I. МОТИВАЦИЯ ЦЕЛИ: Развитие клинической иммуногенетики первоначально происходило в связи с развитием трансплантологии. Однако, по мере накопления данных стало очевидным, что учение о HLA-системе выходит далеко за пределы интересов трансплантологии. Главный комплекс гистосовместимости инициирует процессы клеточного распознавания, определяет предрасположенность к заболеваниям, является «хранителем» гена иммунного ответа, осуществляет коррекцию гомеостаза. Все это определяет актуальность изучения строения HLA и ее биологических функций в норме и при патологии.
II. ЦЕЛЬ САМОПОДГОТОВКИ: после самостоятельного изучения темы студент должен знать строение HLA-системы, ее биологические функции, роль в иммунных реакциях, связи антигенов HLA с развитием патологических процессов.
III. БАЗИСНЫЕ РАЗДЕЛЫ ДЛЯ ПОВТОРЕНИЯ: к практическому занятию студент должен повторить:
" Биология ", под редакцией В.Н. Ярыгина, гл. 5.2, 5.3 - "Наследственность", "Изменчивость", с. 74 – 149.
IV. ПЛАН ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:
1) Понятие системы гистосовместимости.
2) Определение понятий генов и антигенов гистосовместимости.
3) Строение HLA-системы:
- полиморфизм антигенов;
- классы генов HLA, их характеристика;
- строение антигенов HLA.
4) Характеристика генов 1 класса.
5) Антигены HLA 1 класса, локализация, биологическая функция, роль в иммунных реакциях.
6) Характеристика генов 2 класса.
7) Антигены 2 класса, локализация, биологическая роль, значение в иммунном ответе.
8) Характеристика генов и антигенов 3 класса.
9) Ассоциация HLA с риском развития некоторых заболеваний.
10) Методы идентификации антигенов HLA.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:
После разбора теоретических вопросов темы, студенты самостоятельно
решают ситуационные и проблемные задачи.
Рекомендуемая литература по теме занятия:
Основная:
1) А.А. Ярилин «Основы иммунологии», учебник для студентов медвузов, 1999 г.;
2) Р.В. Петров «Иммунология», учебник для студентов медвузов 1987 г.;
3) Д.К. Новиков «Медицинская иммунология», 1998 г., разд. 4, с. 62 – 65.
4) Лекция.
Дополнительная:
5) В.Г. Галактионов «Иммунология», 1998 г., гл. 3, 10;
6) А.Ройт «Основы иммунологии», 1991 г., гл. 8, 9;
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ:
1) Иммуногенетика как наука.
2) Определение ГКГС.
3) Определение генов и антигенов ГКГС.
4) Расскажите о строении системы HLA.
5) Охарактеризуйте понятие полиморфизма антигенов HLA.
6) Охарактеризуйте гены 1 класса.
7) На каких клетках присутствуют антигены 1 класса, их биологическая роль.
8) Охарактеризуйте гены 2 класса.
9) Назовите локализацию антигенов 2 класса и их биологическую роль.
10) Какова роль антигенов 1 и 2 классов в иммунном ответе?
11) В чем отличие строения антигенов МНС 1 и 2 классов?
12) Охарактеризуйте гены 3 класса и кодируемые ими антигены.
13) Какова роль системы HLA в трансплантационном иммунитете.
14) Перечислите основные гипотезы, объясняющие связь антигенов HLA с развитием некоторых патологических состояний.
15) Назовите и кратко охарактеризуйте методы идентификации антигенов HLA.
16) Каково диагностическое значение типирования антигенов HLA?
17) Каковы перспективы развития иммуногенетики?
ОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ЗАДАНИЯ:
1) Нарисуйте схему строения ГКГС.
2) Нарисуйте схему строения антигенов HLA 1 и 2 классов.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Табл. 7.Заболевания,ассоциациированные с HLA
| Заболевания с высокой степенью ассоциации с HLA | Класс HLA | Специфичность | Относительный риск |
| Анкилозирующий спондилит (болезнь Бехтерева) Болезнь Рейтера Подострый аутоимунный тиреоидит Герпитиморфный дерматид Селективный дерматид IgA Вульгарная пузырчатка Аутоимунный увеит Инсулинзависимый сахарный диабет Бактериальные артриты Хронический аутоимунный гепатит Псориаз Синдром Гудпасчера Идиопатический мембранозный гломерулонефрит Целиакия | I I I II II II I II I II I I II II | B27 B27 B36 DR3 DR3 DR4 B27 DR3/4 B27 DR3 DR2 DR3 DR3 | O – 207,9 K – 91,0 H – 54,4 37,6 18,9 17,3 17,0 14,6 14,6 14,3 14 – 30 13,9 13,3 13,1 12,0 11,6 |
 |
Рис. 17. Строение системы HLA (Медуницин Н.В., Алексеев А.Л., 1987)
Рис. 18. Строение МНС I И II классов
ЛИТЕРАТУРА
ОСНОВНАЯ:
В.Г. Галактионов «Иммунология», 1998 г
Р.В. Петров. – Иммунология, учебник для медвузов. - Медицина 1987 г.
