати, щоЛВ, мало розчинні на воді чи в органічному розчиннику, частково беруться разом ізотделяемим компонентом. Це нерідко дає можливості виконати кількісне поділ суміші. Слід також брати до уваги відсутність домішки води в органічному розчиннику. Поділ сухихЛФ таким розчинником призводить до часткової екстракціїЛВ, розчинних у питній воді.Після вилученняЛВ органічним розчинником останній зазвичай спочатку видаляють, та був проводять титрування. Органічні підстави, зокрема. підстави алкалоїдів, беруть із сумішей хлороформом.Растворитель відганяють, залишок розчиняють на воді чи в етанолі ітитруютхлороводородной кислотою, використовуючи індикатор, відповідний константі дисоціації підстави.Кількісне визначення методом нейтралізації деяких сумішей, містять солі органічних кислот і солі органічних підстав, виконують у присутності органічних розчинників (хлороформу, ефіру). Останні витягаютьвиделяющуюся органічну кислоту чи органічне підставу у процесі титрування. Вилучення необхідно, оскільки, проявляючи кислотні чи основні властивості, вони можуть вплинути на результати титрування.Якщо суміші містятьсягидрохлорид органічного основи, а неорганічна кислота, то спочаткутитруют суму кислот (пов'язаної та вільної). Потім окремотитруютхлороводородную кислоту, пов'язану з органічним підставою,аргентометрическим методом похлорид-иону. Зміст розраховують по різниці витраченихтитрованнихрозчинівгидроксида натрію і нітрату срібла однаковоюмолярной концентрації.
Фізико-хімічні методи аналізу багатокомпонентних лікарських форм
Кількісний аналіз сумішей без попереднього поділу компонентів
Фізико-хімічні методи дають можливість виконання аналізу двох- і навітьтрехкомпонентних сумішей без попереднього поділу з достатньої для фармацевтичного аналізу точністю.
З електрохімічних методів для кількісного визначення багатокомпонентних лікарських форм використовуютьполярографиюіпотенциометрию.Полярографическим методом можна, наприклад, аналізувати вітаміни (тіамін, рибофлавін,пиридоксин, кислоту аскорбінову) в сумішах. Методневодного титрування разом ізпотенциометрией дозволяє лише унавеске без поділу послідовно визначати зміст кількох компонентів. Це пов'язано з поліпшенням умовкислотно-основного титрування з допомогою об'єктивного встановлення точки еквівалентності з допомогою індикаторного і стандартного електродів.
>Фотоколориметрическим методом при доборі відповідних кольорових реакцій визначають, зазвичай, на утримання однієї зЛВ в багатокомпонентнихЛФ. Так, на основіфенолгипохлоритной реакції можна встановити зміст кофеїну на суміші. Визначенню кофеїну не заважають близько 20 інших Л У. Для кількісної оцінки парацетамолу в сумішах зметамизолом-натрия, кофеїном,салицилатами використовують методику, засновану на гідролізі і наступномудиазотированииіазосочетании.
>Спектрофотометрический метод визначення без попереднього поділу компонентів грунтуєтьсянааддитивности значень оптичної щільності всіх компонентів суміші при однієї довжині хвилі.Спектрофотометрическое визначення двох (і більше)компонентнихЛФ можна в різний спосіб.
1.ЛФ містить дваЛВ, одна з яких має максимумсветопоглощения, а інше не поглинаєУФ-свет у сфері.Спектрофотометрический аналіз виконують під час аналізуоднокомпонентнойЛФ.
2. Кожен із двох компонентів суміші має власний максимумсветопоглощения, у якому другий компонент оптично прозорий. Послідовно аналізують одне, та був другеЛВ у відповідній максимумісветопоглощения.
3.ЛФ включає дваЛВ, причому у максимумі поглинання однієї з них має деякесветопоглощение й інше речовина, а максимумі поглинання другого речовини перше оптично прозоро. Такі суміші аналізують методом ізольованій абсорбції.ЛВ, в максимумі якого інший компонент не поглинає, визначають як іоднокомпонентнойЛФ. Метод ізольованій абсорбції використовують, наприклад, для аналізу ацетилсаліцилової кислоти у присутності саліцилової.
