Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


 оличественное определение Ѕј¬




 оличественное определение полисахаридов √‘-’1, вып.2 предлагает дл€ листьев подорожника большого и слоевищ ламинарии. ћетод определени€

- гравиметрический (весовой), основанный на осаждении полисахаридного водного извлечени€ 95% спиртом. —тадии анализа:

1) экстракци€ полисахаридов водой;

2) осаждение полисахаридов из водного извлечени€ 95% спиртом;

3) высушивание осадка и доведение его до посто€нной массы.

¬ слоевишах ламинарии, кроме того, определ€ют содержание йода после сжигани€ навески бромйодометрическим методом.

“ам же определ€ют содержание песка (SiO2).

¬ сырье алте€, липы, льна, мать-и-мачехи, подорожника блошного количественного определени€ биологически активных веществ и экстрактивных веществ не провод€т.

2. ќценка качества сырь€, содержащего жиры. ћетоды анализа.

—уществующа€ в фармации нормативна€ документаци€ предусматривает качественные реакции на жиры при проведении микроскопического анализа

плодов и сем€н - √‘-’1, вып. 1, стр.279:

готов€т поперечный срез плодов и сем€н в растворе —удана III и подогревают; капли жирного масла окрашиваютс€ в оранжево-розовый цвет.

Ётой реакцией, в частности, подтверждают наличие жирного масла в эндосперме сем€н льна.

 оличественное определение жира в лекарственном растительном сырье:

ќпределение содержани€ жира в растительном сырье провод€т в жиромасличной промышленности, в сельском хоз€йстве, в пищевой промышленности.

ћетод определени€ - гравиметрический. ћетод основан на растворимости жиров в органических растворител€х. Ќаиболее часто используют метод —окслета и метод –ушковского.

ѕо методу —окслета определ€ют массу жирного масла после отгона органического растворител€.

ѕо методу –ушковского о масссе жирного масла суд€т по убыли массы навески сырь€ после обработки органическим растворителем. ќпределение ведетс€ в аппарате —окслета. ќпределение длительное (от 16 часов до 3-х суток), недостаточно точное, т.к. извлекаютс€ не только жиры, но и пигменты, каротиноиды, смолистые вещества.

3. Ёфирные масла

ћетод количественного определени€ содержани€ эфирного масла в растительном сырье основан на:

- физических свойствах эфирного масла - летучести и практической нерастворимости в воде;

- на отсутствии химического взаимодействи€ эфирного масла и воды;

- на законе ƒальтона о парциальных давлени€х.

—огласно закону, смесь жидкостей закипает тогда, когда сумма их парциальных давлений достигает атмосферного давлени€.

—ледовательно, давление паров смеси жидкостей (вода + эфирное масло) достигнет атмосферного давлени€ еще до кипени€ воды.

¬ соответствии с √‘-’1, вып. 1, стр.290 (раздел Ђќбщие методы анализаї) определение провод€т одним из 4 методов в зависимости от количества в сырье эфирного масла, его состава, плотности и термолабильности.

ћетод 1 и 2 примен€ют, если эфирное масло имеет плотность меньше 1 и не раствор€етс€ в воде.

ћетод 3 и 4 примен€ют дл€ сырь€, содержащего эфирное масло, которое претерпевает изменени€, образует эмульсию, легко загустевает и имеет плотность близкую к единице.

ћетод 1 (метод √инзберга) - примен€ют дл€ сырь€, где много эфирного (масло термостабильное), в его составе преобладают моно- и бициклические монотерпены. ѕриемник дл€ сбора эфирного масла помещаетс€ в экстрактивной колбе.

Ётим методом определ€ют содержание эфирного масла в сырье можжевельника, м€ты, шалфе€, эвкалипта, тмина.

ћетод 2 (метод  лавенджера) - используют, когда сырье содержит эфирного масла менее 0.2-0.3 %.

Ётот метод дает меньшую ошибку опыта. ѕриемник вынесен за пределы экстракционной колбы, что позвол€ет определить в сырье содержание термолабильного эфирного масла. Ётим методом определ€ют содержание эфирного масла в сырье ромашки, тмина, м€ты, шалфе€, эвкалипта.

ћетод 3 (метод  лавенджера). ѕриемник см. 2-й метод. ¬ приемник прибавл€ют органический растворитель дл€ разрушени€ эмульсии или растворени€ загустевшего или т€желого масла. ќпредел€ют эфирное масло в сырье аниса, аира, тыс€челистника.

ћетод 4 впервые включен в √‘ ’1 и отличаетс€ от 3-его метода возможностью контролировать температуру конденсации. ¬о врем€ гидродистилл€ции температура в отстойнике не должна превышать 25∞—.

¬ √‘-’1, вып.2, стр.227 на побеги багульника болотного даны два показател€ содержани€ эфирного масла в сырье:

- если сырье предназначено дл€ получени€ экстемпоральных лекарственных форм, то эфирного масла должно быть не менее 0.1%;

если сырье предназначено дл€ получени€ ледина, то эфирного масла должно быть не менее 0.7%.

¬ таком эфирном масле дополнительно определ€ют содержание ледола методом газо-жидкостной хроматографией. Ћедола должно быть не менее 17%.

—ырье, содержащее эфирное масло, которое при пере≠гонке претерпевает изменени€, образует эмульсию, легко за≠густевает или имеет плотность, близкую к единице, анализи≠руют методами 3 или 4.

4.  ачественные реакции на антраценпроизводные

»з сырь€ антраценпроизводные извлекают водой или спиртом различной концентрации.

ƒл€ получени€ свободных агликонов, гликозиды в растительном сырье подвергают гидролизу, свободные агликоны извлекают этиловым эфиром и хлороформом.

ƒл€ обнаружени€ антраценпроизводных в сырье используют качественные реакции, основанные на химических свойствах и хроматографическое исследование.

–еакци€ образовани€ фенол€тов со щелочью:

а) по характерной оранжевой окраске корней и коры или

на сухом сырье - при нанесении нескольких капель 10%-ного раствора натри€ гидроксида на сырье по€вл€етс€ вишнево-красное п€тно.

ѕоложительный результат наблюдаетс€, если антраценпроизводные присутствуют в окисленной форме. –екомендована √‘-’1 дл€ подтверждени€ подлинности Cortex Frangulae;

б) с водным извлечением (1:10) - при добавлении к водному извлечению из сырь€ нескольких капель 10%-ного раствора щелочи образуетс€ вишнево-красное окрашивание - производные антрахинона,

желтое окрашивание - производные антранола и антрона;

фиолетовое окрашивание Ц ализарин.

ќкраска при взаимодействии со щелочью по€вл€етс€ только у окисленных форм антраценопроизводных,

а восстановленные формы четкой реакции с NaOH не дают, и дл€ их обнаружени€ необходимо осуществить предварительное окисление; например, свежесобранна€ кора крушины дает эту реакцию с NaOH только после предварительной обработки ее пероксидом водорода.

в) реакци€ Ѕорнтрегера. ѕозвол€ет обнаружить эмодины в присутствии других антраценпроизводных.

ѕроба основана на способности антрагликозидов подвергатьс€ щелочному гидролизу с образованием свободных агликонов.

ќдновременно производитс€ окисление восстановленных форм.

ѕосле подкислени€ гидролизата агликоны извлекают эфиром.

Ёфирный слой окрашиваетс€ в желтый цвет.

ѕри встр€хивании эфирного сло€ с аммиаком эмодины, имеющие гидроксильные группы в бета-положении, переход€т в водный слой, окрашива€ его в вишнево-красный цвет.

’ризофанол остаетс€ в органическом слое, окрашива€ его в желтый цвет.

ѕредложена в √‘-’1 дл€ подтверждени€ подлинности Cortex Frangulae, Folia Sennae, Fructus Rhamni catharticae, Radices Rhei, Rhizomata et radices Rubiae.

2. –еакци€ микросублимации (микровозгонки).

ќснована на способности јѕ возгон€тьс€ при 200 ∞— с последующей конденсацией на холодной поверхности без изменени€ основной структуры.

