Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


јналитическа€ и препаративна€ цитофлуориметри€




ћетод проточной цитофлуориметрии, предложенный в начале 1970-х годов, широко используетс€ в медико-биологических и клинических исследовани€х. ¬остребованность цитометрии объ€сн€етс€ быстротой, точностью и надежностью метода. ќпределение фенотипа каждой клетки в сочетании с анализом большого количества событий дает максимально полную информацию в кратчайшие сроки.

ѕринцип метода. »спользуютс€ проточные цитометры разных фирм. ѕри проведении исследовани€ клетки, окрашенные тем или иным флуоресцентным красителем, ввод€т с потоком буферного раствора в вибрирующую проточную камеру с форсункой. ¬ каждой капле жидкости, выход€щей из форсунки, содержитс€ одна клетка. »сточник света (чаще всего лазер) освещает отдельные клетки в проход€щей через световой пучок тонкой струе жидкости. »сходный световой луч рассеиваетс€ клеткой. Ёто рассе€ние измер€етс€ с помощью фотоэлектронного умножител€ (‘Ё”). –ассе€ние света под малыми углами (переднее рассе€ние - forward scatter) может быть использовано дл€ определени€ размеров клетки. Ќа основе данного параме-

 

тра можно отличить жизнеспособные €дерные клетки от мертвых и эритроцитов. –ассе€ние света под углом 90∞ (боковое рассе€ние - side scatter) позвол€ет судить о соотношении размеров €дра и цитоплазмы и наличии гранул в клетке. ѕолученные характеристики позвол€ют разделить анализируемые лейкоциты на лимфоциты, моноциты, нейтрофилы. ќдновременно можно проводить анализ поверхностных и внутриклеточных антигенов клеток с помощью моноклональных антител к ним, конъюгированных с различными флуоресцентными метками. ≈сли анализируема€ клетка содержит флуорохром, то он испускает излучение соответствующих параметров, при этом интенсивность флуоресценции коррелирует с плотностью антигена на клеточной поверхности, а уровень флуоресценции измер€етс€ с помощью ‘Ё” (рис. 2.4, см. также цв. вклейку).

¬ практике широко используютс€ два флуоресцентных красител€ - флуоресцеин-5-изотиоционат (‘»“÷) и R-фикоэритрин (‘Ё). ќни возбуждаютс€ аргоновым лазером с длиной волны 488 нм и излучают флуоресценцию в разных диапазонах волн: ‘»“÷ излучает свет в Ђзеленомї спектре, а ‘Ё - в Ђоранжево-красномї.  расители различаютс€ как по специфичности их молекул€рного св€зывани€, так и по оптическим характеристикам, таким, как спектр поглощени€, возбуждение флуоресценции и др. ¬ насто€щее врем€ спектр используемых флуорохромов расширилс€ (табл. 2.1).

“аблица 2.1. ќсновные используемые флуорохромы

ќкончание табл. 2.1

ѕроточный цитометр включает три основных блока:

1) оптический, где производитс€ измерение;

2) блок обработки сигналов, где сигналы усиливаютс€ и преобразуютс€ в электрические;

3) блок сбора и обработки данных (см. рис. 2.4).





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 580 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

—вобода ничего не стоит, если она не включает в себ€ свободу ошибатьс€. © ћахатма √анди
==> читать все изречени€...

333 - | 305 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.