Регистрационный № по списку Интернационального центра по шигеллам в Лондоне
S. sonnei
1A
S. sonnei
2
100031
S. sonnei
1B
S. sonnei
56
100032
S. sonnei
2
S. sonnei
17
100033
S. sonnei
3
S. sonnei
2M
100034
S. sonnei
3A
S. sonnei
38
100035
S. sonnei
4
S. sonnei
56/56
100036
S. sonnei
5
S. sonnei
56/98
100037
S. sonnei
6
S. sonnei
R 1
100038
S. sonnei
7
S. sonnei
R 6
100039
S. sonnei
8
S. dysenteriae 2
M 19
CTC8218
S. sonnei
9
S. sonnei
2/7
100040
S. sonnei
10
S. sonnei
2/64
100041
S. sonnei
11
S. sonnei
2/15
100042
S. sonnei
12
S. sonnei
R5
100043
S. sonnei
13
E. coli K-12
ROW
100044
S. sonnei
14
S. sonnei
15
Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону
Индикаторные культуры
2
56
17
2M
38
56/56
56/98
R 1
R 6
M 19
2/7
2/64
2/15
R5
ROW
1A
+
+
+
-
-
+
+
-
-
+
-
-
-
-
+
1B
+
+
+
-
-
+
+
-
+
+
-
-
-
-
+
2
-
+
+
-
-
-
-
-
+
-
-
-
-
-
+
3
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
3A
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
4
+
+
+
V
+
-
-
+
+
-
+
+
+
-
+
5
+
+
+
V
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
6
-
+
-
-
-
+
+
-
+
-
-
-
-
-
+
7
-
-
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
8
+
-
+
-
+
-
-
+
-
-
-
-
+
-
+
9
+
+
+
-
V
+
+
+
+
-
-
-
+
-
+
10
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
-
-
+
-
+
11
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
+
12
+
+
-
-
+
+
+
+
+
-
-
-
+
-
+
13
-
+
+
-
-
+
+
-
+
-
-
-
-
-
+
14
+
+
+
V
+
+
+
+
+
-
+
+
+
-
+
15
+
-
+
+
+
-
-
+
-
-
+
+
+
+
+
Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов; - отсутствие зоны торможения; V – вариабельные результаты.
Методика колицинотипирования при помощи колициногенных штаммов
Определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам проводят при помощи эталонных колициногенных штаммов Фредерика:
Наименование штамма
Тип продуцируемого колицина
E. coli
Ca-18
B
E. coli
Ca-23
D
E. coli
Ca-38
E + I
E. coli
Ca-42
F
E. coli
Ca-46
G
E. coli
Ca-53
I
E. coli
Ca-62
J + I
E. coli
Ca-235
K
E. coli
Ca-7
V
E. freundii
Ca-31
A
S. boydii
p-1
S1
S. dispar
p-15
S4
S. dispar
p-14
S5
S. sonnei
p-9
S3 + 1
Колицинотипирование, т.е. определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам, определяют следующим образом.
Свежие эталонные колициногенные штаммы Фредерика, выросшие на среде Ресселя, сеют уколом петли в соответствующие квадраты чашки с 1,5%-ным МПА, подкрашенным генцианвиолетом, и инкубируют при 37ºC в течение 24 часов. Выросшие колонии бактерии убивают парами хлороформа, и поверхность агара заливают 2,5 мл расплавленного 0,7%-ного МПА, содержащего 2 капли 6-часовой испытуемой бульонной культуры шигелл Зонне. После 20-часового роста при 37°C производят учет результатов опыта. При наличии чувствительности к колицинам испытуемого штамма бактерии Зонне вокруг колоний колициногенных культур образуются зоны задержки роста подобно зонам задержки роста вокруг дисков с антибиотиками. Культура считается чувствительной к колицину, если ширина задержки роста бактерий более 2 мм.
Результаты регистрируют плюсами: + - зона задержки 2 мм; ++ - зона задержки 2-5 мм; +++ - зона задержки 5-10 мм; ++++ - зона задержки более 10 мм.
Б. Вирулентность дизентерийных бактерий обусловлена наличием у них факторов адгезии и колонизации, инвазии. (Эти факторы патогенности контролируются главным образом плазмидами). Кроме того, шигеллы способны вырабатывать 2 типа экзотоксинов: цитотонины (термолабильный и термостабильный) и цитотоксины (способностью вырабатывать цитотоксины шигеллу наделяют конвертирующие умеренные фаги).
Патогенность шигелл определяется с помощью кератоконъюнктивальной пробы на морской свинке.
В.Факторы патогенности диареегенных E. coli
Факторы
Международное название
Полное
Символы
Термостабильный энтеротоксин
Heat-stable enterotoxin
ST
Термолабильный энтеротоксин
Heat-labile enterotoxin
LT
Цитотоксины:
Cytotoxin
Shiga-Like toxin
CT
SLT
Шигаподобный токсин
Vero - токсин
Verotoxin
VT
Инвазивность٭
Invasiveness
-
Факторы колонизации٭
Colonization factor
CF
Фактор адгезии энтеропатогенных E. coli к клеткам Hep-2
Enteropathogenic E. coli adherence factor to Hep-2 cells
EAF
Адгезия к клеткам Henle-407
Adhesion to Henle-407 cells
AdhesionHenle-407
٭ - имеются в виду CFA/I, CFA/II, CFA/III, CFA/IV.
1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств холерного и холероподобных вибрионов.
2. Бактериологическое исследование испражнений холерного больного (разбор схемы).
3. Ускоренная диагностика холеры (демонстрация).
4. Исследование воды на наличие холерного вибриона (разбор методики).
5. Изучение иммунопрепаратов, применяемых для профилактики, лечения и диагностики заболеваний, вызываемых бактериями кишечной группы, и холеры. Демонстрация и разбор.
6. Правила взятия и пересылки материала при исследовании на кишечную группу микробов. Особенности взятия и пересылки материала при подозрении на холеру. Разбор методов.
7. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (окончание). Регистрация результатов посева на среды «пестрого ряда», МПА, среду Пешкова. Окончательная идентификация возбудителя по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле.
Методические указания
1. Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда".
Вибрион Vibriocholerae
Окраска по Граму
Мазок из испражнений "холерного"
больного. Окраска по Граму
Культура из пленки
на пептонной воде.
Окраска по Граму
Культура возбудителя кишечной
инфекции на скошенном МПА.
Окраска по Граму
2. Одну петлю испражнений засевают на пептонную воду в пробирке, другую петлю испражнений засевают на пластинку щелочного МПА так, чтобы получить изолированные колонии. Находят на щелочном МПА колонии, подозрительные на колонии холерного вибриона (прозрачные с серо-голубым оттенком), готовят из них препараты-мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Проверяют подвижность в препарате «висячая капля». На сахарных средах определяют группу по Хейбергу, дифференцируют биовар. Ставят реакцию агглютинации на стекле вывыделенной культуры с холерной О-сывороткой и типовыми сыворотками Огава и Инаба. Проверяют холерогенность выделенной культуры.
1. Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда".