» может быть проведена в двух вариантах:

в пробирке и на предметном стекле.

ѕри нанесении на сублимат раствора натри€ гидроксида образуетс€ вишнево- красное окрашивание.

ƒана в √‘-’1 дл€ подтверждени€ подлинности —огtех Frangulae.

3.–еакци€ образовани€ лаков.

ќснована на способности антраценпроизводных образовывать со спиртовым раствором магни€ ацетата комплексы, окрашенные в вишнево-красный цвет.

4.ƒл€ качественного обнаружени€ производных антрацена часто используетс€ бумажна€ и тонкослойна€ хроматографи€.

ќ присутствующих веществах суд€т по характеру их флуоресценции в ”‘-свете до и после обработки хроматограмм соответствующими реагентами (парами аммиака, растворами едких щелочей).

 оличественное определение.

¬се методы количественного определени€ антраценпроизводных в сырье основаны на отделении свободных агликонов после кислотного гидролиза. јгликоны экстрагируют в органический растворитель и определ€ют различными методами.

1. ‘отоэлектроколориметрический метод.

ќснован способности окрашенных фенол€тов поглощать свет при длине волны 530-540 нм.

ѕредложен в 1957 г. јутергоффом (√ермани€), модифицирован ј.—. –омановой и ј.». Ѕаньковским (Ќѕќ Ђ¬»Ћј–ї, 1965).

јутергофф предложил гидролиз и экстракцию агликонов объединить в одну стадию кип€чением навески сырь€ с лед€ной уксусной кислотой и с последующей экстракцией диэтиловым эфиром.

—тадии определени€ суммы производных антрацена:

1- гидролиз антраценпроизводных и экстракци€ агликонов из сырь€;

2- получение окрашенных солей

Ёфирное извлечение обрабатывают в делительной воронке отдельными порци€ми щелочно-аммиачного раствора (5% раствор NаќЌ, содержащий 2% раствора аммиака).

јнтраценпроизводные в виде окрашенных фенол€тов переход€т в водную фазу (обрабатывают до тех пор, пока последн€€ порци€ щелочно-аммиачного раствора не будет оставатьс€ бесцветной).

3- окисление восстановленных форм антраценпроизводных

ƒл€ перевода всех форм антраценпроизводных в окисленные, часть щелочно-аммиачного раствора фенол€тов нагревают на вод€ной бане в течение 15 мин. ¬осстановленные формы окисл€ютс€ кислородом воздуха и вступают в реакцию со щелочно-аммиачным раствором, окраска становитс€ интенсивнее (сырье крушины и ревен€). ¬ сырье марены красильной окисление восстановленных форм провод€т пергидролем.

4 - измерение оптической плотности окрашенных растворов с пофотоэлектроколориметра (‘Ё ) при длине волны 530-540 нм (зеленый фильтр).

—одержание антраценпроизводных в сырье (%) рассчитывают по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду (—о—12 в пересчете на истизин (хризацин).

‘отоэлектроколориметрический метод рекомендован √‘-’1 дл€ определени€ содержани€ (%) антраценпроизводных в сырье крушины, ревен€, марены красильной.

¬ корневищах и корн€х марены красильной по ‘— регламентируетс€ определение св€занных производных антрацена.

 оличественное содержание св€занных производных антрацена определ€ют вычитанием количества свободных производных антрацена (агликонов} из суммы производных антрацена.

ѕри определении свободных производных антрац ена отсутствует стади€ гидролиза антрагликозидов. јгликоны извлекают из сырь€ эфиром, получают окрашенные фенол€ты, окисл€ют восстановленные формы пергидролем, определ€ют оптическую плотность окрашенных фенол€тов по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду, рассчитывают содержание свободных производных антрацена в сырье марены красильной.

2. —пектрофотометрический метод.

Ётим методом определ€ют содержание антраценпроизводных в листь€х сенны.

ќсновные стадии метода:

- экстракцию сеннозидов провод€т водой при нагревании;

водное извлечение очищают от смолистых веществ;

окисление восстановленных форм провод€т с помощью FeCl3;

гидролиз гликозидов антрахинонов провод€т 50%-ным раствором серной кислоты;

оптическую плотность окрашенных растворов измер€ют с помощью спектрофотометра при длине волны 523 нм;

- содержание суммы производных антрацена в пересчете на хризофанол вычисл€ют по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду.

 

5.  ачественный анализ дубильных веществ.

ƒл€ получени€ суммы дубильных веществ растительное сырье экстрагируют гор€чей водой в соотношении 1:30 или 1:10.

 ачественные реакции на дубильные вещества можно подразделить

на 2 группы:

ќбщие реакции осаждени€ Ц дл€ обнаружени€ дубильных веществ

√рупповые Ц дл€ установлени€ принадлежности дубильных веществ к определенной группе

ƒл€ обнаружени€ дубильных веществ в растительном сырье используют следующие реакции:

—пецифической реакцией на дубильные вещества €вл€етс€ реакци€ осаждени€ желатином. »спользуют 1 %-й раствор желатина на 10 %-ном растворе хлорида натри€. ѕо€вл€етс€ хлопьевидный осадок, растворимый в избытке желатина. ќтрицательна€ реакци€ с желатином свидетельствует об отсутствии дубильных веществ.

–еакци€ с сол€ми алкалоидов. ќбразуетс€ аморфный осадок за счет образовани€ водородных св€зей с гидроксильными группами дубильных веществ и атомами азота алкалоида.

Ёти реакции дают одинаковый результат независимо от группы дубильных веществ.

–еакции, позвол€ющие определить группу дубильных веществ.

1 .–еакци€ —тиасни Ц с 40 % раствором формальдегида и конц. HCl -

 онденсированные дубильные вещества образуют осадок кирпично-красного цвета

2. Ѕромна€ вода (5 г брома в 1 л воды) - к 2-3 мл испытуемого раствора прибавл€ют по капл€м бромную воду до по€влени€ в растворе запаха брома; в случае присутстви€ конденсированных дубил ьных веществ образуетс€ оранжевый или желтый осадок.

3. ќкрашивание с сол€ми трехвалентного железа, железоаммонийными квасцами Ц

черно-синее (дубильные вещества гидролизуемой группы, которые €вл€ютс€ производными пирогаллола)

или черно-зеленое ( дубильные вещества конденсированной группы, которые €вл€ютс€ производными пирокатехина).

4.  атехины дают красное окрашивание с ванилином

(в присутствии конц. HCl или 70 %-ной H2SO4 развиваетс€ €рка€ красна€ окраска).

 атехины образуют при этой реакции окрашенный продукт следующего строени€:

–еакцией отличающей пирогалловые танниды от пирокатехиновых €вл€етс€ реакци€ нитрозометилуретаном.

ѕри кип€чении растворов дубильных веществ с нитрозометилуретаном танниды пирокатехинового р€да осаждаютс€ полностью,

а присутствие пирогалловых таннидов можно обнаружить в фильтрате путем прибавлени€ железоаммиачных квасцов и натри€ ацетата Ц фильтрат окрашиваетс€ в фиолетовый цвет.

—вободна€ эллагова€ кислота дает красно-фиолетовую окраску при добавлении нескольких кристаллов нитрита натри€ и трех-четырех капель уксусной кислоты.

7. ƒл€ обнаружени€ св€занной эллаговой кислоты (или гаксаоксидифеновой) уксусную кислоту замен€ют 0,1 н. серной или сол€ной кислотой (кармино-красна€ окраска, переход€ща€ в синюю).

8. ƒубильные вещества с белками создают непроницаемую дл€ воды пленку (дубление). ¬ызыва€ частичное свертывание белков, они образуют на слизистых оболочках и раневых поверхност€х защитную пленку.

9. ѕри соприкосновении с воздухом (например, резке свежих корневищ) дубильные вещества легко окисл€ютс€, превраща€сь во флобафены или красени, которые обусловливают темно-бурую окраску многих кор и других органов, настоев.

‘лобафены нерастворимы в холодной воде, раствор€ютс€ в гор€чей воде, окрашива€ отвары и настой в бурый цвет.