4. ЯкщодвухкомпонентаяЛФміститьЛВ, смуги поглинання яких накладаються друг на друга, то тут для кількісного визначення можна використовувати розрахунковий методФирордта. Метод прийнятний, якщо двох довжинах хвиль наявне істотне розбіжність у інтенсивності поглинання обох компонентів. Попередньо з допомогою стандартних зразків встановлюють значення питомих показників поглинання обох компонентів за будь-якої обраної для аналізу довжині хвилі. Потім визначення кожного компонента встановлюють оптичну щільність аналізованого розчину суміші при обох довжинах хвиль. Точність залежить від цього, наскільки велике різницю міжсветопоглощением компонентів суміші. Вона найбільшої, коли одна довжина
хвилі є максимумомсветопоглощенияодногоЛВ і мінімумом на другому, а під час другої довжині хвилі спостерігатиметься зворотне явище.
5. Кількісне визначення сухихдвухкомпонентнихЛФ можна виконувати без попереднього поділу праці й без обчислення питомих показників поглинання компонентів. Сутність методу у тому, котру готують розчини кожного з компонентів, які уЛФ, тієї ж концентрації, як і загальна концентрація розчину сумішіСем. Потім за обраної аналітичної довжині хвилі вимірюють оптичну щільність розчинуЛФ щодо розчину однієї з компонентів (А), і потім оптичну щільність другого компонента щодо розчинуЛФ (>Лг).
6. Широкі можливості у аналізі багатокомпонентних сумішей відкриває використання різних методів диференціальноїфотометрии. При диференціальномуфотометрическом аналізі сумішей, містять два компонента, вимірюють оптичні щільності аналізованого розчину при двох довжинах хвиль. Вимірювання виконують щодо розчинів порівняння, містять стандартні зразки аналізованихЛВ. Інший варіант методу грунтується на використанні двох розчинів порівняння. Однак з них включає одне із компонентів тієї ж концентрації, де він міститься у суміші. Тому, за розрахунку змісту одного компонента концентрація другого віднімається. Це дозволяє домогтися високої точності аналізу. Можна досягти позитивних результатів, використовуючи і той ж розчин порівняння, склад якого близький до складу аналізованої суміші.
7. Значно спрощує здійснення аналізуЛФзастосуванняД-спектрофотометрического методу. Він можна використовувати кількісним аналізі якоднокомпонентнихЛФ, і багатокомпонентних сумішей. Обов'язкове умова виконання аналізу — незмінюваністьУФ-спектра поглинання компонентів суміші, але зміна у аналізованогоЛВ, що відбувається під дією кислот, лугів, окислювачів,УФ-облучения та інших. ВикористанняД-Е-дифференциального методу виключає впливсветопоглощающих наповнювачів, які у готовихЛФ.
8. Перспективним є метод похідноюспектрофотометрии, чи метод ортогональних функцій. Він прийнятний визначення одного речовини у присутності іншого, якщо їх спектральні кривіаппроксимируютсяполиномами різних ступенів. Найпростішим варіантом використання ортогональних функцій є визначення речовини і натомість лінійного поглинання домішки, наповнювачів чи основиЛФ.Производнаяспектрофотометрии дає можливість виконувати визначенняЛВ в багатокомпонентних сумішах.
Кількісний аналіз сумішей після попереднього поділу компонентів
Поділ компонентів суміші грунтується на відмінності їх розчинності.ЛФ, містять більше двохсветопоглощающих речовин, зазвичай, попередньо поділяють деякі фракції, застосовуючи різніекстрагенти (ефір, хлороформ, розчини кислот, лугів та інших.). Якщо фракція містить однеЛВ, його визначаютьспектрофотометрическим методом. За наявності екстракті двох інгредієнтів користуються методом ізольованій адсорбції, методомФирордта та інших. Поруч ізспектрофотометрией після поділу можна використовувати іншіфотометрические методи.
Методекстракционнойфотометрии дозволяє виділятиЛВ з суміші з наступним його визначенням. Великі можливості створює використання цього методу аналізі органічних підстав та його солей, зокрема. алкалоїдів. Найчастіше застосовувані реагенти — метиловий помаранчевий та інші барвники. З допомогоюекстракционнойфотометрии вдалося визначити два близьких як речовини: ефедрин і димедрол, і навіть інші суміші.
>Тонкослойная хроматографія (>ТСХ) особливо широко використовують у аналізі Л Ф, містять практично у групиЛВ. Поділ з допомогоюТСХ поєднують з кількісним визначенням безпосередньо нахроматограммаилипісляелюированияЛВ, використовуючи цієї мети різні методи.
1. РозчинЛФхроматографируют, виявляютьхроматограмму і виробляють порівняльну оцінку площі плям аналізованогоЛВ і стандартного зразка. Вимірювання виконуютьпланиметрически, розраховуючи площа плями по заради вусах його зон.
2.Сочетают поділ з допомогоюТСХіспектрофотометрическое визначення безпосередньо нахроматограммах. Спосіб застосовують для аналізу сумішей алкалоїдів,сульфаниламидов,стероидних гормонів. Точність його порівняно мала.
