Реакцияуказывает на присутствие в белке аминокислот цистина и цистеина, содержащих слабосвязанную серу. Метионин, хотя и является содержащей серу аминокислотой, этой реакции не дает, поскольку сера в нем связана прочно. Реакция состоит в том, что при кипячении белка под действием щелочи от цистеина или цистина легко отщепляется сера в виде сернистого натрия, который с плюмбитом дает черный или бурый осадок сернистого свинца.
1.5 Реакция Паули. Эта реакция на аминокислоту гистидин основана на взаимодействии гистидина с диазобензолсульфоновой кислотой с образованием соединения вишнево-красного цвета.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) NaOH, 10 %, 30 %; 2) CuSO4, 1 %; 3) раствор нингидрина, 0,1 % водный раствор; 4) HNO3, конц.; 5) (CH3COO)2Pb, 5 %; 6) сульфониловая кислота, 1 % раствор в 5 % растворе НСl; 7) NaNO2, 0,5 %; 8) Na2CO3, 10 %; 9) раствор яичного белка для цветных реакций; 10) дистиллированная вода; 11) пробирки, пипетки, спиртовки, держатели.
ХОД РАБОТЫ:
В четыре пробирки наливают по 5 капель раствора белка.
1. В первую пробирку добавляют 3 капли 10 % раствора NaOH и 2 капли 1 % раствора CuS04; содержимое перемешивают. Развивается фиолетовая окраска характерная для биуретовой реакции. Проделывают эту же реакцию с водой. Какая окраска?
2. Ко второй пробирке приливают 5 капель 0,1 % водного раствора нингидрина и кипятят 1-2 минуты. Наблюдают за развитием окраски, свойственной нингидриновой реакции. Проделывают эту же реакцию с водой. Какая окраска?
3. К третьей пробирке добавляют 5 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятят. Вначале появляется осадок свернувшегося белка, который при нагревании окрашивается. После охлаждения в пробирку наливают по каплям 10 % раствора едкого натра. Наблюдают за изменением цвета. Проделывают эту же реакцию с водой. Какая окраска?
4. К четвертой пробирке добавляют 5 капель 30 % раствора NaOH и 5 капель 5 % раствора (CH3COO)2Pb, содержимое доводят до кипения. Появляется бурый или черный осадок сульфида свинца. Проделывают эту реакцию с волосом и кусочком ногтя. Проделывают эту же реакцию с водой. Какая окраска?
5. В пятую пробирку наливают 5 капель 1 % раствора сульфаниловой кислоты в 5 % растворе НСl. Затем приливают 10 капель 0,5 % раствора NaNO2, сильно встряхивают и немедленно добавляют 10 капель раствора белка, а после перемешивания 30 капель 10 % раствора Na2CO3. После смешивания растворов наблюдают за развитием окрашивания, свойственного для реакции Паули. Проделывают эту же реакцию с водой. Какая окраска?
Результаты занести в таблицу 2.
Таблица 2
| № | Название реакции | Использованные реактивы | Окраска | Какие группировки открыты в белках |
| 1. | Биуретовая | |||
| 2. | Нингидриновая | |||
| 3. | Ксантопротеиновая | |||
| 4. | Фоля | |||
| 5. | Паули |
ВЫВОД:
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:
Что такое белок? Как связаны между собой аминокислоты в молекуле белка?
Назовите функции аминокислот. Охарактеризуйте структуру и общие свойства функциональных групп аминокислот.
Кислотно-основные свойства аминокислот. Какие химические реакции характерны для аминокислот?
Классификация аминокислот по свойствам радикалов.
Особенности оптической изомерии аминокислот. Сколько стереоизомеров имеют аминокислоты?
Что открывает нингидриновая реакция? Напишите уравнение реакции.
Что открывает биуретовая реакция? Напишите уравнение реакции.
Что открывает ксантопротеиновая реакция? Напишите уравнение реакции.
Напишите аминокислоты, содержащие серу. С помощью какой реакции можно их открыть?
С помощью какой реакции можно обнаружить аминокислоту гистидин в белке?
Покажите образование пептидной связи на примере любого трипептида. Охарактеризуйте особенности и свойства пептидной связи.
Тема 2