10. — 10 %-ным раствором среднего ацетата свинца (одновременно добавл€ют 10 %-ный раствор уксусной кислоты):

образуетс€ белый осадок, нерастворимый в уксусной кислоте Ц дубильные вещества гидролизуемой группы

(осадок отфильтровывают и в фильтрате определ€ют содержание конденсированных дубильных веществ, с 1 %-ным раствором железоаммонийных квасцов Ц черно-зеленое окрашивание);

белый осадок, растворимый в уксусной кислоте Ц дубильные вещества конденсированной группы.

11. ƒл€ идентификации отдельных соединений используют хроматографический анализ, рассматрива€ в ”‘-свете. ќбработку хроматограмм производ€т раствором железа хлорида или ванилиновым реактивом

—труктуру устанавливают с помощью » -спектров, ѕћ–-спектров.

–еакци€ с 1 %-ным спиртовым раствором железоаммониевых квасцов €вл€етс€ фармакопейной, проводитс€ с отваром из сырь€ Ц кора дуба, корневище змеевика, соплоди€ ольхи, плоды черники;

ј также непосредственно в сухом сырье Ц кора дуба, кора калины, корневища бадана.

 

 оличественное определение.

√равиметрические или весовые методы Ц основаны на количественном осаждении дубильных веществ желатином, ионами т€желых металлов или адсорбцией кожным (гольевым) порошком.

ќфициальным в дубильно-экстрактовой промышленности €вл€етс€ весовой единый метод (¬≈ћ):

¬ водных выт€жках из растительного материала вначале определ€ют общее количество растворимых веществ (сухой остаток) путем высушивани€ определенного объема выт€жки до посто€нной массы;

затем из выт€жки удал€ют дубильные вещества, обрабатыва€ ее обезжиренным кожным порошком; после отделени€ осадка в фильтрате вновь устанавливают количество сухого остатка.

–азность в массе сухого остатка до и после обработки выт€жки кожным порошком показывает количество подлинных таннидов.

“итриметрические методы.

  ним относ€тс€:

∆елатиновый метод - ћетод якимова и  урницкой Ц основан на способности дубильных веществ образовывать нерастворимые комплексы с белками. ¬одные извлечени€ из сырь€ титруют 1 % раствором желатина, в точке эквивалентности комплексы желатино-таннаты раствор€ютс€ в избытке реактива.

“итр устанавливают по чистому таннину. “очку валентности определ€ют путем отбора наименьшего объема титрованного раствора, вызывающего полное осаждение дубильных веществ.

ћетод наиболее точный, т.к. позвол€ет определить количество истинных дубильных веществ.

Ќедостатки: длительность определени€ и трудность установлени€ точки эквивалености.

2 ) ѕерманганатометрический метод (метод Ћевентал€ в модификации  урсанова). Ёто фармакопейный метод, основан на легкой окисл€емости перманганатом кали€ в кислой среде в присутствии индикатора и катализатора индигосульфокислоты, котора€ в точке эквивалентности раствора мен€етс€ от синего до золотисто-желтого.

ќсобенности определени€, позвол€ющие оттитровать только макромолекулы дубильных веществ: титрование проводитс€ в сильно разбавленных растворах (извлечение разбавл€еттс€ в 20 раз) при комнатной температуре в кислой среде, перманганат добавл€етс€ медленно, по капл€м, при интенсивном перемешивании.

ћетод экономичный, быстрый, прост в исполнении, но недостаточно точен, так как перманганат кали€ окисл€ет частично и низкомолекул€рные фенольные соединени€.

3 ) ƒл€ количественного определени€ таннина в листь€х сумаха и скумпии используетс€ метод осаждени€ дубильных веществ сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Ѕ в присутствии ксиленолового оранжевого.

3. ‘изико-химические методы.

1) ‘отоэлектроколориметрические - основаны на способности ƒ¬ образовывать окрашенные соединени€ с сол€ми трехвалентного железа, фосфорно-вольфрамовой кислотой, реактивом ‘олина-ƒениса и др.

2) ’роматоспектрофотометрические и нефелометрические методы используют в научных исследовани€х.

6. ћетоды анализа сырь€, содержащего сапонины.

Ќаличие сапонинов в лекарственном растительном сырье можно установить при помощи качественных реакций, которые провод€т непосредственно с сырьем или с извлечением из него.

 ачественные реакции на сапонины основаны на их физических, химических и биологических свойствах. ƒл€ проведени€ качественных реакций готов€т водный настой 1:10 при нагревании на вод€ной бане. ѕосле охлаждени€ настой фильтруют.

–еакции, основанные на физических свойствах.

ƒл€ проведени€ реакции на пенообразованиеберут две пробирки, в одну добавл€ют 5 мл 0,1 моль/л HCl, в другую добавл€ют 5 мл 0,1 моль/л NaOH и сильно встр€хивают. ≈сли образуетс€ стойка€ пена в обеих пробирках или в пробирке с кислотой Ц это говорит о кислых тритерпеновых сапонинах.

—тероидные сапонины дают дают обильную, стойкую пену в щелочной среде.

’имические методы.

ќтнос€тс€ реакции осаждени€ сапонинов и цветные реакции.

1.»з водных растворов сапонины осаждаютс€ гидроксидами бари€ и магни€, сол€ми меди, ацетатом свинца.

ѕричем тритерпеновые Ц осаждаютс€ средним ацетатом свинца, а стероидные Ц основным.

2. »з спиртовых извлечений (или растворов) стероидные сапонины и тритерпеновые сапонины выпадают в осадок при добавлении 1% спиртового раствора холестерина в виде холестеридов.

3. —тероидные сапонины, так же как и сердечные гликозиды, дают реакцию Ћибермана-Ѕухарда с уксусным ангидридом и кислотой концентрированной серной Ц образуетс€ быстро переход€ща€ окраска от розовой до зеленой и синей.

4. –еакци€ —анье - стероидные сапонины от тритерпеновых можно отличить по реакции с 1% раствором сурьмы треххлористой, концентрированной серной кислотой, содержащей уксусный ангидрид, если образуетс€ желтое окрашивание.

”читыва€, что многие из перечисленных химических реакций могут давать и другие соединени€, провод€т еще и биологические испытани€.

Ќа биологических свойствах сапонинов

основана реакци€ гемолиза с 2 % взвесью эритроцитов в изотоническом растворе.  ровь становитс€ прозрачной, €рко-красной. ƒл€ проведени€ этой реакции из растительного сырь€ готов€т настой на изотоническом растворе.

√осударственна€ фармакопе€ XI издани€ (вып.2) рекомендует использо≠вать качественные реакции дл€ подтверждени€ подлинности дл€ трех видов сырь€.

1.  орневища с корн€ми синюхи голубой. — водным извлечением проводитс€ реакци€ пенообразовани€, основанна€ на способности сапонинов снижать поверхностное нат€жение жидкости (воды) и давать в отваре стойкую и обильную пену после встр€хивани€.

2.  орни аралии маньчжурской. ћетанольное извлечение хроматографируют в тонком закрепленном слое силикагел€ (на пластинках Ђ—илуфолї) в системе растворителей хлороформ-метанол-вода (61:32:7). ¬ качестве свидетелей используют раствор Ђ—апаралаї. ’роматограмму про€вл€ют 20% H2SO4 и нагревают в сушильном шкафу (1=105∞—) в течение 10 мин. ѕо€вл€ютс€ 3 п€тна вишневого цвета на уровне п€тен аралозидов в Ђсапаралеї.

3.  орни женьшен€.

а) –еакци€ с порошком корн€ женьшен€ (на гликозиды). ѕри нанесении конц. H2SO4 на порошок корн€ женьшен€ через 1-2 минуты по€вл€етс€ кирпично-красное окрашивание, переход€щее в красно-фиолетовое, а затем - в фиолетовое.

б) Ќаличие панаксозидов доказывают при помощи разделени€ извлечени€ из корн€ женьшен€ в тонком слое силикагел€ и последующим про€влением хроматограммы раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты при нагревании. ѕанаксозиды про€вл€ютс€ в виде розовых п€тен.