3.Измеряют інтенсивність забарвлення плями нахроматограмме, користуючисьденситометрическим методом, і навіть методами, заснованими на вимірі інтенсивності відображення чифлуоресценции. Спосіб застосуємо для аналізу вітамінів, глікозидів.
4.Элюируют Л У з відповідних зонтонкослойнойхроматограмми стандартного зразка іЛФ. Потім у кожному зелюатов встановлюють концентрацію Л У, застосовуючи при цьому оптичні методи,полярографию та інших. Але найчастіше все го аналіз Л У велюатах здійснюють методамиУФ-спектрофотометриичифотоколориметрии.
>Газожидкостная хроматографія (>ГЖХ). На відміну відТСХ та інших видів хроматографії вГЖХ непотрібен поєднання коїться з іншими методами для кількісної оцінки складу аналізованої суміші. З допомогоюГЖХ можна розділити та намагання встановити справжність і кількісне визначенняЛФ, містять до 8-10 компонентів.
>Високоеффективную рідинну хроматографію використовують із поділу праці й кількісного визначення близьких з хімічного структурі речовин похіднихфенотиазина,сульфаниламидов, антибіотиківтетрациклинового низки. Метод прийнятний, наприклад, визначеннятрехкомпонентних сумішей алкалоїдів.ВЭЖХ вийшла ефективна і за аналізі сучаснихмультивитаминних ЛЗ, містять до 13 вітамінів і 18 мікроелементів лише уЛФ. Труднощі аналізу обумовлені малим змістом цих речовин (і від кількох мікрограмів до сотень міліграмів).
Для кількісного визначення багатокомпонентних сумішей іноді поєднуютьтитриметрические і фізико-хімічні методи. Такий спосіб дуже ефективний під час аналізу трьох (і більше) компонентів в суміші. Частіше застосовують поєднаннятитриметрических методів зфотометрическими, наприклад, під час аналізу сумішіефедринаіпапаверинагидрохлоридов і натріюбензоата використовують фотометричний метод визначенняефедрина, інші компонентититруютвневодной середовищі.
>МногокомпонентниеЛФ можна також ознайомитися визначати, поєднуючититриметрические методи в водяної таневодной середовищах зіспектрофотометрией. Виключити процес поділу інгредієнтів двох-ітрехкомпонентних сумішей можна поєднанням диференційованогопотенциометрическогоіфотометрического титрування серед неводних розчинників із кількох індикаторів.
12. 4 Експрес аналіз ЛФ
ЕКСПРЕС-АНАЛІЗ ЛІКІВ — метод, який базується на використанні простих методик аналізу при мінімальній затраті речовини, яка аналізується, реактивів та часу проведення аналізу. Дає можливість проводити аналіз без вилучення виготовлених ліків. Е.-а.л. поділяється на якісний та кількісний.
Якісний Е.-а.л. в умовах аптеки здійснюють хімічними, фізичними або фізико-хімічними методами (флуориметрія, хроматографія та ін.). Його виконують без попереднього виділення лікарських речовин, якщо інгредієнти не заважають ідентифікації одного в присутності інших. Для проведення якісного Е.-а.л. використовують кольорові або осадові хімічні реакції на відповідні катіони, аніони або функціональні групи органічних речовин. Е.-а.л. виконують крапельним методом, при якому їх витрачається від 0,001 до 0,01 г за масою або 1–5 крапель за об’ємом. Кольорові реакції виконують на фільтрувальному папері або у порцелянових чашках, а осадові — на предметному склі. Чутливість реакцій, які виконуються на фільтрувальному папері, підвищують за допомогою таких фізичних явищ, як поверхневий натяг, капілярність, адсорбція, дифузія. Так, напр., різні речовини з одним і тим же реактивом за рахунок різниці у швидкості дифузії утворюють на папері забарвлені кільця, які відрізняються за кольором і розташовуються на різній відстані від центру. Вибірковість кольорових реакцій можна підвищити обробкою фільтрувального паперу парами летких речовин. Якщо не можна виконати Е.-а.л. без розділення компонентів, то інгредієнти попередньо розділяють, виходячи з їх розчинності у воді та органічних розчинниках. Додавання розчинів кислот, лугів та буферних розчинів дозволяє послідовно вилучати з суміші речовини, які відрізняються за кислотно-основними властивостями. Вилучені лікарські речовини ідентифікують за допомогою специфічних реакцій.
