Количество молочной кислоты, образующейся за 24 ч 3 страница

Среды для замораживания спермы, как правило, более сложные по составу (см. табл. 5) и приспособлены не только для каждого вида животных, но и для соответствующей технологии расфасовки, замораживания и хранения.

Разбавление и хранение спермы быка. Сперму быка хранят при температуре -19б°С (в жидком азоте), при 0-5°С и при комнатных температурах. Разбавляют ее средами, состав которых зависит от технологии расфасовки и хранения. Многие среды запатентованы. С момента получения спермы от производителя до разбавления должно пройти не более 10 мин. В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму быка разбавляют так, чтобы в одной дозе при всех способах хранения перед осеменением было 10-15 млн. спермиев с прямолинейным поступательным движением и с подвижностью не ниже 4-7 баллов. Температура синтетической среды перед разбавлением должна быть одинаковой со спермой (27-32°С). Среду осторожно небольшими порциями приливают к сперме, соблюдая правила асептики.

При температуре +2-5°С сперму быка можно хранить в течение 72 ч, разбавив глюкозо-цитратно-жел-точной средой (табл. 4).

В США широко использовалась желточно-фосфатная среда: фосфатный буфер и желток куриных яиц в соотношении 1:1. Фосфатный буфер (рН 6,7-6,8) содержит в 100 мл дистиллированной воды Na₂HP0₄х12Н₂О – 2 г и КН₂Р0₄ – 0,2 г. Смесь подогревается в кипящей водяной бане до растворения солей. Хранится при температуре 15°С. Перед использованием добавляют необходимое количество желтка.

Рекомендуется и другая среда: Cornell University Extender: буфер – 80% (объема), желток – 20% (объема), пенициллин – 1000 ЕД/мл и стрептомицин –1000 мкг/мл. Буфер содержит:

Хорошие результаты получают при разбавлении спермы молочно-глицериновой средой: 1. Сначала разбавляют сперму средой из цельного гомогенизированного или снятого молока с антибиотиками так, чтобы в дозе количество сперматозоидов было вдвое больше необходимого; медленно охлаждают до 5°С в течение 4 ч.

2. Охлажденную сперму разбавляют повторно 1:1 охлажденной средой, содержащей 20% глицерина; среду добавляют равными порциями или в количестве 20, 30 и 50% с интервалами 10 мин или же в течение 30 мин по каплям. Финальная концентрация глицерина около 10%; хранят сперму при 5°С.

Сперму, сохраняемую при 2-5°С, фасуют в одноразовые стерильные полиэтиленовые ампулы, полиэтиленовые пробирки объемом по 1 мл или флаконы из-под антибиотиков; необходимо их наполнять полностью. Полиэтиленовые ампулы запаивают, а пробирки и флаконы закрывают стерильной нетоксичной пробкой и закрепляют ее резиновым кольцом. На каждой ампуле заранее пишут тушью номер быка и дату взятия спермы. На стеклянные флаконы наклеивают бумажные этикетки. Подготовленные флаконы и ампулы со спермой оставляют при комнатной температуре (18-20°С) на 20-30 мин, упаковывают и помещают в холодильник при температуре 2-5°С или в пищевые термосы со льдом. Хранят в течение трех дней. Используют сперму с активностью не ниже 7 баллов.

В Новой Зеландии широко практикуется хранение спермы в течение трех дней при комнатной температуре (18-24°С). Осеменение скота сезонное – с середины сентября до декабря. Осеменяют ежегодно до 1,8 млн. животных. В 1991 г. спермой быка голштинской породы Crocketts Trevor в течение трех месяцев было проведено 380000 осеменений. Сперма разбавляется нередко из расчета 2 млн. спермиев в дозе (0,5 мл), но чаще ее расфасовывают в соломины объемом 0,25 мл.

Для разбавления спермы используют желточно-цитратную среду. Ее насыщают азотом и добавляют капроновую кислоту. Желток, пенициллин и стрептомицин вводят в среду перед использованием. Содержание желтка после разбавления 5%. Добавление каталазы 20 мкг/мл среды повышает оплодотворяемость на 1-2%. Каталаза разрушает образующуюся в процессе метаболизма спермиев перекись водорода.

При замораживании спермы в гранулах разбавление проводят лактозо-желточно-глицериновой средой (табл. 5).

Разбавляют сперму одномоментно так, чтобы в одной грануле (0,2 мл) после оттаивания содержалось 10-15 млн. подвижных спермиев. Разбавленную сперму (температура 31± ГС) охлаждают при температуре.2-5"С в течение 4 ч и замораживают на фторопластовых пластинах в специальных прямоугольных или цилиндрических емкостях. Наносят сперму на охлажденную до -160-170°С пластину с помощью охлажденных шприцев, градуированных полиэтиленовых баллончиков от приборов для осеменения свиней, пипеток или разливочной машины, других приспособлений (см. рис. 44). После выдержки в течение 1-2 мин над жидким азотом, а затем в жидком азоте пластину приподнимают до верхнего уровня емкости, охлажденной лопаткой сгребают гранулы в охлажденный контейнер или марлевый мешочек, используя при этом широкую воронку или специальное устройство. Гранулы переносят на хранение в стационарное хранилище.