≈диного метода количественного определени€ сапонинов в лекарственном растительном сырье нет.

„аще всего используют физико-химические методы:

1.ѕотенциометрический метод. ћетод основан на определении изменени€ электродвижущей силы (Ёƒ—) в результате титровани€. ћетод используетс€ дл€ определени€ суммы аралозидов в корн€х аралии маньчжурской.

Ётапы определени€: - подготовительный; экстракци€ аралозидов метиловым спиртом и их кислотный гидролиз:


R1, R2 Ц сахара олеанолова€ кислота

- очистка от сопутствующих веществ - осаждение олеаноловой кисло≠ты в результате смены растворител€ (разбавление спиртового извлече≠ни€ водой и охлаждение);

- растворение олеаноловой кислоты в гор€чей смеси метилового и изобутилового спиртов (1:1,5);

- количественное определение - титрование раствором едкого натра (0,1 моль/л) в смеси метилового спирта и бензола:

“очку эквивалентности определ€ют потенциометрически.

2. —пектрофотометрический метод. ћетод основан на способности сапонинов и их окрашенных комплексов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны. ћетод предложен дл€ определени€ содержани€ сапонинов в следующих видах сырь€:

а) корневища с корн€ми диоскореи ниппонской. ѕровод€т кислотный гидролиз сапонинов с последующим проведением реакции свободного агликона (диосгенина) с реактивом (п-диметиламинобензальдегид). ќбразуетс€ окрашенный комплекс;

б) корни солодки. ѕровод€т осаждение глицирризиновой кислоты концентрированным раствором аммиака. ќсадок раствор€ют и определ€ют оптическую плотность полученного раствора.

3. √равиметрический метод - определение экстрактивных веществ. ћетод основан на определении сухого остатка после высушивани€ суммы веществ, извлеченных из сырь€ соответствующим экстрагентом. ћетод предложен дл€ оценки качества сырь€ женьшен€, почечного ча€, синюхи голубой, солодки.

¬ сырье астрагала шерстистоцветкового и заманихи высокой количественное содержание биологически активных веществ не определ€ют.

4. –анее дл€ количественной оценки сырь€ использовали определение гемолитического индекса и пенного числа.

 оличественное определение сапонинов гемолитическим методом основано на предположении, что гемолитическое действие пр€мо пропорционально количеству вещества в растворе.

√емолитический индекс Ц наименьша€ концентраци€ извлечени€ из сырь€, котора€ вызывает полный гемолиз эритроцитов. ƒл€ этого к настою сырь€ на изотоническом растворе добавл€ют 2% взвесь бараньих эритроцитов. ¬ результате гемолиза кровь становитс€ прозрачной, €рко-красной, лакированной (эритроциты перейдут в плазму). –асчет провод€т на 1 г испытуемого вещества.

5. ѕенное число Ц наименьша€ концентраци€ извлечени€ из 1 г сырь€, при встр€хивании которого в течение 15 секунд образуетс€ пена, устойчива€ в течение 15 минут.

6. ќпредел€ли силу действи€ сапонинового сырь€ на рыбах, то есть рыбный индекс. Ёто наименьша€ концентраци€ извлечени€, при которой гибнут рыбы массой до 0,5 г, длиной 3-4 см в течение 1 часа.

 

7. јнализ сырь€, содержащего —√.

 ачественные реакции на —√ провод€т с очищенным спиртовым извлечением из растительного сырь€.

¬се реакции на —√ можно разделить на 3 группы:

- реакции на углеводную часть молекулы (2-дезоксисахара) (реакци€  еллер- илиани);

- на стероидную структуру (реакци€ Ћибермана-Ѕухарда);

- на лактонное ненасыщенное кольцо.

1. –еакции на стероидную структуру.

ќснованы на способности стероидного €дра —√ подвергатьс€ дегидратации под действием кислотных реагентов (уксусный ангидрид, конц. серна€ кислота, трихлоруксусна€ кислота) с образованием окрашенных комплексных соединений. ќбразующиес€ в результате реакций окрашивани€ мен€ютс€ во времени, поэтому необходимо наблюдать их в момент соприкосновени€ реактивов, а затем отмечать изменение окраски в течение 10-15 минут.

ƒл€ —√ обычно провод€т реакции:

1. –еакци€ Ћибермана-Ѕурхарда. ѕри взаимодействии —√ со смесью уксусного ангидрида и конц. серной кислотой по€вл€етс€ розовое окрашивание, переход€щее в зеленое.

2. –еакци€ –озенгейма. ѕри взаимодействии —√ с 90% водным раствором трихлоруксусной кислоты по€вл€етс€ розовое окрашивание, переход€щее в лиловое и затем в синее.

3. –еакци€ с хлоридом сурьмы (III). —√ при взаимодействии с хлоридом сурьмы в среде уксусного ангидрида образуют лиловое окрашивание

 

2. –еакции на ненасыщенное лактонное кольцо.

ќснованы на способности ненасыщенного лактонного кольца легко окисл€тьс€ в щелочной среде с образованием окрашенных продуктов реакции. ƒл€ —√ обычно провод€т реакции:

1. –еакци€ Ѕалье. ѕри взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде —√ образуют комплексы, окрашенные в оранжевый цвет.

2. –еакци€  едде. ѕри взаимодействии с 3,5-динитробензойной кислотой —√ образуют комплексы, окрашенные в красный цвет,

3. –еакци€ Ћегал€. ѕри взаимодействии с нитропруссидом натри€ в щелочной среде —√ образуют комплексы, окрашенные в красный цвет.

4. –еакци€ –аймонда. ѕри взаимодействии с мета-динитробензолом —√ образуют комплексы, окрашенные в красно-фиолетовый цвет.

 

3. –еакции на углеводную часть молекулы.

ќснованы на способности моносахаридов углеводной цепи образовывать окрашенные комплексы с различными реактивами.

1. ћоносахара, вход€щие в состав —√, после предварительного гидролиза вступают во все цветные реакции, свойственные углеводам (‘еллинга, серебр€ного зеркала).

ƒл€ дезоксисахаров используют реакцию  еллер- илиани.

ƒезоксисахара в присутствии сульфата железа (III), лед€ной уксусной кислоты и конц. серной образуют комплексы, окрашенные в синий или сине-зеленый цвет. Ќеобходимым условием дл€ проведени€ этой реакции €вл€етс€ отсутствие на конце углеводной цепи обычных сахаров (глюкозы).

ƒостоверное заключение о присутствии в лекарственном растительном сырье —√ можно сделать только при положительном результате всех трех групп качественных реакций на различные части молекулы.

¬ √‘-’1 на сырье наперст€нок пурпурной и крупноцветковой, ландыша майского и горицвета весеннего качественных реакций не предусмотрено.

 роме того, —√ образуют нерастворимые комплексы с растворами дубильных веществ, что используетс€ при отравлени€х —√.

 

 оличественное определение —√ провод€т методом биологической стандартизации (√‘-’1, вып.2, с. 163-175).

ћетод основан на способности —√ вызывать в токсических дозах остановку сердца животных в стадию систолы. ¬ качестве подопытных животных используют л€гушек, голубей или кошек. „увствительность животных к сердечным гликозидам определ€ют в сравнении со стандартными индивидуальными веществами или экстрактами, которые вырабатывают в специальных научно-исследовательских институтах. јктивность выражают в единицах действи€ (≈ƒ), которые, в зависимости от вида животных обозначают:

Ћ≈ƒ - Ђл€гушачьиї ≈ƒ,  ≈ƒ - Ђкошачьиї ≈ƒ или √≈ƒ Ђголубиныеї ≈ƒ.

Ћ≈ƒ соответствует наименьшей дозе стандартного препарата, вызывающей остановку сердца стандартной л€гушки (самец трав€ной л€гушки массой 28-33 г). ¬ нормативной документации на лекарственное сырье и препараты, содержащих —√, об€зательно указываетс€ ¬јЋќ– (количество ≈ƒ в 1 г сырь€).