Кількісний Е.-а.л. виконують титриметричними або фізико-хімічними методами. ТитриметричнийЕ.-а.л. відрізняється від макрометоду витратами ЛП, які аналізуються (0,05–0,1 г за масою або 1–3 мл за об’ємом, що дозволяє контролювати якість тих ліків, які відпускаються хворому. Переважно використовують методи прямого визначення одного інгредієнта в присутності інших без попередньої екстракції, випаровування, фільтрування). У разі потреби інгредієнти розділяють загальноприйнятими способами. Наважку порошку або об’єм ЛП (розчини, очні краплі та ін.) беруть з таким розрахунком, щоб на аналіз витрачати до 2 мл титрованого розчину. Кількісний Е.-а.л. проводять також із використанням рефрактометрії, інтерферометрії, флуориметрії, фотоколориметрії або візуальної колориметрії, диференціального фотометричного методу тощо.
12. 5. Способи встановлення біологічної доступності ліків. – аналогічне 12.9!!!!!!!!! Я і Уляна написали це питання по-різному, тому читайте, що кому завгодно, версію, що сподобається, залишайте, а іншу видаляйте. Просто ми писали з різних книг. Не видаляю жодний з варіантів, тому що ми обидві прикладали зусиль і старались для всіх))))
БІОЛОГІЧНА ДОСТУПНІСТЬ — фармакокінетичний параметр, що характеризує ефективність ЛП шляхом визначення тієї частки лікарської речовини, яка надходить до системного кровообігу. При внутрішньосудинному введенні Б.д. лікарської речовини становитиме 100%, при інших шляхах (парентеральному, ректальному та інших) вона значно нижча і майже ніколи не досягає 100%. Б.д. як метод дослідження отримала загальне визнання у другій половині ХХ ст., після відкриття феномена терапевтичної нееквівалентності ліків з однаковим складом, в ідентичних лікарських формах, але виготовлених на різних заводах. На сьогодні Б.д. має державну значимість при розробці, виробництві та використанні ЛП і як метод лежить в основі параметрів визначення біоеквівалентності по суті аналогічних ЛП.
Існує кілька методів визначення Б.д. ліків, які тісно пов’язані зі швидкістю і ступенем всмоктування (див. Абсорбція ліків) та надходження діючих речовин у системний кровообіг і їх доставкою до місця лікарської дії. Однак вміст лікарської речовини (або активного метаболіту) в крові та її терапевтична концентрація на місці дії можуть значно відрізнятися, внаслідок чого потрібна концентрація може бути досягнута лише після багаторазового введення ЛП. Проте кількісна характеристика Б.д. для більшості лікарських речовин може бути встановлена лише на основі їх концентрації в крові (або в сечі при екскреції), оскільки визначення цього показника безпосередньо в місці дії технічно, як правило, неможливе. Розрізняють абсолютну і відносну Б.д. ліків. Абсолютна Б.д. визначається порівнянням ступеня та швидкості надходження субстанції досліджуваного ЛП в системний кровообіг (за умови позасистемного введення) зі стандартом після його внутрішньосудинного введення. Відносна Б.д. визначається порівнянням ступеня та швидкості всмоктування ЛП (напр. таблеток) з так званим стандартом порівняння (напр. капсул) при однаковому або різних шляхах їх уведення (напр. для таблеток та свічок) за умови, що вони містять одну й ту ж активну речовину в однаковій кількості. Визначення «відносна Б.д.» широко використовується для підтвердження еквівалентності терапевтичної дії по суті аналогічних препаратів референтному та порівняння терапевтичної ефективності досліджуваних препаратів.
Останнім часом запропоновані математичні методи кількісної оцінки Б.д., які включають такі основні фармакокінетичні показники: функцію швидкості всмоктування a (t) і функцію екскреції e (t) лікарської речовини, кількість лікарської речовини, що надійшла до системного кровообігу A (t) та екскретувала за цей же термін Ae (t). Цей процес ілюструється загальною схемою, яка, однак, не відображає інших численних процесів, що відбуваються в організмі.
