Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


–адиальна€ иммунодиффузи€ по ћанчини

¬ 1965 г. ƒжульетта ћанчини и соавт., а независимо от них - ƒ.Ћ. ‘эй и Ё.ћ. ћак елви разработали методику радиальной иммунодиффузии (–»ƒ) в том же агаровом геле дл€ количественного определени€ содержани€ в крови (в сыворотке) иммуноглобулинов классов ј, G и ћ.

ƒл€ этого потребовалось получить моноспецифические антисыворотки лабораторных животных против очищенных иммуноглобулинов классов ћ, ј и G человека. ћоноклональных антител в те годы еще не было.

ћанчини, ‘эй и ћак елви воспользовались тем физикохимическим свойством агар-агара, что температура его плавлени€ недалека от физиологических температур теплокровных животных, и белки (по крайней мере иммуноглобулины) не претерпевают калечащую денатурацию при температуре плавлени€ агара. Ёто позволило авторам ввести в состав зол€ агара, т.е. в жидкую фазу, антисыворотки против иммуноглобулинов разных изотипов, тщательно перемешать раствор перед заливанием на стекл€нную пластину. “аким образом, в слое агарового гел€ оказываютс€ заплавленными антииммуноглобулиновые антиизотипические антитела. ¬ таком геле пробивают круглые луночки, в которые внос€т так называемые стандарты (или калибраторы, т.е. растворы иммуноглобулинов с известной концентрацией дл€ построени€ калибровочной кривой) и пробы испытуемых сывороток и оставл€ют на свободную диффузию на 16-24 ч.

 

ѕо истечении этого времени вокруг луночек образуютс€ видимые невооруженным глазом кольца преципитатов. ќпыт показал: диаметр колец преципитатов тем больше, чем выше концентраци€ данного изотипа иммуноглобулинов в исследуемой биопробе.  алибраторы - препараты иммуноглобулинов заданного изотипа с известной весовой концентрацией (мг/мл) - позвол€ют построить калибровочную кривую и с ее помощью определить концентрации иммуноглобулинов в испытуемых пробах сывороток. ѕоследнее возможно только на пр€мом отрезке кривой. ƒл€ спр€млени€ калибровочной кривой прибегают к несложным математическим действи€м, например откладывают на ос€х координат не диаметр колец преципитации, а квадрат этой величины, и/или не концентрацию изотипа иммуноглобулинов, а логарифм концентрации по основанию 2 или 10.  акой подход окажетс€ приемлемым, подбирают опытным путем в каждой лаборатории.

’от€ метод –»ƒ разработан полвека назад, его нередко используют в лаборатори€х клинической иммунологии до насто€щего времени в силу простоты исполнени€, относительно невысокой стоимости реагентов и независимости от приборов.

ћетод –»ƒ применим только дл€ названных изотипов иммуноглобулинов (ћ, ј и G), ибо их физиологические концентрации в сыворотках крови попадают в пределы чувствительности метода (мг/мл).

»зотипы IgD и IgE присутствуют в нормальных сыворотках в таких низких концентраци€х, которые метод –»ƒ не Ђвидитї.  онцентрации IgE определ€ют с помощью высокочувствительных вариантов иммуноферментного анализа - »‘ј (см. ниже):

1) общий IgE - ловушечным »‘ј, в котором первым слоем на твердой фазе сорбированы моноклональные антиизотипические анти-ε-антитела;

2) дл€ определени€ антигенспецифичных IgE антигены сорбируют на пористой твердой фазе, где площадь сорбции существенно превосходит дно планшета при одном и том же реакционном объеме; чувствительность определени€ соответственно существенно выше.

 

IgD в норме присутствует в сыворотках в следовых количествах, и задача его измерени€ встает крайне редко (веро€тно, только в случа€х IgD-продуцирующих плазмоцитом).

¬ табл. 4.1 и 4.2 приведены нормальные концентрации иммуноглобулинов разных изотипов у людей разного возраста (по данным более современного нефелометрического определени€ с использованием антиизотипических моноклональных антител и прибора нефелометра).

“аблица 4.1.  онцентрации иммуноглобулинов классов ћ, ј и G в сыворотке крови человека в норме

ќкончание табл. 4.1

“аблица 4.2.  онцентраци€ изотипов IgG (1, 2, 3, 4), IgA (1, 2) и IgE в сыворотке крови взрослого человека в норме

ѕоскольку IgE в норме в крови присутствует в низкой концентрации, то дл€ снижени€ веро€тности ошибок при записывании нулей по международной договоренности значени€ IgE выражают в так называемых международных единицах - ћ≈/мл или кћ≈/л (IU/ml, kIU/l). 1 ћ≈ равна 2,43 нг IgE.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
¬стречна€ иммунодиффузи€ по ќухтерлони и Ёлеку | ќпределение уровн€ Igћ, IgA и IgG в сыворотке человека методом радиальной иммунодиффузии
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 369 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ѕольшинство людей упускают по€вившуюс€ возможность, потому что она бывает одета в комбинезон и с виду напоминает работу © “омас Ёдисон
==> читать все изречени€...

549 - | 430 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.01 с.