Ќедостатками метода биологической стандартизации €вл€ютс€ его трудоемкость, высока€ стоимость, больша€ ошибка опыта (до 25%).

ѕоэтому нормативна€ документаци€ на некоторые виды сырь€ и препараты требует определ€ть их количественное содержание физико-химическими методами (хроматофотоэлектроколориметрическим или хроматоспектрофотометрическим) методами. ќни основаны на предварительном хроматографическом разделении —√ с последующим фотоэлектроколориметрическим или спектрофотометрическим определением.

 

8. ћетоды анализа сырь€, содержащего простые фенольные соединени€.

 ачественный и количественный анализ сырь€ основан на физических и химических свойствах.

 ачественный анализ.

¬ключает качественные реакции и хроматографические пробы.

‘енольные соединени€ в виде гликозидов извлекают из растительного сырь€ водой, затем извлечени€ очищают от сопутствующих веществ, осажда€ их растворами ацетата свинца. — очищенным извлечением выполн€ют качественные реакции.

ѕростые фенолы и агликоны фенологликозидов дают

характерные дл€ фенольных соединений реакции:

с железоаммонийными квасцами

с сол€ми т€желых металлов

с диазотированными ароматическими аминами.

—пецифические реакции (√‘ ’1):

- на арбутин (сырье толокн€нки и брусники) используют цветные качественные реакции:

с кристаллическим сульфатом закисного железа.

–еакци€ основана на получении комплекса, измен€ющего окраску от сиреневого до темно≠го с дальнейшим образованием темно-фиолетового осадка.

с 10 % -ным раствором натри€ фосфорно-молибденовокислого в кислоте хлористоводородной.

–еакци€ основана на образовании комплексного соединени€ синего цвета.

на салидрозид (сырье родиолы розовой):

реакци€ азосочетани€ с диазотированным сульфацилом натри€ с образованием азокрасител€ вишнево-красного цвета.

 

салидрозид азокраситель

 

’роматографическое исследование

»спользуетс€ “—’ дл€ обнаружени€ простых фенольных соединений в сырье родиолы розовой (√‘ ’1, вып. 2, ст. 75, с. 364-366).

ѕроба основана на разделении веществ в тонком слое силикагел€ (пластинка Ђ—илуфолї) метанольного извлечени€ из сырь€ в системе растворителей хлороформ-метанол-вода (26:14:3) с последующим про€влением хроматограммы диазотированным сульфацилом натри€. ѕ€тно салидрозида с Rf = 0,42 окрашиваетс€ в красноватый цвет.

 

 

 оличественное определение.

 

ƒл€ количественного определени€ простых фенологликозидов в лекарственном растительном сырье используют различные методы: гравиметрические, титриметрические и физико-химические.

1. √равиметрическим методом определ€ют содержание флороглюцидов в корневищах папоротника мужского. ћетод основан на извлечении флороглюцидов из сырь€ диэтиловым эфиром в аппарате —окслета. »звлечение очищают, отгон€ют эфир, полученный сухой остаток высушивают и довод€т до посто€нной массы. ¬ пересчете на абсолютно сухое сырье содержание флороглюцидов не менее 1,8%.

2. “итриметрический йодометрический метод используетс€ дл€ определени€ содержани€ арбутина в сырье брусники и толокн€нки. ћетод основан на окислении агликона гидрохинона до хинона 0,1 ћ раствором йода в кислой среде и в присутствии натри€ гидрокарбоната.

¬ыдел€ют стадии определени€:

»звлечение арбутина из сырь€ водой

ќчистка водного извлечени€ основным ацетатом свинца

 ислотный гидролиз арбутина. √идролиз проводитс€ концентрированной серной кислотой в присутствии цинковой пыли, чтобы выделившийс€ свободный водород предотвращал собственное окисление гидрохинона.

“итрование 0,1 ћ раствором йода. ¬ качестве индикатора используют раствор крахмала.

 

3. —пектрофотометрический метод используетс€ дл€ определени€ содержани€ салидрозида в сырье родиолы розовой.

ћетод основан на способности окрашенного азокрасител€ поглощать монохроматический свет при длине волны 486 нм. —тадии определени€:

»звлечение салидрозида водой

ќчистка водного извлечени€ осаждением балластных веществ раствором ацетата свинца и натри€ сульфата

ѕолучение окрашенного азокрасител€ по реакции салидрозида с диазотированным сульфацилом натри€

ќпределение оптической плотности окрашенного раствора с помощью спектрофотометра при длине волны 486 нм

удельного показател€ поглощени€ √—ќ салидрозида ≈1%1см = 253.

—одержание салидрозида не менее 0,8 %.

 

9.  ачественное определение.

—пецифических реакций дл€ всех групп флавоноидов не существует.

„асто используют следующие качественные реакции и хроматографическое исследование:

1. ’арактерной реакцией на флавоноиды - ÷ианидинова€ проба или

проба —инода (проба Chinoda)(основана на восстановление их атомарным водородом в кислой среде в присутствии магни€ или цинка).

‘лавоноиды при восстановлении магнием или цинком в присутствии концентрированной хлористоводородной кислоты образуют красное окрашивание, обусловливаемое образованием антоцианидинов:

 

хроменол

 

цианидин хлорид

 

–еакци€ очень чувствительна, основана на восстановлении карбонильной группы и образовании антоцианида.

’алконы и ауроны при помощи цианидиновой реакции не обнаруживаютс€, но при добавлении конц. HCl (без магни€) образуют красное окрашивание за счет образовани€ оксониевых солей.

 

Ѕорно-лимонна€ реакци€ с реактивом ¬ильсона (по 0,5 г борной и лимонной кислот в метаноле).

–еакци€ отличи€ флавоноидов от фуранохромонов. ‘лавоноиды дают комплексы с борной кислотой желтой окраски с желто-зеленой флюоресценцией, которые не разрушаютс€ лимонной кислотой (образование батохромного комплекса):

 

3. –еакци€ с треххлористой сурьмой.

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодейству€ с треххлористой сурьмой, образуют комплексные соединени€, окрашенные в желтый или красный цвет:

 

 

— 2-5 %-ным спиртовым раствором AlCl3 желто-зеленое окрашивание говорит о наличии флавоноидов. ќбразуютс€ хелатные комплексы за счет водородных св€зей, возникающих между карбонильной и оксигруппой, желтого цвета с желто-зеленой флюоресценцией.

Ёта реакци€ приведена в √‘ ’1 изд. дл€ подтверждени€ подлинности сырь€

зверобо€, горца перечного и птичьего. јналогично образуютс€ комплексы с сол€ми циркони€.

–еакци€ с сол€ми железа (хлорид окисного железа), образуютс€ комплексные соединени€, окрашенные в черно-синий цвет, если флавоноиды триоксипроизводные и в зеленый, если диоксипроизводные.

–еакци€ с 1 %-ным раствором основного ацетата свинца.

јнтоцианидины дают синий аморфный осадок. ‘лавоны, халконы и ауроны Ц осадки €рко-желтого цвета.

–еакци€ с 10 %-ным раствором щелочи с образованием фенол€тов желтого цвета на флавоны и флавонолы. јнтоцианидины образуют со щелочами соли от синего до оливково-зеленого цвета.

–еакци€ азосочетани€ с диазосоединени€ми. ќбразуетс€ азокраситель оранжевого, красного или вишнево-красного цвета.

8. — 1 %-м раствором ванилина в конц. HCl образуют красно-малиновое окрашивание катехины (производные флороглюцина и резорцина).

 

4. — раствором аммиака, щелочи флавоны, флаваноны, флавонолы, флаванонолы дают желтое окрашивание, при нагревании переход€щее в оранжевое или красное;

халконы и ауроны тотчас же дают красное или пурпурное окрашивание.

„истые катехины окрашивани€ не дают, однако присутствие даже в небольшом количестве примесей (продуктов окислени€) вызывает по€вление желтой окраски.

јнтоцианы в присутствии аммиака или карбоната натри€ дают синее или фиолетовое окрашивание.

5. — 1 %-м раствором ванилина в конц. HCl образуют красно-малиновое окрашивание катехины (производные флороглюцина и резорцина).