Загальна схема основних процесів Б.д. лікарської речовини
Фактор F, який характеризує ступінь Б.д. лікарської речовини при позасудинному введенні ліків, вираховують за такими рівняннями:
F = (Div ‧АUС)/(D ‧АUСiv )
та F = (Div ‧Ar (∞) /(D ‧Ar,iv (∞),
де D — доза, що характеризує загальний кліренс лікарської речовини і є відношенням Div до площі під кривою АUСiv в координатах концентрація — час. За цим методом досить провести два повних фармакокінетичних дослідження (одне — після введення досліджуваного препарату, друге — після внутрішньосудинного введення) та визначити площі під кривими АUС і АUСiv або кількості речовини, що екскретувала з сечею Ar (∞)і Ar,iv (∞), щоб вирахувати фактор F. Отже, інтенсивність і тривалість фармакологічної дії ліків залежать від їх фармакокінетичних характеристик (всмоктування, розподіл, біотрансформація, механізм екскрекції, які, в свою чергу, тісно пов’язані з поняттям Б.д. Напр. ступінь і швидкість всмоктування є невід’ємними характеристиками Б.д.; розподіл речовини і доставка до місця її дії залежить від проникнення крізь численні бар’єри організму; інтенсивність та швидкість біотрансформації речовини визначається переважно ефектом її першого проходження через печінку при позасудинному шляху введення, а термін дії — від показника швидкості екскрекції з організму незміненої речовини або активних її метаболітів).
Складність якісної та кількісної оцінки Б.д. ЛП пов’язана з великою кількістю чинників, які впливають на ці характеристики. Їх поділяють на екзогенні (фармацевтичні або технологічні) та ендогенні (фізіологічні, генетичні та ін.). До екзогенних чинників, що впливають на Б.д., належать: фізичні властивості речовин (дисперсність, фільність, поліморфізм, оптичні та інші характеристики), природа і кількість допоміжних речовин, що входять до складу ліків, вид лікарської форми, технологія виготовлення та деякі інші (доза, шлях, швидкість введення ліків, застосування інших ліків, недотримання рекомендацій щодо лікувального харчування тощо), які слід враховувати на етапах розробки, виробництва та застосування ліків. На Б.д. ліків впливають також фізіологічні (стать, вік, маса), генетичні та етичні показники хворого, наявність супутніх захворювань тощо. Складність врахування і дотримання вказаних чинників зумовлює необхідність проведення досліджень з визначення Б.д. і біологічної еквівалентності ліків не на хворих, а на здорових людях, що дозволяє нівелювати повністю або частково вплив багатьох чинників під час експерименту, отримати більш достовірні та відтворені дані. Врахування чинників, що впливають на Б.д. ліків, дозволяє оптимізувати режим їх виробництва, прийому та підвищити ефективність фармакотерапії в цілому.
Однак дослідження Б.д. на живих організмах трудомісткі, дорогі й не завжди можуть застосовуватись у звичайних виробничих умовах. Тому за рекомендаціями ВООЗ протягом останніх років розробляються тести Б.д. in vitro, за допомогою яких можна прогнозувати потенціальну ефективність і характер дії ліків та контролювати їх якість під час виробництва. Одним із таких тестів є «Розчинність». Встановлено, що швидкість розчинності майже усіх фармакотерапевтичних груп лікарських речовин відображає їх приблизну Б.д. Одночасно проводяться широкі дослідження з порівняльної оцінки методів кореляції досліджень in vitro та in vivo, розробляються тести «Розчинність» для індивідуальних ЛП в формі мазей, супозиторіїв; у фармакопеї або НТД вводиться тест «Вивільнення» (для пролонгованих ЛП і трансдермальних систем) тощо.
12.6. Завдання, особливості і методи біофармацевтичного аналізу (питання 12.10 – те ж саме).
Завдання – розробка способів виділення, очищення, ідентифікації і кількісного визначення ЛР та їх метаболітів в сечі, слині, крові, плазмі чи сиворотці крові.
Особливості:
1) Об’єкти дослідження є багатокомпонентними сумішами сполук, подібних по хімічній будові.
2) Кількості визначуваних речовин – мкг чи нг.
3) Досліджувані ЛР і їх метаболіти знаходяться в середовищі, що складається із великої кількості природних сполук (білків, ферментів), що можуть зворотньо чи незворотньо утримувати досліджувані речовини.
4) умови виділення, очищення і аналізу залежать від виду біологічної рідини, що підлягає аналізу.
Вимоги до методів: висока чутливість, робота з малими об’ємами проб, велика специфічність і вибірковість, достатня швидкість, проста пробо підготовка, простота приладів, надійність, відтворюваність, універсальність, мала трудоємкість, можливість автоматизації.
Обраний метод повинен бути настільки чутливим, щоб він забезпечував достовірність і точність визначення в 10 разів меншої кількості ЛР, ніж середня кількість речовини, що всмоктується після прийому однократної дози. Специфічність методу повинна забезпечувати можливість визначення ЛР в незміненому вигляді після біотрансформації на фоні його метаболітів і ендогенних сполук.