Для замораживания спермы в соломинках по французской технологии (Кассу) используются среды "Ле-цифос" (477 и 488) и "Криоцифос" (479 и 480).

Сухие заготовки среды "Лецифос" растворяют в би-дистиллированной воде, добавляют желток, после чего разделяют среду на две части. В каждую из них (№1 и № 2) добавляют глицерин, соответственно 3% и 11%.

5. Среды для замораживания и хранения спермы притемпературе -196ºС

Вначале сперму разбавляют средой Ml при 32°С и охлаждают в течение 45-50 мин до 4°С в холодильнике путем использования льда; предварительно сперму помещают в ванночке с водой, имеющей температуру 32°С. Охлажденную сперму окончательно разбавляют средой №2 при 4°С в соотношении 1:1, при этом среду добавляют двумя равными порциями с интервалом 15 мин. После этого охлаждение продолжают в течение 3-3,5 ч.

Расфасовывают сперму в соломинки объемом 0,5 или 0,25 мл; заранее их маркируют и стерилизуют, после заполнения спермой свободный конец запаивают ультразвуком. Подготовленные таким образом соломинки располагают горизонтально на специальной охлажденной подставке, которую переносят в сосуд Дьюара на металлическую сетку (рис. 42,г). Температуру устанавливают в зависимости от объема соломинок -120°С и -140°С соответственно для соломинок 0,25 и 0,5 мл, выдерживают их в течение 10-12 мин, затем переносят в жидкий азот для хранения.

Среда "Криоцифос" – более простая по составу, чем "Лецифос", не содержит молоко, обладает хорошими визуальными свойствами и существенно облегчает микроскопическую оценку качества спермы. В вариант 479 среды добавляются антибактериальные препараты: пенициллин, стрептомицин, линкомицин и спектиноми-цин, а в вариант 480 – тилозин, гентамицин, линкомицин и спектиномицин.

Многие организации по искусственному осеменениию используют и другие двухфракционные среды. Не Н держащую глицерина фракцию А используют для Сачального разбавления и охлаждения спермы, фракцию В с удвоенным содержанием глицерина добавляют после охлаждения спермы до 5°С. Введение глицериновой фракции после охлаждения уже разбавленной спермы предотвращает возможные повреждения спермиев и обеспечивает проявление действия антибиотиков. Наиболее простая по составу среда желточно-цитратно-глицериновая:

При использовании желточно-цитратно-глицериновой среды сначала готовят цитратный буфер. На аналитических или других точных весах отвешивают 29 г натрия цитрата (Na₈C₆H₈O₇ х 2Н₂0) ХЧ или ЧДА. Навеску вносят в мерную колбу на 1 л и добавляют приблизительно 500 мл дистиллированной (ультрачистой) воды. Помешиванием раствора добиваются растворения кристаллов цитрата натрия. Затем добавляют необходимое количество воды, постоянно помешивая магнитной мешалкой. Приготовленный буфер переносят в емкость для хранения и стерилизуют автоклавированием или вакуумной фильтрацией через мембранный фильтр 0,45 мкм в стерильную химическую колбу. Определяют осмотическое давление и рН. Хранят в прохладном месте или рефрижераторе до момента использования (одна-две недели).

Свежие (1-2 дня) куриные яйца моют теплой водой с детергентом, затем промывают теплой и дистиллированной водой, обеззараживают 70%-ным этиловым спиртом и высушивают.

Если после предварительной оценки сперма признана годной, ее непосредственно в спермоприемнике разбавляют 1:1 или 1:2, переносят в градуированный смеситель и определяют объем эякулята. После этого добавляют остальное количество разбавителя.

При использовании желточно-цитратно-глицериновой и молочной сред для быка антибиотики добавляют непосредственно в сперму, осторожно смешивают и выдерживают 3-5 мин до момента разбавления. На каждый мл спермы берут 100 мкг тилозина, 500 мкг гентамицина и 300-600 мкг линкоспектина, растворенных в 0,02 мл бидистиллированной стерильной воды. Весовые количества антибиотиков необходимо приводить в соответствие с их активностью, которая может различаться в зависимости от партии препарата. Все антибиотики должны быть проверены на безвредность для спермиев. Гентамицин и тилозин могут сохраняться в растворе при 5,5°С в течение 8 дней, в парах жидкого азота – до б мес.

После выдержки 3-5 мин проводят предварительное разбавление спермы фракцией А, содержащей в расчете на 1 мл такие же количества антибиотиков; степень разбавления от 1:1 до 1:4. Обычно объем этой фракции составляет около 50% от всего объема среды. Разбавленную сперму выдерживают минимум 2ч.