6. ‘лавоны, халконы, ауроны, содержащие свободные орто-гидроксильные группировки в кольце ¬, при обработке спиртовых растворов средним ук-

суснокислым свинцом образуют осадки, окрашенные в €рко-желтый и красный цвета.

јнтоцианы образуют осадки, окрашенные как в красный, так и в синий цвета.

7. — 1-2 %-ным спиртовым раствором AlCl3 желто-зеленое окрашивание говорит о наличии флавоноидов.

— целью обнаружени€ флавоноидов в растительном материале широко

используетс€ хроматографи€ на бумаге и в тонком слое сорбента, колоночна€ хроматографи€.»спользуют различные системы растворителей:

Ѕ’ чаще всего Ѕ”¬ (бутанол-уксусна€ кислота- вода) 4:1:5; 4:1:2;

“—’ Ц хлороформ-метанол 8:3; 8:2.

ќбнаружение компонентов на хроматограмме осуществл€етс€ просматриванием их в ”‘ свете.

»дентифицируют флавоноиды по характерному свечению на хроматограммах в ”‘-свете и после про€влени€ хромогенными реактивами.

 атехины и лейкоантоцианиды не флюоресцируют. √ликозиды флавонов и изофлавонов флюоресцируют голубым или синим светом, флавонолов Ц темно-коричневым или черным, агликоны флавонов Ц коричневым, флавонолов Ц желтым, халконы и ауроны имеют желтую или оранжевую флюоресценцию.

ѕосле просматривани€ в ”‘ свете хроматограммы можно обработать одним из реактивов:

1) 5 %-ным спиртовым раствором AlCl3 c последующим нагреванием при 105 0— в течение 3-5 минут; (€рко-желта€ окраска п€тна в видимом свете и €ркую желто-зеленую флуоресценцию в ”‘ Цсвете);

2) с 5 %-ной SbCl3 в четыреххлористом углероде (реактив ћартини-Ѕеттоло); ∆елта€ или желто-оранжева€ окраска указывает на наличие флавонов, флавонолов, флаванонов и изофлавонов;красна€ или красно-фиолетова€ Ц халконов.

3) с 2 %-ным спиртовым раствором щелочи

4) при обработке п€тна парами аммиака усиливаетс€ голуба€ флуоресценци€ (изофлавоноиды)

что позвол€ет получить зоны с более €ркой флуоресценцией в ”‘ свете.

5) –еактив ¬ильсона (раствор борной и б\в лимонной кислоты в б\в метаноле)

6) –еакци€ азосочетани€ Ц на наличие 7-оксифлаванолов, 7-оксиизофлаванолов.

 

’роматографические методы анализа.

— целью обнаружени€ флавоноидов в растительном материале широко

используетс€ хроматографи€ на бумаге и в тонком слое сорбента.

ќбнаружение компонентов на хроматограмме осуществл€етс€ просматриванием их в ”‘ свете.

ѕри этом флавоны, флавонол-3-гликозиды, флаваноны, халконы и их 7-гликозиды Ц в виде желтых или желто-зеленых п€тен; флавонолы и их 7-гликозиды Ц в виде желтых или желто-зеленых п€тен; ксантоны в виде оранжевых п€тен.

»зофлавоны при этом не про€вл€ютс€.

ѕосле просматривани€ в ”‘ свете хроматограммы можно обработать одним из реактивов:

1) 5 %-ным спиртовым раствором AlCl3 c последующим нагреванием при 105 0— в течение 3-5 минут; (€рко-желта€ окраска п€тна в видимом свете и €ркую желто-зеленую флуоресценцию в ”‘ Цсвете);

2) с 5 %-ной SbCl3 в четыреххлористом углероде (реактив ћартини-Ѕеттоло); ∆елта€ или желто-оранжева€ окраска указывает на наличие флавонов, флавонолов, флаванонов и изофлавонов;красна€ или красно-фиолетова€ Ц халконов.

3) с 2 %-ным спиртовым раствором щелочи

4) при обработке п€тна парами аммиака усиливаетс€ голуба€ флуоресценци€ (изофлавоноиды)

что позвол€ет получить зоны с более €ркой флуоресценцией в ”‘ свете.

–еактив ¬ильсона (раствор борной и б\в лимонной кислоты в б\в метаноле)

5) –еакци€ азосочетани€ Ц на наличие 7-оксифлаванолов, 7-оксиизофлаванолов.

 

 оличественное определение.

¬ последние годы все большее распространение получают различные:

1. физико-химические методы анализа, которые имеют р€д существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметрическими и титрометрическими методами, а именно, быстрота и точность определени€, обнаружение даже незначительных количеств и, что особенно важно, возможность выделени€ отдельных флавоноидов из растительного сырь€.

  таким методам относ€тс€ фотоэлектроколориметри€, спектрофотометри€, денситометри€ с использованием хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента.

1. —ущность хроматоденситометрического метода заключаетс€ в выделении и разделении флавоноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме.

ћетод имеет преимущества в быстроте проведени€ анализа и точности определени€, так как в данном случае исключаетс€ стади€ элюировани€.

2. фотоэлектроколориметрический метод, основанный на измерении оптической плотности окрашенных растворов, полученных в цветных реакци€х флавоноидов с сол€ми различных металлов (алюмини€, циркони€, титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции восстановлени€ цинком или магнием в кислой среде, в реакции азосочетани€ с сол€ми диазони€.

√‘ ’1 издани€ дает ‘Ё -метод дл€ определени€ содержани€ суммы флавоноидов в листь€х вахты трехлистной. ѕредварительно сырье очищают от хлорофилла хлороформом, получают спиртовое извлечение флавоноидов, затем измер€ют оптическую плотность окрашенного раствора с помощью фотоэлектроколориметра. —одержание суммы флавоноидов рассчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартному образцу рутина.

»звестна цветна€ реакци€ флавоноидов с азотнокислым и уксуснокислым уранилом, позвол€юща€ количественно определ€ть рутин в смеси с кверцитином.

¬ насто€щее врем€ широко используетс€ метод спектрофотометричекий.

 

3. —пектрофотометрический метод (—‘ћ)

—‘ћ основан на способности флавоноидов или их окрашенных комплексов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны.

ѕолучают спиртовое извлечение и измер€ют собственное поглощение в:

цветках бессмертника песчаного при длине волны 315 нм, рассчитывают содержание флавоноидов на изосалипурозид с использованием оптической плотности √—ќ изосалипурозида;

корн€х стальника при длине волны 260 нм; рассчитывают на ононина;

цветках пижмы измер€ют оптическую плотность флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в буферном растворе и пересчитывают на лютеолин с учетом оптической плотности √—ќ лютеолина;

ѕолучают спиртовое извлечение, затем провод€т реакцию образовани€ комплекса с 2 %-ным раствором алюмини€ хлорида и измер€ют оптическую плотность в:

траве зверобо€ в пересчете на рутин с учетом оптической плотности √—ќ рутина;

траве горца перечного в пересчете на кверцетин с учетом удельного показател€ поглощени€ комплекса кверцетина с алюмини€ хлоридом;

траве горца птичьего в пересчете на авикул€рин с учетом удельного показател€ поглощени€ комплекса авикул€рина с алюмини€ хлоридом.

3) ѕолучают извлечение антоцианов 1 %-ным раствором хлористоводородной кислоты из цветков василька синего, при этом образуютс€ окрашенные оксониевые соли, у которых измер€ют оптическую плотность и пересчитывают на 3,5 дигликозид цианидина (цианин) с учетом удельного показател€ поглощени€ цианина в 1 %-ном растворе хлористоводородной кислоты.

’роматоспектрофотометрический метод.

1. ѕредварительное разделение флавоноидов в тонком слое сорбента (цветки бо€рышника). —тадии определени€:

- получение спиртового извлечени€;

очистка извлечени€;

хроматографическое разделение флавоноидов на пластинке Ђ—илуфолї в системе растворителей хлороформ-метанол 8:2 вместе со свидетелем √—ќ гиперозида;

- идентификаци€ гиперозида и свидетел€ на пластинках в ”‘-свете;

- элюирование гиперозида и √—ќ смесью диоксана и воды 1:1;

- измерение оптической плотности испытуемого раствора и √—ќ при длине 565 им;

расчет содержани€ гиперозида.