Вимогам, що висуваються до методів біофармацевтичного аналізу, відповідають лише чутливі фізико-хімічні методи. Класичні хімічні методи (гравіметрія і титриметрія) через низьку чутливість для цієї мети непридатні. Широкого застосування поки що не знайшли і електрохімічні методи.
Процес виконання біофармацевтичного аналізу включає декілька стадій: екстракцію із біологічної рідини, розділення, ідентифікацію і кількісне визначення.
Методи: 1) екстракційно-фотометричний; 2) СФ в УФ і видимій області; 3) Флуориметричний аналіз; 4) ТШХ; 5) Мас-спектрометрія; 6) ГРХ; 7) ВЕРХ; 8) хромато-мас-спектрометрія; 9) використання радіоактивних ізотопів; 10) Імунохімічні методи.
12.7. Методи дослідження процесів руйнування ЛР при зберіганні. Стабільність як показник якості ЛЗ поки що мало виражена в Фармакопеях. Констатуються такі фактори як випадіння осаду, поява чи зміна забарвлення, зміна рН і т.д. Але це не є науковим обґрунтуванням для встановлення термінів зберігання ЛЗ. Це можна встановити лише на основі проведення досліджень по вивченню стабільності ЛР чи ЛФ.
Дослідження стабільності здійснюють, вивчаючи механізм фізичних чи хімічних процесів, що відбуваються при тривалому зберіганні ЛЗ. Оцінюють стабільність, визначаючи в ліках кількість основного компоненту і продуктів його розкладу. Процеси розкладу ЛР відбуваються дуже повільно при звичайних умовах зберігання, що створює труднощі при дослідженнях.
При дослідженні стабільності потрібне використання високочутливих методів аналізу. Вибір методу залежить від характеру досліджуваної стійкості (фізичної чи хімічної). Фізичні методи найбільш широко використовуються при оцінці стабільності різних ЛФ. Класичні хімічні методи зазвичай не дозволяють виявити і визначити продукти розкладу. Тому якісні хімічні реакції, гравіметрія і титриметрія через їх малу чутливість непридатні для дослідження стабільності ЛР.
Із оптичних методів поляриметрія має важливе значення для оцінки стабільності розчинів речовин, що здатні утворювати оптичні ізомери і рацемічні форми. УФ-спектроскопія дозволяє відрізнити деякі продукти розкладу від основного компоненту по характеру і інтенсивності максимумів світлопоглинання. Важливу інформацію про наявність в досліджуваних молекулах певних функціональних груп, що підтверджують утворення продуктів розкладу, може дати ІЧ-спектроскопія.
Для вивчення стабільності досить ефективні методи, що базуються на випромінюванні світла (флуориметрія і хемілюмінесценція). Ці методи дозволяють вивчати як процеси деструкції молекул ЛР, так і явище стабільності. Флуориметрія і хемілюмінесценція мають високу чутливість, що дає можливість значно зменшити час експериментів. Високою специфічністю і чутливістю характеризуються методи ЯМР, ЕПР і масс-спектроскопії. Із електрохімічних методів перспективне використання полярографії, що теж має високу чутливість, і потенціометрії.
Із методів розділення дуже часто користуються екстракцією для розділення основного компоненту і продуктів його розкладу, найчастіше для екстракційно-фотометричного варіанту.
Особливо широко для дослідження стабільності ЛР використовують різні види хроматографії, поєднуючи їх з іншими фіз.-хім методами (хроматофотоколориметрія, хроматоспектрофотометрія). ГРХ і ВЕРХ потребують малих кількостей досліджуваних речовин і є перспективними для оцінки стабільності ЛР.
12.8. Методи прискореного визначення стабільності ЛЗ. Термін зберігання ЛЗ повинен бути науково обґрунтованим методами дослідження процесів руйнування його компонентів при зберіганні. Для цього часто використовують умови прискореного визначення стабільності, що створюються в термостаті, оскільки процеси розкладу ЛЗ при звичайних умовах відбуваються дуже повільно (2-5 років, при використання цього терміну метод встановлення стабільності називається класичним). Методи прискореного старіння (визначення стабільності) базуються на вивченні кінетики реакцій розкладу ЛР. Дослідження кінетики реакцій розкладу ЛР проводять при підвищених температурах (40-70, іноді до 100 0С) протягом 15 – 120 днів, відмічаючи зміни фізико-хімічних властивостей речовин. Використовуючи фактори прискорюючого впливу на перебіг хімічних реакцій (світло, вологість, рН середовища, присутність окисників, характер упаковки, але найчастіше – температурний режим), протягом відносно короткого проміжку часу встановлюють кількісні зміни складу ЛЗ і визначають оптимальні параметри умов зберігання ЛЗ. Дослідження проводять в кліматичних шафах чи кімнатах, в яких є пристрої, що дозволяють автоматично регулювати задані умови зберігання. При дослідженнях визначають температуру зберігання ЛР, що забезпечує потрібний термін придатності (розрахунки проводять на основі рівняння Арреніуса, що виражає залежність швидкості реакції від температури, або на основі рівняння Вант-Гоффа; зазвичай при збільшенні Т фіз.-хім процеси в ЛЗ прискорюються).