Фракция Б может содержать 5-10% антибиотиков, определенной для фракции А. Фракция Б добавляется из расчета 1:1 по отношению к объему спермы + фракция А. Финальная концентрация антибиотиков — 50 мкг тилозина, 250 мкг гентамицина и 150-300 мкг линкоспектина в расчете на каждый мл замороженной спермы.

Разбавляют сперму с расчетом получения 10-15 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением при подвижности не менее 4 баллов. Для расчета степени разбавления используют формулу

где: Р – количество разбавителя для 1 мл спермы, С – концентрация спермиев в сперме, млрд./мл, А – подвижность спермиев после размораживания (4 балла), V– объем дозы спермы, мл.

Финальное соотношение фракции А + сперма и фракции В – 1:1. При таком соотношении содержание компонентов (в %) в смеси: буфер цитратный – 73, желток – 20 и глицерин – 7. В эту среду (в одну или обе фракции) нередко включают фруктозу или глюкозу конечная концентрация в среде от 1 до 1,25%. Желточно-цитратно-глицериновая среда должна иметь Н 6 8-6,9 и осмотическое давление 285-300 миллиосмомолей.

В мировой практике широко используется и молочная среда. Так, в США в 1992 г. 1/4 часть всей спермы была разбавлена молочной средой. Единственный серьезный недостаток этой среды - наличие оптически различимых жировых шариков, которые затрудняют оценку подвижности спермиев.

Свежее или пастеризованное молоко содержит вредные для спермиев энзимы, но при нагревании его в течение 10 мин при 92-95 °С они разрушаются. Рекомендуется использовать свежее, пастеризованное, гомогенизированное цельное молоко жирностью около 3,5%. Его прогревают в закрытом двойном стеклянном бойлере (кипятильнике), затем охлаждают до комнатной температуры. Охлажденное молоко переливают в стерильную колбу, оставляя пену в бойлере, или при необходимости фильтруют через стерильный фильтр. Готовят две фракции среды.

Для разбавления и замораживания спермы по байсогальской технологии используют среду, предложенную Литовским НИИЖ – ЛЦГЖС или ЛФРМГЖ (табл. 5). Свежеполученную сперму, соответствующую стандарту, разбавляют в соотношении 1:1 при температуре 27±1 С и оставляют при 18-20°С на 15 мин. Для такого первичного разбавления расходуют 20% рассчитанного объема среды. После выдержки добавляют оставшееся количество (80%) этой же среды при 18-20°С. Степень ^разбавления устанавливают из расчета, чтобы в одной соломинке (0,25 мл) после оттаивания содержалось не менее 15 млн. подвижных спермиев. Разбавленную сперму расфасовывают в промаркированные на машине М6-МНС и простерилизованные в течение 4 ч в бактерицидной камере соломинки, которые закупоривают с обеих сторон стеклянными шариками. Делается это одновременно при помощи автоматического устройства М6-МУ2-С (см. рис. 43). Во время расфасовки следят, чтобы столбик воздушного пузырька в соломинке был длиной 10±2 мм. После заполнения спермой воздушный пузырек перемещают встряхиванием в середину соломин, которые помещают в пластмассовые коробки и охлаждают в холодильнике-витрине 3-4 ч при 4-5°С. Замораживание проводят в стационарных хранилищах азота(ХБ-0,5 илиКВ-6202). Уровень жидкого азота поддерживают на расстоянии 6-8 см от щита замораживающего устройства. На высоте 13 мм от щита (месторасположение соломин) температура должна быть от -150 до -180°С. Выдерживают при такой температуре 7 мин, после чего соломинки размещают в специальные стаканы для хранения в жидком азоте.

Для разбавления и замораживания спермы в облицованных гранулах применяют лактозо-желточно-цит-ратно-глицериновую среду, которая состоит из двух взаимодополняющих частей (№ 1 и № 2, табл. 5). Разбавление проводят в спермоприемнике или специальном пакете. Каждую часть среды заливают дополна в отдельные устройства из эластичной полиэтиленовой пленки, которые соединены эластичными трубками с патрубками цилиндра-дозатора. Устройство со средой № 1 размещают в термостате при температуре 35°С, другое устройство со средой № 2 – при 18-22°С. Свежеполученную сперму разбавляют средой № 1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной температуре в течение 5—10 мин до окончания оценки эякулята. Затем дополнительно разбавляют средой № 2 до требуемого количества спермиев в дозе. Сперму расфасовывают в полимерную трубку диаметром 3,8-4 мм, с толщиной стенки 120 мкм. Перед использованием трубку стерилизуют ультрафиолетовым облучением в течение 25 мин, вкладывают ее в автомат ПРЖ и соединяют с муфтой спермоприемника. Весь разбавленный эякулят вдавливают в трубку, после чего ее подводят к сварочному узлу автомата, который разделяет ее на дозы объемом 0,25—0,33 мл с одновременной герметизацией их краев. При наличии специального приспособления каждая спермодоза маркируется. Спермодозы из приемного бункера автомата переносят в алюминиевые тубы диаметром 40 мм, которые закрывают поролоновыми пробками, и ввинчивают в обоймы устройства для эквилибрации и замораживания спермы (рис. 46). Устройство помещают в холодильник и выдерживают при температуре 2-5°С в течение 4-6 ч при постоянном вращении обоймы. Охлажденные тубы снимают с аппарата, крепят к ним стержни-держатели и переносят в заполненный жидким азотом широкогорлый сосуд ("Харьков-31''). Обойму с тубами погружают в азот на максимальную глубину так, чтобы он не попадал внутрь освобожденных от поролоновых пробок туб через верхний край; в таком положении тубы выдерживают 8-10 мин, затем полностью погружают в жидкий азот и хранят до проверки качества спермы. Тубы с пригодной для осеменения спермой закрывают поролоновыми пробками, отсоединяют от обоймы и переносят в стационарное хранилище спермы.