ѕредварительное разделение на колонке с полиамидом (плоды бо€рышника)

—тадии определени€:

- получают спиртовое извлечение;

отгон€ют спирт и обрабатывают остаток 10%-ным раствором натри€ хлорида;

полученный раствор нанос€т на колонку с полиамидом;

- элюируют флавоноиды с колонки 95%-ным этанолом, собирают окрашенный в желтый цвет элюат в мерную колбу на 25 мл;

- измер€ют оптическую плотность элюата при длине волны 365 нм;

- параллельно измер€ют оптическую плотность элюата √—ќ гиперозида, полученного аналогично элюату флавоноидов;

- пересчитывают на гиперозид с учетом оптической плотности элюата √—ќ

гиперозида.

3. ¬ траве сушеницы топ€ной выдел€ют следующие стадии количественного определени€:

- получают спиртовое извлечение;

отгон€ют спирт и остаток обрабатывают 10%-ным раствором натри€ хлорида;

полученный раствор перенос€т на колонку с полиамидом;

- элюируют флавоноиды с колонки 95%-ным этанолом и собирают окрашенный в темно-желтый цвет элюат в мерную колбу на 50 мл;

- измер€ют оптическую плотность элюата при длине волны 338 нм;

- параллельно определ€ют оптическую плотность раствора стандартного вещества сравнени€ (—ќ¬—) кали€ бихромата;

- пересчитывают на гнафалозид ј с учетом оптической плотности —ќ¬— и

коэффициента пересчета кали€ бихромата на гнафалозид ј и поправочного

коэффициента на неполное элюирование гнафалозида ј с полиамидного сорбента.

4.  оличественное содержание ксантонов в траве золототыс€чника:

- получают извлечение подкисленным 60%-ным этанолом;

2 мл извлечени€ нанос€т на колонку с полиамидным сорбентом;

- элюируют ксантоны 95%-м этанолом и собирают окрашенный в желтый цвет элюат в мерную колбу на 50 мл;

- получают окрашенный комплекс с алюмини€ хлоридом;

- измер€ют оптическую плотность окрашенного комплекса;

- параллельно измер€ют оптическую плотность окрашенного комплекса √—ќ алпизарина с алюмини€ хлоридом;

- пересчитывают на алпизарин с учетом оптической плотности комплекса √—ќ алпизарина с алюмини€ хлоридом.

 

 оличественное определение.

¬ последние годы все большее распространение получают различные:

1. физико-химические методы анализа, которые имеют р€д существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметрическими и титрометрическими методами, а именно, быстрота и точность определени€, обнаружение даже незначительных количеств и, что особенно важно, возможность выделени€ отдельных флавоноидов из растительного сырь€.

  таким методам относ€тс€ фотоэлектроколориметри€, спектрофотометри€, денситометри€ с использованием хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента.

—ущность хроматоденситометрического метода заключаетс€ в выделении и разделении флавоноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме.

ћетод имеет преимущества в быстроте проведени€ анализа и точности определени€, так как в данном случае исключаетс€ стади€ элюировани€.

»спользуетс€ фотоколориметрический метод, основанный на измерении оптической плотности окрашенных растворов, полученных в цветных реакци€х флавоноидов с сол€ми различных металлов (алюмини€, циркони€, титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции восстановлени€ цинком или магнием в кислой среде.

»звестна цветна€ реакци€ флавоноидов с азотнокислым и уксуснокислым уранилом, позвол€юща€ количественно определ€ть рутин в смеси с кверцитином.

¬ насто€щее врем€ широко используетс€ метод спектрофотометричекий.

 

10. ћетоды анализа кумаринов

ƒл€ обнаружени€ кумаринов в растительном сырье провод€т качественные реакции и хроматографическое исследование, использу€ лактонные свойства кумаринов:

- вступать в реакцию разрыва лактонного кольца (лактонна€ проба);

- давать окрашенные растворы с диазосоединени€ми;

- флуоресцировать в ”‘-свете.

 ачественный анализ

1. Ћактонна€ проба (предложена √.ј. узнецовой). ѕараллельно провод€т контрольный опыт.

ћетодика: 1 мл извлечени€, содержащего кумарины, наливают в две пробирки.

¬ одну добавл€ют 0,5 мл 10%-ного раствора натри€ гидроксида.

ќбе пробирки нагревают на вод€ной бане, затем в обе прибавл€ют 4 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают.

≈сли в пробирке, куда добавл€ли щелочь, раствор осталс€ желтым и прозрачным, значит, реакци€ положительна€, так как образуетс€ желта€ растворима€ в воде соль кумаровой кислоты.

¬ контрольной пробирке при добавлении воды раствор мутнеет, кумарины не раствор€ютс€ в воде и выпадают в осадок.

ѕри подкислении щелочного раствора лактонное кольцо замыкаетс€ и кумарины выпадают в осадок.

 

 

2. –еакци€ образовани€ азокрасител€. –еакци€ проводитс€ с продуктами, полученными после реакции разрыва лактонного кольца.

ћетодика: ¬ пробирку добавл€ют 1 мл свежеприготовленного диазореактива. „аще всего, в качестве диазореактива используют диазосульфаниловую кислоту. ќбразуетс€ азокраситель от желтого до вишнево-красного цвета.

 

ƒл€ идентификации кумаринов используют методы бумажной и тонкослойной хроматографии. ѕри этом используют системы растворителей:

- н-бутанол-уксусна€ кислота-вода Ѕ”¬ (4:1:5)

- н-гексан-бензол-метанол (5:4:1);

- петролейный эфир-бензол-метанол (5:4:1);

»дентифицируют кумарины по характерной флюоресценции в ”‘ свете или про€вл€ют хромогенными реактивами.

¬ качестве про€вл€ющих реактивов служат 1%-ный спиртовый раствор алюмини€ хлорида, 10%-ный раствор щелочи или пары аммиака.

Ўирокие возможности дл€ обнаружени€ в растени€х и сырье кумаринов, не только их суммы, но и отдельных соединений, открылись после внедрени€ хроматографического анализа. ѕри этом указанные реактивы используют и дл€ обработки хроматограмм.

4. ’роматографические методы удобны дл€ выделени€ индивидуальных кумаринов.

 оличественное определение.

ƒл€ количественного определени€ кумаринов в лекарственном –— используют гравиметрические, титриметрические и физико- химические методы анализа.

ѕо существующей нормативной документации дл€ количественного определени€ кумаринов в лекарственном растительного сырье используют физико-химические методы анализа.

1. ѕол€рографический метод. ќпределение кумаринов в плодах пастернака.

ќснован на восстановлении кумаринов на ртутно-капельном электроде в альфа-пироновом кольце по месту двойной св€зи в положении 3,4. ѕрисоедин€ют галоген - йод, в качестве реактива используют тетраэтиламмоний йодид. —одержание комариное в пересчете на ксантотоксин не менее 1%.

—пектрофотометрический метод. ќснован на способности кумаринов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны в зависимости от концентрации исследуемого раствора. »спользуют

дл€ определени€ содержани€ простых кумаринов в траве донника лекарственного (не менее 0.4%) и пиранокумаринов в корневищах и корн€х вздутоплодника сибирского (не менее 3 %). ѕолучают хлороформное извлечение из сырь€ и измер€ют у него оптическую плотность с помощью спектрофотометра.

3. ’роматоспектрофотометрический метод. ѕримен€ют дл€ определени€ содержани€ фуранокумаринов в плодах амми большой, псоралеи кост€нковой, листь€х инжира.

—тадии определени€:

1. ѕолучение хлороформного извлечени€ из сырь€.

2. –азделение суммы кумаринов методом хроматографии на бумаге в системе растворителей, указанной в нормативной документации.

3. »дентификаци€ кумаринов в ”‘-свете по характерному свечению.

