4.2.8.1. Слизисто-гнойные жидкости обрабатывают так же, как и мокроту, когда объем пробы составляет 10 мл или меньше.
4.2.8.2. Чистые жидкости. Если материал получен с соблюдением правил асептики, его центрифугируют при 3000 g в течение 15 минут и сразу же производят посев осадка на питательную среду. Если объем пробы превышает 10 мл, обрабатывают так же, как промывные воды желудка. Микобактерии туберкулеза могут «приклеиваться» к стеклу или пластику. Поэтому чтобы добиться максимального извлечения микобактерий, контейнер ополаскивают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, раствор центрифугируют при 3000g в течение 15 минут и производят посев 2–3 капель осадка на питательную среду.
4.2.8.3.Кровь и другие жидкие материалы с большой примесью крови после добавления 3% раствора лимоннокислого натрия центрифугируют при 3000 g, и осадок 3 раза отмывают стерильной дистиллированной водой.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Для подтверждения диагноза туберкулез необходимо выделить культуру M.tuberculosis на искусственной питательной среде и правильно идентифицировать ее, используя дифференциальные тесты in vitro. Для культивирования микобактерий туберкулеза было разработано множество различных питательных сред, которые делятся на три основные группы – яичные, агаровые и жидкие. Идеальная среда для выделения микобактерий туберкулеза должна быть:
а) экономичной и простой в приготовлении, состоять из легкодоступных компонентов;
б) угнетать рост сопутствующей микрофлоры (контаминантов);
в) стимулировать рост микобактерий туберкулеза, содержащихся в исследуемом материале;
г) позволять осуществлять предварительную дифференциальную диагностику выделенных культур по морфологии колоний.
Для выделения микобактерий туберкулеза яичные среды являются средами выбора, так как именно они удовлетворяют всем требованиям, перечисленным выше. Рутинному использованию жидких сред при исследовании мокроты препятствует их более высокая стоимость. Однако при исследовании некоторых видов биологического материала жидкие питательные среды могут иметь преимущества. В тех случаях, когда получение повторного клинического образца может быть затруднительно или невозможно (например, при исследовании спинномозговой жидкости или биопсированных тканей), рекомендуется для выделения микобактерий туберкулеза одновременно использовать две среды – яичную и жидкую.
Достоинства и недостатки яичных сред
Достоинства
- просты в приготовлении;
- самые дешевые из всех имеющихся специальных сред и в то же время поддерживают хороший рост микобактерий туберкулеза;
- могут храниться в холодильнике в течение нескольких недель при соблюдении условий хранения;
- возможность контаминации в процессе приготовления сводится к минимуму, так как после разлива во флаконы подвергаются тепловой обработке; кроме того, добавляемый к этим средам малахитовый зеленый угнетает рост сопутствующей микрофлоры.
Недостатки
- рост колоний становится заметным через большой промежуток времени – иногда через 8 недель, особенно если в исследуемом материале содержалось небольшое количество микобактерий туберкулеза или если процесс деконтаминации был слишком жестким;
- если в процессе культивирования появляется рост сопутствующей микрофлоры, он отмечается на всей поверхности питательной среды, из-за чего данные пробы приходится выбрасывать.
В Республике Беларусь культуральные исследования диагностического материала традиционно проводятся на плотных яичных средах. Существует большое количество плотных питательных сред: Левенштейна-Йенсена, Петраньяни, Гельберга, Финна, Мордовского (среда «Новая»), Аникина (А-6 и А-9), Попеску и др. В результате многочисленных сравнительных испытаний установлено, что для культуральной диагностики туберкулеза следует использовать как минимум две разные по составу питательные среды. Наиболее широкое распространение получил набор из 2 яичных сред: Левенштейна-Йенсена и Финна-II.