Длительное хранение замороженной спермы в жидком азоте в условиях крупных племлредприятий и их филиалов осуществляется в специально оборудованных помещениях (хранилищах), в которых установлены стационарные емкости типа ХБ-0,5, КВ-6202 и др. Хранят сперму в закрытых канистрах или пластмассовых стаканах, в которых имеются съемные перегородки. С помощью перегородок в каждом стакане можно сделать до четырех отделений и хранить в них несколько эякулятов. Заполненные стаканы помещают один на другой в металлические футляры, которые должны быть полностью погружены в жидкий азот. К держателям футляров при помощи прочных нитей прикрепляют этикетки с номерами быков. Сперму, замороженную в гранулах, нередко хранят в марлевых мешочках.

В племпредприятиях в спермобанке сперму быков хранят, как правило, до завершения оценки их по качеству потомства. Сперму производителей, не получивших положительной племенной оценки, выбраковывают, сперму быков-улучшателей используют по мере поступления заказов на нее из хозяйств.

На пунктах искусственного осеменения сперму хранят в сосудах Дьюара СДС-50, СДС-20, "Харьков-34А" и др. В них можно и транспортировать сперму. Эти сосуды представляют собой стальные или алюминиевые двустенные емкости с вакуумно-порошковой либо многослойно-вакуумной изоляцией. Вместимость их варьирует от 4 до 50 л, суточный расход жидкого азота колеблется от 1 до 3% в зависимости от размеров и качества изоляции. Периодически сосуды пополняют жидким азотом. Азот доставляют на пункты искусственного осеменения в транспортных резервуарах на автомобилях-азотовозах.

Один раз в год сосуды Дьюара подвергают профилактической дезинфекции 96%-ным спиртом, 4%-ным раствором перекиси водорода или ультрафиолетовым облучением при помощи переносного бактерицидного устройства, предложенного В.А.Серединым. Перед дезинфекцией сосуды освобождают от спермы, выливают из них остатки жидкого азота, отогревают в закрытом помещении не менее двух суток и моют горячей (не более 70°С) водой.

Разбавление и хранение спермы барана и козла. При искусственном осеменении овец широко используют свежеполученную неразбавленную сперму, которая обеспечивает наиболее высокую оплодотворяемость маток. Разбавление и хранение спермы несколько ухудшает результаты. Однако рациональное использование ценных производителей легче достигается при условии разбавления и хранения спермы. Для разбавления и хранения ее при температуре не ниже 0°С используют синтетические среды ГЦЖ и ГФЖ (табл. 4). Разбавляют сперму в соотношении 1:1 - 1:2 при 25-ЗСГС. После разбавления в течение 4 ч ее можно использовать для осеменения, если хранить при температуре не ниже 16°С. Если же сперму охлаждают до 2-5°С, срок хранения увеличивают до 24 ч. Хранят ее в пищевых термосах со льдом. Перед помещением в термос флаконы со спермой обертывают ватой или вставляют в гнезда в специальных поролоновых амортизаторах и затем упаковывают в полиэтиленовые мешочки. Мешочки кладут на лед в термос и сверху тоже помещают небольшое количество льда.

В США для разбавления спермы используют чаще желточно-цитратный или желточно-фосфатный буфер. Цитратный буфер готовят из расчета 36 г трехзамещенного пятиводного (Na3C6H5O7 х 5 V2H2O) или 30 г лвухводного (Na₃C₆H₅0₇ х 2Н₂О) цитрата натрия в 1 л дистиллированной или ультрачистой воды. Фосфатный буфер готовят путем растворения 2 г Na₂HPO₄ х 12Н₂О и 0 2 г КН₂Р0₄ на 100 мл дистиллированной или ультрачистой воды. Раствор стерилизуют и добавляют в момент разбавления спермы 20% (к объему) желтка свежего куриного яйца.

