Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


Ћабораторна€ работа 2-1

1. 10 мл гепаринизированной крови человека (20-25 ≈ƒ гепарина на 1 мл крови) развод€т в 3 раза (1 часть крови и 2 части питательной среды 199).

2. –азведенную кровь наслаивают на раствор фиколл-урографина (плотность 1,077 г/см3) в соотношении 1:3 (1 часть фиколла и 3 части разведенной крови).  ровь остаетс€ над раствором фиколла и не смешиваетс€ с ним.

3. ѕровод€т центрифугирование при комнатной температуре в течение 45 мин на центрифуге с горизонтальным ротором при 400 g.

—ледует иметь в виду, что дл€ определени€ необходимого числа оборотов в конкретных услови€х центрифугировани€ или получени€ соответствующего центробежного ускорени€ одну из необходимых величин (ускорение или число оборотов) наход€т по формуле:

где g - центробежное ускорение; n - число оборотов в минуту; r - радиус от центра оси до границы раздел€емых сред.

4. ѕосле центрифугировани€ собирают интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки, в отдельную пробирку. Ёритроциты склеиваютс€ фиколлом и оседают на дно пробирки вместе с гранулоцитами (см. рис. 2.2).

5. —успензию мононуклеарных клеток трижды отмывают средой 199, центрифугиру€ по 10 мин при 200 g.

 

6.  летки ресуспендируют в 1 мл культуральной среды. ѕодсчет клеток осуществл€ют в камере √ор€ева. ∆изнеспособность клеток определ€ют с помощью 0,1% раствора трипанового синего. Ќеобходимо подсчитать процент выхода жизнеспособности клеток (более 90%). ƒл€ этого подсчитывают начальное количество клеток и количество выделенных клеток.

2.3. ¬џƒ≈Ћ≈Ќ»≈ ћќЌќ÷»“ќ¬

Ћабораторные методы выделени€ моноцитов разнообразны, но основные методические приемы преимущественно св€заны с фракционированием моноцитов по способности прилипать к стеклу или пластиковой поверхности или по способности при центрифугировании к локализации в определенных зонах ступенчатого градиента.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
—лизистые секреты, сорбированные на пористые губки | јналитическа€ и препаративна€ цитофлуориметри€
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 341 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ѕутерброд по-студенчески - кусок черного хлеба, а на него кусок белого. © Ќеизвестно
==> читать все изречени€...

1339 - | 1348 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.