Е. Биохимическая характеристика вибрионов по Хейбергу, Смиту и Гуднеру

Углеводы	Группы
	1	2	3	4	5	6	7	8
Манноза	+	-	+	-	+	-	+	-
Арабиноза	-	-	+	+	-	-	+	+
Сахароза	+	+	+	+	-	-	-	-

 

Ж. Определение холерогенности (энтеротоксигенности) V. cholerae

Косвенные признаки отсутствия холерогенности у вибриона:

1. наличие гемолитической активности,

2. отсутствие больных холерой;

3. отрицательные пробы с холерными диагностическими фагами (ХДФ-3, ХДФ-4, ХДФ-5).

Прямые методы обнаружения холерогена:

1. стимуляция клеточной аденилатциклазы в культурах клеток;

2. биологические пробы (на крольчатах-сосунках или на лигированной петле тонкого кишечника кролика);

3. реакция пассивного иммунного гемолиза (холероген взаимодействует с ганглиозидом эритроцитов, добавление антитоксинов и комплемента приводит к гемолизу);

4. иммуноферментный метод;

5. иммунофлуоресцентный метод;

6. ПЦР для обнаружения гена токсигенности.

 

З А Н Я Т И Е11

Дата ______________

 

Тема: Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций

 (столбняк, ботулизм, газовая анаэробная инфекция)

План занятия:

1. Морфология анаэробных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.

2. Изучение особенностей роста культур анаэробов на различных питательных средах.

3. Микробиологический диагноз анаэробных инфекций. Разбор методов диагностики столбняка и газовой гангрены. Посев исследуемого материала по способу Вейон-Виньяля, Фортнера, на среду Китта-Тароцци.Регистрация результатов посева материала, содержащего анаэробные микробы, макро- и микроскопия выросших культур.

4. Ускоренное обнаружение С. реrfringens. Демонстрация роста на среде Вильсон-Блера, среде Китта-Тароцци и на молочной среде.

5. Биологическая проба на мышах для обнаружения ботулинического токсина. Разбор методики.

6. Демонстрация иммунопрепаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.

Методические указания

1. Готовые препараты-мазки из чистых культур патогенных анаэробов окрасить по Граму, промикроскопировать. Препараты зарисовать. Обратить внимание на характер расположения спор, отношение к окраске.

2. Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.

3. Для выделения чистых культур анаэробов берется раневое отделяемое. Исследование начинается с предварительной микроскопии исходного материала. Для этого готовят мазки и окрашивают по Граму. Обратить внимание на наличие капсул. Препараты зарисовать.

Посев производится на регенерированную, то есть предварительно прогретую на кипящей водяное бане в течение 10-20 мин для освобождения от растворенного в ней кислорода, среду Китта-Тароцци. Пастеровской пипеткой взять каплю гноя и, наклонив пробирку со средой Китта-Тароцци, по верхней стенке осторожно ввести каплю гноя на дно пробирки так, чтобы не попал воздух.

Зарегистрировать результаты посева материала, содержащего анаэробные микроорганизмы. Приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и зарисовать.

4. Посев раневого отделяемого на среду Вильсон-Блера. Среда Вильсон-Блера предварительно расплавляется и выдается студентам в пробирках. Перед посевом ее необходимо охладить до температуры 40-45°С. Раневое отделяемое предварительно развести в стерильном физиологическом растворе. Для этого каплю исследуемого материала внести в пробирку с физиологическим раствором. Затем после перемешивания из этой пробирки каплю внести в пробирку со средой Вильсон-Блера, тщательно перемешать путем вдувания и выдувания содержимого и быстро набрать среду в трубки Вейон-Виньяля. Трубки положить в горизонтальном положении и дать им остыть. Концы трубок закрыть ватой.

6. Демонстрация препаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.

Патогенные анаэробы Окраска по Граму	Анаэробы в раневом отделяемом Окраска по Граму	Выделенная культура анаэробов Окраска по Граму