Рекомендуется и молочная среда. Свежее гомогенизированное или снятое пастеризованное молоко доводят до температуры 92-95°С и выдерживают в течение 10 мин. Охлаждают до комнатной температуры, устраняют пену путем фильтрации и добавляют антибиотики. Обычно используют стрептомицин и пенициллин из расчета 1000 мкг и 1000 ЕД/мл среды.

После получения сперму постепенно охлаждают. В момент разбавления сперма и среда должны иметь комнатную температуру. Степень разбавления 1:2 или 1:3. Охлаждают разбавленную сперму постепенно до 2-5⁰С. Желательно флаконы со спермой поместить в химический стакан с водой температурой 32-35'С и поместить в холодильник на 2 ч.

Сперму козла разбавляют в 5-20 раз. Из одного эякулята можно получить до 40 доз, а в неделю от одного самца во время полового сезона до 300 доз.

Замораживание спермы барана практикуется реже, чем спермы быка. Это связано с недостаточно стабильными результатами осеменения маток замороженной спермой, а также с особенностями организации искусственного осеменения в овцеводстве и сроков его проведения. Для разбавления и замораживания рекомендуются синтетические среды ВИКА (с антиоксидантом), ГЖУК-трис-буферная (с полисахаридом декстрином) и ЛЖГТЦГ (с полисахаридом гуммиарабиком).

При приготовлении среды ВИКА (табл. 5) токоферол может быть заменен ди-трет-бутил-крезолом (ДТБК) в количестве 0,05 г. Раствор сахарозы и натрий-кальциевую соль ЭДТА стерилизуют в водяной бане в течение 15 мин. Желток эмульгируют с токоферолом в стерильном мерном стакане в водяной бане при 37°С в течение 5-7 мин, постоянно помешивая стеклянной палочкой. Затем в этот стакан последовательно вносят простерилизованный раствор сахарозы с солью ЭДТА, спермосан-3 и глицерин. После получения спермы барана ее выдерживают не более 15 мин и разбавляют одномоментно в соотношении 1:2 при концентрации спермиев 2,5-3,3 млрд. в 1 мл и 1:3 при концентрации более 3,3 млрд. в 1 мл. Среду с температурой 30°С добавляют в сперму осторожно по стенкам спермоприемника.

При использовании ЛЖГТЦГ-среды сперму разбавляют в два приема: сначала ЛЖ-средой (вода дистиллированная 100 мл, лактоза – 12 г, желток – 20 мл) в соотношении 1:0,5 при температуре 28±2°С, затем добавляют один объем ЛЖГТЦГ-среды при 20±2°С. Техника приготовления этих сред более сложная, что обусловлено требованиями длительной стерилизации в водяной бане (30 мин для ЛЖ-среды и 60 мин для ЛЖГТЦГ-среды) всех компонентов, кроме желтка и спермосана, контроля испарения воды в процессе стерилизации путем взвешивания колбы с содержимым и восполнения воды при значительных ее потерях.

ГЖУК-трис-буферной средой свежеполученную сперму разбавляют одномоментно в соотношении 1:3 при концентрации спермиев 3-4 млрд. в 1 мл и 1:4 при концентрации их свыше 4 млрд. в 1 мл.

Разбавленную сперму охлаждают в течение 2-3 ч до 2-4°С. При этом флаконы (полиэтиленовые капельницы) со спермой погружают в кювету с теплой (20-25°С) водой и ставят в бытовой холодильник. После охлаждения кювету с флаконами погружают в тающий лед до момента замораживания спермы.

Сперму замораживают на поверхности сухого льда или на охлажденной до -80°С фторопластовой пластине. Для обеспечения такой температуры пластину после охлаждения в жидком азоте поднимают и устанавливают с помощью штатива на уровне верхнего края широкогорлого сосуда и выдерживают 4-6 мин. Потом в лунки пластины накапывают сперму по 0,2 мл. Как только сперма затвердеет, пластину опускают ниже и выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 3-5 см в течение 1,5-2 мин, затем погружают на 1 мин в жидкий азот. После окончания замораживания пластину извлекают из азота и собирают гранулы в алюминиевые тубы или мешочки из тонкой алюминиевой фольги. Емкости должны быть промаркированы. Замороженную сперму помещают в сосуд Дьюара на карантинное хранение на 28 дней.