Ціль встановлення стабільності ліків може бути різною: 1. для ЛР (субстанції) – вплив Т, світла та ін. на процес розкладу (швидкість хімічних реакцій); 2. для ЛФ – вплив допоміжних речовин, стабілізаторів та ін. на стабільність.
Виконання досліджень методом прискореного старіння здійснюється у запаяних скляних трубках чи ампулах із кількістю ЛР, що необхідна для однократного використання. При вивченні впливу атмосферного кисню порівняння проводять при однаковій Т, але одну порцію поміщають у відкриту посудину, а іншу – в запаяну ампулу із інертною атмосферою.
Є кілька підходів до постановки експерименту визначення стабільності.
1. Найпростіший – ізотермічний метод, що базується на використанні правила Вант-Гоффа: при підвищенні Т на 10 0С швидкість хімічної реакції зростає в 2-4 рази (працює лише для реакцій, що перебігають у відносно невеликому температурному інтервалі, але перевіряють зберігання ЛЗ теж у невеликому Т інтервалі 40-70, іноді до 100 0С). Не можна використовувати метод прискореного старіння при збільшенні термінів зберігання з 3 до 5 років. Даний підхід можна використовувати для встановлення термінів придатності індивідуальних ЛР (субстанцій) та їх ЛФ і не можна – для рослинної сировини, поліпептидів, білкових, ендокринних і інших препаратів біологічного походження з невстановленою хімічною структурою чи які не мають певного сталого складу.
Відповідно до цього методу, ЛЗ в заводській упаковці піддають дії температур, що перевищують середню температуру його зберігання, при цьому скорочується час перебігу деструктивних фізико-хімічних процесів до допустимої межі (10%). Це штучне моделювання дає можливість встановити терміни зберігання ЛЗ при 20-25 0С і встановити Т зберігання, що забезпечить заданий термін зберігання.
2. Методи прискореного старіння, що базуються на використанні рівняння Арреніуса, залежно від способу термостатування бувають ізотермічними і неізотермічними. Суть ізотермічного методу, як і при використанні правила Вант-Гоффа, зводиться до експериментального визначення констант швидкості хімічних реакцій для декількох фіксованих Т, які вибирають із розрахунком, що швидкість реакції буде прийнятною для проведення експерименту. Із врахуванням порядку реакції розраховують час, протягом якого концентрація активної речовини зменшується на 10% (якщо продукти розкладу не є токсичнішими) – цей час і приймають за термін придатності. Необхідно попередньо показати ідентичність процесу розкладу при різних Т.
Це лише частина з інформації, наведеної в Бєлікові (1993) ст. 368 – 375, я не наводила весь математичний апарат для розрахунків і порядок постановки експериментів. І так багато =(
12.9. Способи встановлення біологічної доступності ліків. Важливий напрямок біофармацевтичних досліджень – це встановлення біологічної доступності ліків.
Біологічна доступність – це ступінь всмоктування ЛР із місця введення в кровоносну систему і швидкість, з якою цей процес відбувається. Носить відносний характер і відображає інтегральну (ступінь всмоктування) і кінетичну (швидкість всмоктування) особливості процесу.
Терапевтичний ефект залежить від того, яка частина введеної ЛР потрапить в кровоносну систему і далі потрапить до потрібних органів і тканин. Цей показник і характеризує біологічна доступність. При внутрішньовенному введенні вона становить 100%, при всіх інших способах прийому – завжди менше 100% (тому що перед кров’ю ЛР проходить через ряд біологічних мембран слизової оболонки шлунку, печінки, м’язів та ін.).
На біодоступність впливають біофармацевтичні фактори (ЛФ, шляхи її введення), індивідуальні особливості організму людини, фізіологічний і паталогічний стан шлунково-кишкового тракту, серцево-судинної ситеми, печінки, нирок і т.д.
