Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


јнализы




¬ основе самых распространенных на сегодн€ методов иммуноанализов, базирующихс€ на количественном определении растворимых веществ, лежит взаимодействие антигена с антителом (т.е. иммунологическое распознавание), которое детектируетс€ (визуализуетс€) с помощью специальной метки, заранее конъюгированной либо с антителом, либо с антигеном. ¬ качестве меток используют вещества, которые при определенных услови€х тот или иной прибор может Ђувидетьї (зарегистрировать) и измерить количество метки. ‘изико-химическа€ чувствительность таких анализов обычно составл€ет нанограммы на миллиметр, но, примен€€ конкретные тест-системы, нередко вы€вл€ют пико- и фемтомоли определ€емого вещества.

 

¬арианты меток и материалов дл€ твердой фазы

ћетки

1. –адионуклид используетс€ при радиоиммунном анализе (–»ј).

2. ‘ерменты, катализирующие превращение бесцветного субстрата в цветной или флюоресцирующий продукт. ¬ данном случае исследование называют иммуноферментным анализом (»‘ј), его разновидность - анализ иммуноферментно-флюоресцентный.

3. ‘люоресцирующие, люминесцирующие вещества и др.

¬ случае –»ј результат измер€ют на счетчиках радиоактивности в зависимости от того, какие частицы/кванты излучает конкретна€ метка-радионуклид. –езультаты –»ј нельз€ зарегистрировать без соответствующих приборов. ¬ случае »‘ј при образовании цветного продукта результат реакции определ€ют с помощью спектрофотометра, измер€ющего оптическую плотность. Ѕез прибора, на

глаз, реакцию можно оценить приблизительно как положительную или отрицательную.

ѕри использовании в качестве метки фермента, катализирующего образование флюоресцирующего продукта, результат реакции определ€ют на флюориметре, измер€ющем излучение в определенном диапазоне длин волн. Ѕез прибора в данном случае не обойтись.

¬первые методы –»ј были разработаны в 1958 г. —. Ѕерсоном и –. ялоу. ѕоследн€€ удостоена в 1977 г. Ќобелевской премии за –»ј, позволившего впервые в мире определ€ть нанограммовые концентрации пептидных гормонов в крови человека.

ћенее чем через год после описани€ –»ј в качестве метки стали использовать ферменты с бесцветными субстратами, но окрашенными продуктами. ћетод назвали »‘ј. ѕо чувствительности и специфичности –»ј и »‘ј одинаковы, так как их показатели определ€ютс€ в большей мере аффинностью взаимодействи€ антитела и антигена, а не типом метки. ќднако »‘ј примен€ют много чаще, чем –»ј, ибо реагенты дл€ »‘ј существенно дольше остаютс€ стабильными, а следовательно, технологию »‘ј проще стандартизировать. ¬ –»ј используют непрерывно излучающие радионуклиды, и величина их удельной радиоактивности непрерывно же измен€етс€. ƒл€ мечени€ белков примен€ют радионуклиды йода (131I или 125I; γ-излучение), у которых период полураспада весьма короток, и реагенты необходимо обновл€ть примерно раз в мес€ц.

 

—начала иммуноанализы разрабатывали в так называемых гомогенных вариантах (без разделени€ компонентов в растворе). Ќо вскоре в технологии иммуноанализов начали использовать твердую фазу, на которой методом спонтанной сорбции из раствора фиксируетс€ антиген или антитело. јнализы стали называть твердофазными, или иммуносорбентными (англ. ELISA - Enzyme linked immunosorbent assay). “ехнологически твердофазные анализы несравнимо удобнее гомогенных тестов. ¬ насто€щее врем€ твердофазные варианты »‘ј примен€ют в 99,9% тест-систем.

¬ качестве Ђтвердой фазыї используют следующие материалы:

1) пластмассу (полистирол, поливинилхлорид и др.) в виде стандартно штампованных микроплашек с 96 или 60 лунками (или шарики, колпачки и прочее - дл€ постановки единичных проб);

2) пористые материалы типа нитроцеллюлозы в виде наполнителей в объеме или в виде плоских листов или полосок стрипов

(англ. strip); стрипы используют в методиках типа иммуноблота и иммунохроматографии; в пористых материалах существенно больше площадь, на которой сорбирован один из участников взаимодействи€; другие реагенты диффундируют по порам.

ѕринцип иммуносорбентных анализов заключаетс€ в том, что на материале твердой фазы в соответствии с физико-химическими свойствами сорбируетс€ антиген или антитело.

Ѕелки хорошо сорбируютс€ на подобранных дл€ »‘ј/–»ј пластмассовых материалах. ≈сли заданный антиген в силу своей химической природы (липид, углевод, липоили гликопроизводные белков) плохо сорбируетс€ на выбранной твердой фазе, то подбирают вещество-Ђподложкуї, которое с одной стороны хорошо св€жетс€ с твердой фазой, с другой стороны - с антигеном. ќднако потребность в Ђподложкеї возникает крайне редко.

¬се остальные реагенты тест-систем используют в виде растворов. »х добавл€ют к твердой фазе поочередно, инкубируют, после чего несв€завшиес€ реагенты легко удал€ют промывкой твердой фазы. ¬ этом главное технологическое преимущество твердофазного иммуноанализа. –езультат реакции Ђостаетс€ї на твердой фазе и регистрируетс€ количественно.

 

—уществует много вариантов конструкций тест-систем дл€ иммуноанализов. ћы разберем несколько базисных и более подробно объ€сним значени€ терминов.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 442 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ћучша€ месть Ц огромный успех. © ‘рэнк —инатра
==> читать все изречени€...

440 - | 423 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.013 с.