Разбавление и хранение спермы хряка. Для разбавления и хранения спермы хряка при температуре 16-20°С в течение 3 сут используют синтетические среды ГХЦС и ГХЦ (см. табл. 4). К разбавлению допускаются эякуляты с концентрацией спермиев не менее 100 млн. в 1 мл спермы. Разбавляют сперму через 20-30 мин после получения и определения ее качества. Степень разбавления варьирует от 1:1 до 1:9. После разбавления в 1 мл спермы должно содержаться около 50 млн. спермиев, а в дозе для осеменения (100-150 мл) – не менее 3 млрд. клеток. Разбавленную сперму расфасовывают в стеклянные колбы или полиэтиленовые флаконы и хранят в темноте при 16-20°С в стерильном боксе-термостате или в специальных термосах для хранения и транспортировки. Колбы закрывают не герметично (целлофаном или пергаментной бумагой), без закрепления резиновыми кольцами. На флаконы слегка навинчивают крышки. Во время хранения сперму осторожно перемешивают не менее двух раз в сутки. При хранении и транспортировке необходимо строго следить за температурным режимом. Отклонение температуры от оптимальной (16-20°С) отрицательно влияет на оплодотворяющую способность спермы. Транспортируют сперму хряка в специальных термосах (рис. 48), бытовых сумках-холодильниках, термосах-ящиках, в которых для теплоизоляции применяется поролон. На период транспортировки колбы и флаконы плотно укупоривают, а после доставки на пункт ослабляют, снимают резиновые кольца, фиксирующие бумагу на колбах, или расслабляют крышки флаконов, сперму транспортируют через 30 мин после разбавления. Допускается кратковременное (1-3 ч) постепенное снижение температуры до 14-15"С или повышение до 24°С.

При необходимости хранения спермы при более низких температурах (но не ниже 5°С) к 1 л среды добавляют 30-40 мл желтка куриных яиц. После разбавления ГХСЦ- или ГХЦ-средами с желтком сперму хряка хранят в термосах со льдом. Тающий лед кладут на дно термоса, примерно на одну четверть объема,- покрывают влагонепроницаемым материалом, а сверху настилают сухую серую вату слоем 1-1,5 см. На эту прокладку помещают флаконы со спермой. При таких условиях достигается близкая к рекомендуемой скорость охлаждения: около 4-5°С в час – до 18°С и 2°С в час - до 6-10°С. Весь период охлаждения длится 7-8 ч. Флаконы должны быть заполнены не полностью. Один раз в день необходимо сперму слегка взбалтывать.

Способы замораживания спермы хряков и длительного хранения ее разработаны, однако практического применения в странах СНГ пока не имеют.

Разбавление и хранение спермы жеребца. Для разбавление и кратковременного (в течение 48 ч) хранения спермы при температуре 2-5°С используется да ЛХЦЖ (табл. 5). Разбавляют свежеполученную сперму с подвижностью спермиев не ниже 6 баллов и концентрацией 150 млн. в 1 мл в соотношении 1:3 при 25-30°С. Охлаждают разбавленную сперму постепенно. При этом особое внимание уделяют подготовке термосов и теплоизоляционных прокладок, лед в термосе помещают в полиэтиленовых мешочках.

Для замораживания и длительного хранения в жидком азоте сперму разбавляют ЛХЦЖ-средой с добавлением глицерина (табл. 5). Разбавляют также в соотношении 1:3, одномоментно. Разбавленную сперму объемом не более 100 мл при высоте слоя 2,5 см в колбе выдерживают в холодильнике 2 ч и замораживают на поверхности сухого льда или в алюминиевых пакетах в парах жидкого азота. При замораживании в форме гранул сперму наносят каплями по 0,2 мл в лунки на поверхность сухого льда; выдерживают в течение 5 мин, после чего гранулы собирают и упаковывают в алюминиевые тубы или пластмассовые стаканы и помещают на хранение в жидкий азот. В каждой упаковке должно быть 125—130 гранул, что составляет около 25 мл оттаянной спермы. При использовании алюминиевых тубов (пакетов) в зависимости от их величины сперму расфасовывают по 25 или 13 мл. В обоих случаях толщина пакета со спермой не должна быть больше 5 мм. Перед использованием пакеты охлаждают, а после заполнения спермой осторожно вытесняют из них воздух и дважды закатывают концы. Пакеты со спермой помещают в специальные держатели с пенопластовыми поплавками и переносят в широкогорлый сосуд Дьюара (рис. 47). Выдерживают в течение 5-7 мин в парах жидкого азота на расстоянии 10-12 мм от его поверхности. После этого пакеты помещают в жидкий азот на хранение. При замораживании спермы в гранулах и в пакетах в одной спермодозе (125-130 гранул, один пакет объемом 25 мл или 2-3 пакета по 13 мл) должно содержаться около 800 млн. спермиев, а после оттаивания - 300-400 млн. подвижных спермиев.

Подготовка к использованию и оценка сохраняемой спермы. Основными критериями качества используемой для осеменения спермы являются процент подвижных спермиев и общее число таких клеток в спер-модозе. Для более полной оценки определяют степень бактериальной загрязненности спермы, абсолютный показатель живучести (при температуре 2-5°С или при 38°С), максимальную продолжительность жизни (выживаемости) спермиев и другие свойства. Используют и более сложные методы изучения морфологических изменений в спермиях после замораживания и оттаивания.

Если сперма хранится при температуре не ниже 0°С, то от каждого разбавленного эякулята оставляют для биологического контроля 0,5-1 мл спермы быка, до 0,5 мл спермы барана, 10 мл спермы хряка и 3-5 мл спермы жеребца. Подвижность спермиев быка при хранении спермы в течение 3 сут при 2-5°С или при комнатной температуре должна быть не ниже 7 баллов, спермиев жеребца при хранении спермы в течение 2 сут при 2-5°С - не ниже 5 баллов, спермиев барана при хранении спермы в течение 24 ч - не менее 8 баллов, спермиев хряка при хранении спермы при 16-20°С в течение 3 сут – не менее 7 баллов.