Біодоступність вивчають шляхом порівняльного дослідження вимірювань концентрацій ЛР в плазмі крові чи сечі після введення досліджуваної і стандартної ЛФ. Оскільки нутрішньовенне введення забезпечує 100% біодоступність, то можна встановити абсолютна біодоступність (долю ЛР, що всмокталась в організм, після введення різними шляхами по відношенню до її кількості після внутрішньовенного введення); відносна біодоступність – рідше визначається, це відносна оцінка всмоктування однієї ЛР із досліджуваної і стандартної ЛФ. Визначення проводять по вмісту ЛР в крові чи сечі після однократного чи багатократного введення.
Терапевтична нееквівалентність ЛР чи її ЛФ, виготовлених по різних технологіях чи різними фірмами, залежить від їх різної біодоступності. Тому існує поняття «біоеквівалентність» ЛР, яку встановлюють по 3 параметрах: 1. мах концентрації ЛР в крові; 2. час досягнення мах концентрації; 3. площа під кривою зміни концентрації ЛР в плазмі чи сиворотці, виміряна в часі. Біоеквівалентними називають такі ЛР, які забезпечують однакову концентрацію в крові і тканинах організму. Часто аналогічні ЛР біологічно нееквівалентні, тому що мають різну біодоступність. Оптимізація ЛФ повинна здійснюватись з точки зору забезпечення мах можливого для доної ЛР ступеня біодоступності.
Встановлюють біологічну доступність 3 способами: методами in vitro за допомогою приладів; методами in vivo на тваринах чи людях-добровольцях.
Методи in vitro базуються на кореляційній залежності між швидкістю всмоктування і швидкістю розчинення ЛР, є основним для розчинних речовин. Принцип дії приладів, створених для цієї мети: механічне руйнування ЛФ і дифузія ЛР у воду чи інше розчиняюче середовище, що імітує біологічну рідину. По мірі вивільнення ЛР із приладу видаляють розчиняючу рідину. Отримані проби аналізують на вміст ЛР. Аналітичний контроль – найважливіший етап. ЛФ визнається відповідною вимогам, якщо протягом встановленого інтервалу часу в рідину переходить оптимальна кількість ЛР. Але цей модельний метод не може замінити in vivo, бо вивільнення і всмоктування – різні процеси, в організмі завжди є всмоктування після вивільнення, а в умовах in vitro моделюється лише стадія розчинення.
В методі in vivoна тваринах після розчинення ЛР йде стадія проникнення через стінки шлунка і кишечника. Встановлюється на лабораторних тваринах (кролики, собаки). При цьому або визначають вміст ЛР (метаболітів) в крові, чи встановлюють швидкість їх виведення із сечею через певні проміжки часу. Важливий кількісний аналіз, оскільки треба аналізувати складну суміш, що містить ЛР, метаболіти, природні сполуки із біологічних рідин; складніше, ніж в in vitro.
Іноді – спосіб, що базується на оцінці максимальної концентраціїЛР в крові після введення всередину досліджуваної ЛФ. Приблизний, бо біодоступність залежить не тільки від способу і швидкості всмоктування, але і від розподілу і виведення ЛР.
В методі in vivoна людях їх готують – дієта, к-ть випитої води, відсутність інших ліків та стресів. Встановлюють швидкість виведення ЛР із сечею через певні проміжки часу після введення та в крові, визначають також концентрацію препарату в крові після однократного чи багатократного прийому. Відбір проб біологічних рідин відбувається по попередньо створеній семі. Використовують методи біофармацевтичного аналізу.
Таким чином, одним із основних етапів будь-якого дослідження біологічної доступності ліків є використання біофармацевтичного аналізу для визначення концентрації ЛР (метаболітів) в біологічних рідинах.
12.10. Особливості і методи біофармацевтичного аналізу.
Особливості:
1) Об’єкти дослідження є багатокомпонентними сумішами сполук, подібних по хімічній будові.
2) Кількості визначуваних речовин – мкг чи нг.
3) Досліджувані ЛР і їх метаболіти знаходяться в середовищі, що складається із великої кількості природних сполук (білків, ферментів), що можуть зворотньо чи незворотньо утримувати досліджувані речовини.
4) умови виділення, очищення і аналізу залежать від виду біологічної рідини, що підлягає аналізу.
Вимоги до методів: висока чутливість, робота з малими об’ємами проб, велика специфічність і вибірковість, достатня швидкість, проста пробо підготовка, простота приладів, надійність, відтворюваність, універсальність, мала трудоємкість, можливість автоматизації.
Методи: 1) екстракційно-фотометричний; 2) СФ в УФ і видимій області; 3) Флуориметричний аналіз; 4) ТШХ; 5) Мас-спектрометрія; 6) ГРХ; 7) ВЕРХ; 8) хромато-мас-спектрометрія; 9) використання радіоактивних ізотопів; 10) Імунохімічні методи.
