Встречная иммунодиффузия по Оухтерлони и Элеку

В 1948 г. Орьян Оухтерлони (Orjan Ouchterlony) и независимо от него Стефан Элек (Stephen Elek) опубликовали разработанную ими методику двойной, или встречной, иммунодиффузии, т.е. диффузии антител и антигенов навстречу друг другу в геле. Эти исследователи обнаружили и использовали физико-химические свойства агарового геля, поры которого имеют размеры, достаточные, чтобы пропустить (дать возможность диффундировать) молекулы свободных антител и многих растворимых антигенов, но задерживающие более крупные по размеру комплексы антител с антигенами. В результате в месте встречи антител с антигенами выпадает осадок; в геле он виден невооруженным глазом как полоса преципитации. Оухтерлони и Элек подобрали концентрацию агар-агара - 1,25-1,5%.

Порядок постановки реакции следующий.

1. Агар растворяют в физиологическом растворе при 56 °С (температура расплавления агара).

2. В виде золя агар выливают на плоское стекло. При охлаждении до комнатной температуры агар застывает в гель.

3. В застывшем геле пробивают трубочкой-пробойником правильные круглые отверстия (лунки) небольшого диаметра (~2-3 мм).

4. В эти лунки вносят образцы антисыворотки и растворы антигенов.

5. Оставляют на диффузию в течение 16-24 ч, по истечении которых можно наблюдать полосы преципитации, если в исследуемых образцах присутствовали комплементарные друг другу лиганды.

Метод Оухтерлони и Элека иллюстрирует рис. 4.1. (см. также цв. вклейку).

Рис. 4.1. Метод Оухтерлони и Элека: а - линии преципитации, при диффузии двух одинаковых антигенов (АГ) навстречу антителам (АТ), плавно сливающиеся друг с другом; б - линии преципитации, при диффузии двух разных антигенов навстречу антителам, не сливающиеся, а пересекающиеся между собой, «не замечающие» друг друга