Подвижность спермиев оценивают по общепринятой методике. Но при оценке спермы хряка рекомендуется добавлять подщелоченный глюкозо-солевой раствор (100 мл дистиллированной воды, 0,45 г хлорида натрия, 3 г глюкозы, 50-70 мг гидрокарбоната натрия). К одной капле спермы добавляют 5-10 капель раствора. Нагревают мазок в течение 3-5 мин при 40-42°С. Такое разбавление и нагревание необходимо для того, чтобы в сохраняемой сперме нарушить хелатно-ион-ный комплекс, освободить катионы и активизировать ферментные системы спермиев.

При работе с замороженной спермой следует соблюдать ряд условий. Прежде всего нельзя допускать повышения температуры спермы до момента ее оттаивания. Для этого упаковки со спермой в сосуде Дьюара приподнимают только на высоту, позволяющую извлечь спермодозу, но не вынимают из горловины сосуда. Инструмент для фиксации и приподнятия упаковки и для взятия спермодозы (гранулы, соломинки, пакет и т.д.) перед использованием протирают спиртовым тампоном и охлаждают в жидком азоте. Взятую спермодозу немедленно помещают в биотермостат.

Биологическое исследование замороженной спермы быков проводят первый раз через 24 ч после замораживания и повторно – при передаче на стационарное хранение. В течение карантинного хранения (28 дней) исследуют сперму на бактериальную загрязненность, определяют подвижность и процент живых (эозинот-рицательных) спермиев, их выживаемость. Из каждого замороженного дуплетного эякулята берут две дозы спермы. Для определения выживаемости спермиев после оттаивания сперму инкубируют в водяной бане (биотермостате) в течение 5 ч. Исходная подвижность спермиев должна быть не менее 4 баллов, выживаемость не менее 5 ч; эозинотрицательных спермиев должно содержаться более 40%.

Сперму, замороженную в гранулах объемом 0,2 мл, оттаивают следующим образом. Одну гранулу помещают в ампулу с 1 мл 2,9%-ного раствора натрия лимоннокислого, подогретого в биотермостате до 38-40°С. Не доставая ее из воды, осторожно вращают кончиками пальцев до полного оттаивания спермы. После этого ампулу вынимают из воды и оставляют при комнатной температуре. Время оттаивания 6-8 с.

Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане, в микротермостатах различной конструкции при температуре 38°С в течение 11-12 с. Время оттаивания уменьшать нельзя. Соломинки помещают заводской пробкой вниз, а лабораторной - вверх. За период выдержки сперма достигает температуры выше 0°С.

Для оттаивания облицованные гранулы берут из емкости пинцетом с плоскими браншами и помещают в подогретую до 40°С воду на 8-10 с. Затем извлекают гранулы из воды, поверхность оболочки вытирают стерильной салфеткой, после чего вскрывают ножницами. Если сперма расфасована в оптически прозрачную трубку, после оттаивания ее оценивают под микроскопом через прозрачную стенку.

Качество замороженной спермы жеребца оценивают через 24 ч после замораживания. Оттаивают несколько гранул или контрольный пакет. В таком пакете объем спермы может быть уменьшен до 5 мл. Для хранения допускают сперму с подвижностью спермиев не ниже 2,5 балла. Сперму, замороженную в алюминиевых пакетах (тубах), оттаивают в водяной бане при 40°С в течение 45-50 с; при этом пакет слегка покачивают. За это время температура спермы достигает 20-25°С. Пакет извлекают из воды, вытирают насухо салфеткой или полотенцем, а один край его протирают спиртовым тампоном и отрезают стерильными ножницами. Сперму, замороженную в гранулах, оттаивают в стерильных колбах. Для этого тубу или стакан с гранулами корнцангом вынимают из жидкого азота, освобождают от поролоновой пробки и быстро пересыпают гранулы в колбу объемом 500 мл, погруженную в водяную баню с температурой 40°С, и добиваются однослойного расположения гранул. Колбу выдерживают в воде, слегка покачивая, до полного оттаивания спермы.

Оценка замороженной спермы барана проводится в течение срока карантинного хранения. Определяется бактериальная загрязненность, подвижность спермиев после оттаивания, абсолютный показатель живучести и выживаемость (в часах) и другие свойства. Для определения подвижности спермиев оттаивают одну гранулу из каждого замороженного эякулята. Оттаивание проводят в пенициллиновом флаконе, в который вносится 0,8-1 мл натрия цитрата. Флакон подогревают в водяной бане до 40°С. Охлажденным корнцангом извлекают гранулу из сосуда Дьюара и помещают во флакон. Подвижность оттаянной спермы должна быть не ниже 4 баллов, абсолютный показатель живучести при 2-5°С – 250 и 300 (при использовании сред ЛЖГТЦГ и ГЖУК), выживаемость соответственно 100 и 140 ч.