4. Ёлюирование веществ с бумаги.  аждое вещество отдельно элюируют 95 %-ным этанолом.

5. »змерение оптической плотности растворов с помощью спектрофотометра при длине волны, указанной в нормативной документации.

6. –асчет содержание каждого соединени€ с учетом удельного показател€ поглощени€.

ѕлоды амми большой: бергаптена и изопимпинеллина не менее 0,6 %.

ѕлоды псоралеи кост€нковой: псоралена и изопсоралена не менее 0,9 %.

Ћисть€ инжира: псоралена и бергаптена не менее 0,7%, отдельно псоралена менее 0,42 %.

4. √равиметрический (весовой) метод.

ќснован на избирательной растворимости отдельных кумаринов в различных растворител€х и способности лактонного кольца кумарина к раскрытию и обратному замыканию в зависимости от рЌ среды.

»спользуетс€ редкотолько дл€ определени€ суммы кумаринов.

5. ‘отоэпектроколориметрический метод.

ќснован на измерении оптической плотности окрашенного раствора, полученного по реакции азосочетани€ с сол€ми диазони€ при определенной длине волны.

—одержание суммы кумаринов рассчитывают по калибровочному графику, построенному по известному веществу.

 

јлкалоиды - –азличают

общие качественные реакции, с помощью которых доказываетс€ присутствие алкалоидов в сырье или в извлечении из сырь€, и

частные качественные реакции, с помощью которых доказывают или индивидуальный алкалоид или определенную группу алкалоидов.

ќбщие реакции Ц

это либо реакции осаждени€, либо реакции окрашивани€.

–еакции осаждени€ основаны на способности алкалоидов к комплексообразованию. ќбразующиес€ комплексы нерастворимы или мало растворимы в воде.

ќбщеалкалоидные осадочные реактивы можно разделить на несколько групп:

1 группа. …од и его растворы.

ќбразуют с алкалоидами перйодиды, плохо растворимые в воде:

1) пары йода используют дл€ открыти€ алкалоидов на хроматограммах;

2) раствор йода в KJ (реактив ¬агнера, реактив Ѕушарда).

— алкалоидами образуют бурые, трудно растворимые в воде осадки.

 

2 группа.  омплексные йодиды металлов:

–еактив ƒрагендорфа - кали€ тетрайодовисмутат (KBiJ4) - образует оранжевые или красно-бурые нерастворимые осадки.

–еакцию с реактивом ƒрагендорфа, согласно действующей Ќƒ, используют дл€ обнаружени€ (про€влени€) алкалоидов крестовника плосколи стного на хроматограмме.

2) –еактив ћайера - тетрайодомеркурат кали€ (K2HgJ4) - образует осадки белого или желтоватого цвета.

–еакцию с реактивом ћайера широко используют дл€ проверки полноты экстракции алкалоидов при их количественном определении в сырье красавки обыкновенной, белены черной, дурмана обыкновенного, анабазиса безлистного.

3 группа. –еакгивы комплексных неорганических кислот (высокомолекул€рные органические вещества кислого характера):

1) –еактив Ѕертрана - раствор кремневольфрамовой кислоты

(SiO2. 12 WO3 . 4 H2O) - образует белый аморфный осадок. –еакцию с реактивом Ѕер трана используют:

- дл€ подтверждени€ наличи€ алкалоидов в извлечении из листа барба≠риса и травы пассифлоры (качественные реакции);

дл€ проверки полноты экстракции алкалоидов при их количественном определении в траве плауна-баранца и чистотела, листь€х и корн€х барбариса;

2) реактив Ўейблера - раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты (Ќз–ќ4.12 Wќ3. 2Ќ2ќ) - образует белые аморфные осадки;

3) реактив «оненштейна - раствор фосфорно-молибденовой кислоты (Ќз–ќ4 Х 12ћоќз 2Ќ2ќ) - образует желтоватые аморфные осадки.

¬се эти реактивы высокочувствительны и часто используютс€ в исследовательских работах.

4 группа. ќрганические вещества кислотного характера:

1) раствор пикриновой кислоты - дает осадки желтого цвета.

–еакцию используют дл€ осаждени€ алкалоида скополамина при его гравиметрическом определении в семенах дурмана индейского;

2) раствор танина - образует беловатые или бурые осадки.

“анин используют в качестве противо€ди€ при отравлении алкалоидами. “анин блокирует поступление и всасывание алкалоидов.

 

–еакции окрашивани€ (частные реакции)

основаны на окислении, конденсации, дегидратации алкалоидов концентрированными кислотами и другими окислител€ми.

»спользуют:

конц. H2SO4 - качественна€ реакци€ на корень барбариса (берберин) получаетс€ оранжево-красное окрашивание,

и на наличие алкалоидов в очищенном извлечении (сухой остаток) из корневищ с корн€ми чемерицы Ц образуетс€ бурое окрашивание;

2) конц.HNO3 - качественна€ реакци€ на корень барбариса (берберин) - красно-бурое окрашивание;

3) раствор H2O2 - качественна€ реакци€ на корень барбариса (берберин) - фиолетовое окрашивание;

4) раствор K2Cr2O7 и конц.H2SO4 - качественна€ реакци€ на стрихнин - красно-фиолетовое окрашивание;

5) раствор K2Cr2O7 и конц.ЌNO3 - качественна€ реакци€ на бруцин - оранжево-красное окрашивание.

ƒве последние реакции на наличие алкалоидов в очищенном извлечении из сем€н чилибухи.

6) реакци€ на алкалоиды спорыньи - алкалоиды перевод€т в соли винной кислоты и добавл€ют реактив ¬ан-”рка (конц.H2SO4 + FeCl3 + п-диметиламинобензальдегид) Ц образуетс€ фиолетовое окрашивание.

Ёту реакцию используют дл€ подтверждени€ подлинности сырь€, а также в методе количественного определени€ алкалоидов.

 

¬ анализе могут быть использованы:

- реактив Ёрдмана - смесь конц.HNќз и конц.Ќ2SO4;

- реактив ћарки - раствор формалина в конц. H2SO4;

- реактив ‘реде - раствор молибдата натри€ в конц. H2SO4.

ќкраска в зависимости от алкалоидов различна.

ƒл€ некоторых алкалоидов существуют групповые качественные реакции, такие как: Ђреакци€ ¬итали-ћоренаї (тропановые алкалоиды),

Ђмурексидна€ пробаї (на пуриновые алкалоиды),

метил- 1,3-диметилаллоксан

мочевина

1,3-диметилалурова€ тетраметилаллоксантин

кислота

аммонийна€ соль тетраметилпурпуровой кислоты

Ёта реакци€ основана на разрушении молекулы пурина при нагревании с окислителем (перекисью водорода, бромной водой, азотной кислотой). ѕроисходит образование смеси производных аллоксана и его изомера диалуровой кислоты. ¬заимодейству€ между собой, они образую метилированные производные аллоксантина, которые под действием избытка раствора аммиака приобретают пурпурно-красное окрашивание. ќкраска обусловлена по€влением аммонийной соли метилированного производного пурпуровой кислоты.

“аким образом, общей специфической качественной реакции на алкалоиды не существует.

≈сли провод€т поиск алкалоидсодержащих растений, то всегда выполн€ют 5-10 реакций с общеалкалоидными реактивами, т.к. чувствительность реакций различна. ќбычно эти реакции выполн€ют капельным способом на стекл€нных пластинках.

ƒл€ выделени€ или разделени€ суммы алкалоидов пользуютс€ методом хроматографии на бумаге.

ƒл€ обнаружени€ алкалоидов достаточно нанести на полоску фильтровальной бумаги каплю испытуемого раствора и "про€вить" соответствующим реактивом.

 оличественное определение алкалоидов

≈диной методики количественного определени€ содержани€ алкалоидов в растительном сырье не существует, т.к.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-01-29; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 4280 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

∆изнь - это то, что с тобой происходит, пока ты строишь планы. © ƒжон Ћеннон
==> читать все изречени€...

470 - | 391 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.416 с.