В.И. Пыцкий, Н.В. Андрианова. - Аллергические заболевания. - М., Ме-
дицина, 1990 г.
А. Ройт. - Основы иммунологии.- М. - 1991 г.
В.С. Федосеева с соавт. - Руководство по иммунологическим и аллерго-
логическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993 г.
А.А. Ярилин. - Основы иммунологии, учебник для студентов медвузов, 1999 г.;
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ:
1. В.Г. Галактионов. - Графические модели в иммунологии. Медицина 2001 г.
2. В.Г. Галактионов. - Иммунология, 1998 г.
3. Г. Н. Дранник. - Иммунотропные препараты. Киев, 1994 г.
4. Иммунология (под. ред. Пола У.). - т.1,2,3, Мир 1987 г.
5. Л. Йегер Клиническая иммунология и аллергология. - т 1,2,3. Медицина.- 1990 г.
6. С.А. Кетлинский. - Эндогенные иммуномодуляторы, 1992 г.
7. Клиническая ревматология (под ред. КАРРЕЯ). - М, 1990 г.
8. Клиническая иммунология и аллергология (под ред. Г. Лолора, Т. Фишера). – М.,
2000 г.
9. Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская и др. «Система цитокинов», пособие для студентов, М., 1999 г.
10. А.С. Логинов. - Иммунная система и болезни органов пищеварения.
Медицина 1985 г.
11. М.С. Ломакин. - Иммунобиологический надзор. М, 1990 г.
12. Д.Н. Маянский. - Хроническое воспаление. М. 1991 г.
13. Д.К. Новиков «Медицинская иммунология», 1998 г.
14. Д.К. Новиков «Оценка иммунного статуса», 1998 г.
МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА
МЕТОДИКА ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ ФИКОЛЛ-ВЕРОГРАФИН
Кровь из периферической вены в объеме 5 мл забирается в чистые сухие центрифужные пробирки содержащие 3 мг среды 199 или среды Хенкса и гепарин в конечной концентрации 20 ЕД/мл. Содержимое пробирки тщательно перемешивается, после чего подслаивается фиколл-верографин в объеме 2 мл (1/4 общего объёма) плотностью 1,077 – 1,078 г/мл.
Пробирки центрифугируют при 1500 об./мин. 30 мин. после чего мононуклеары образующие беловатое кольцо над разделяющим раствором, отсасывают и трижды отмывают раствором Хенкса, центрифугируя 1 раз 25 мин. при 1500 об./мин., второй и третий разы по 10 мин. - при 1000 об./мин.
Как правило, доля лимфоцитов в полученной взвеси клеток составляет около 90%
Определение поверхностных антигенов лимфоцитов CD (табл.) широко применяется в диагностике иммунодефицитов, аутоиммунных, аллергических и других заболеваний, обусловленных нарушением иммунитета, а также для контроля за приживлением трансплантата и эффективностью иммунотерапии. В настоящее время для определения поверхностных антигенов лимфоцитов применяются моноклональные антитела.
Моноклональные антитела вырабатываются гибридомами, которые образуются при слиянии миеломных клеток с нормальными плазматическими клетками. Для фенотипирования лимфоцитов человека используют мышиные моноклональные антитела. Моноклональные антитела используются не только для выявления разных типов клеток, но и для изучения процессов дифференцировки, созревания, межклеточного взаимодействия и активации лимфоцитов. Определение поверхностных антигенов лимфоцитовпроводятв иммунопероксидазном (с использованием светового микроскопа) или иммунофлюоресцентном (с использованием люминесцентного микроскопа или проточного цитофлюориметра) тестах.В случае использования флюоресцентного метода антитела метят флюоресцеина изотиоцианатом или фикоэритрином. Оба вещества флюоресцируют под действием света с длиной волны 488 нм, при этом флюоресцеина изотиоцианат излучает зеленый, а фикоэритрин — оранжевый свет. Флюорохром — перидинин также флюоресцирует под действием света с длиной волны 488 нм, но излучает красный свет. Использование трех флюорохромов, поглощающих возбуждающий свет одной длины волны, позволяет одновременно определять три разных поверхностных антигена.
Проточный цитофлюориметр — прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки: размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Проточная цитофлюори-метрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла.
Исследование молекул адгезии. О пределяют экспрессию поверхностных антигенов CDlla/CD18, CDllb/CD18 и CD11 c/CDl8 с помощью проточной цитофлюориметрии и моноклональных антител к CDlla, CDllb, CDllc и CD18. При иммунодефицитах, обусловленных нарушением адгезии лейкоцитов, наблюдается снижение экспрессии этих антигенов как на покоящихся, так и на активированных нейтрофилах.