Для быстрого оттаивания спермы в условиях пункта искусственного осеменения используют специальные устройства с отделением жидкой фракции от охлажденных гранул (рис. 49). В простейшем оттаивателе температура воды в межстеночной полости должна быть 70-80°С. Гранулы засыпают во внутреннюю кювету так, чтобы все они (не более 20) соприкасались с ее стенками. Оттаянную сперму собирают в подставленный флакон (накопитель). Оттаиватель в виде металлической трубки с перехватом в середине и с навинченным (или надетым) накопителем спермы помещают в глубокий химический стакан с подогретой до температуры 40-42°С водой. В верхнюю часть оттаивателя засыпают гранулы (не более 15) и постоянно вращают его до полного оттаивания спермы. Более совершенный электрический оттаиватель ОГСБ-2М. За один прием оттаивают не более 20 гранул, или около 4 мл спермы, которой достаточно для осеменения 10-20 овец. Гранулы достают из емкостей охлажденной сетчатой ложечкой. Оттаянную сперму используют в течение 15 мин. При оценке подвижности спермиев к капле спермы добавляют каплю раствора натрия цитрата.

Процесс введения спермы в половые пути самки является очень важным этапом метода искусственного осеменения. Сперма должна быть введена в наиболее подходящее место и в оптимальное время в период Половой охоты.

Способы осеменения. Для осеменения коров и телок используется цервикальный метод осеменения, т.е. в шейку матки. Существуют три принципиально различающихся по технике исполнения способа введения спермы в цервикальный канал: визо-цервикальный ректо-цервикальный и мано-цервикальный. Введение спермы во влагалище в тех дозах, которые обычно используются при цервикальном осеменении, оказывается малорезультативным. Независимо от способа введения спермы осеменение коров и телок должно проводиться на пункте или в подготовленном для этой цели помещении, где содержатся животные, с соблюдением технологических и ветеринарно-санитарных требований. При осеменении необходимо предупреждать болезненные и стрессовые реакции у животных, а также исключить возможность распространения инфекционных заболеваний. При маршрутно-кольцевом обслуживании нескольких пунктов специалист по искусственному осеменению может перевозить только сосуд со спермой. Другие необходимые инструменты и материалы должны быть на каждом пункте. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.

Визо-цервикальный способ осеменения – наиболее простой и доступный, использовался в начале широкого внедрения искусственного осеменения в практику скотоводства. В странах СНГ нередко используется и в настоящее время. При этом способе во влагалище коровы или телки вводят теплое стерильное влагалищное зеркало, которое предварительно увлажняют горячим изотоническим раствором натрия хлорида или натрия гидрокарбоната. При осеменении в недостаточно освещенном помещении к зеркалу присоединяют осветитель. Зеркало размещают во влагалище так, чтобы можно было видеть отверстие шейки матки. Затем через зеркало шприц-катетер вводят в шейку матки на глубину 4-6 см и нажатием на поршень выдавливают дозу спермы. Перед введением спермы зеркало немного извлекают и уменьшают степень раскрытия влагалища.

Для асептического проведения осеменения этим способом необходимо влагалищное зеркало и шприц-катетер обрабатывать перед осеменением каждого животного. Зеркало (металлическое) обычно стерилизуюткипячением в дистиллированной воде, шприц-катетер - кипячением или 70%-ным спиртом. Наружную поверхность катетера протирают тампоном, смоченным 96%-ным спиртом, канал его промывают 1%-ным раствором натрия хлорида или 2,9%-ным раствором натрия цитрата.

Цервикальное осеменение при помощи влагалищного зеркала или светопроводного расширителя осуществляется просто и легко (рис. 50). Однако оно имеет ряд недостатков. Один из них — необходимость мытья и стерилизации влагалищного зеркала после каждого введения животному. А для обработки шприца-катетера необходимо иметь 70% -ный спирт и тампоны, пропитанные 96%-ным спиртом, ежедневно готовить изотонический раствор натрия хлорида или натрия цитрата и промывать шприц-катетер перед каждым осеменением. Это трудоемко и неудобно. При нарушении техники осеменения (несоответствие размеров зеркала просвету половых путей, грубое и неумелое введение его, недостаточное подогревание и т.д.) у животного возникает ответная реакция. Она приводит к повышению тонуса мышечных элементов половых путей, изменению положения влагалищной части шейки матки относительно стенок влагалища, возможному сужению цервикального канала. Эти изменения, а также проявляющееся беспокойство животных затрудняет введение осеменительного инструмента на достаточную глубину и рациональное размещение в цервикальном канале спермы. Нередко сама извитость канала является причиной этого. Все это сказывается на оплодотворяемости, которая после первого осеменения после отела обычно не превышает 50%.

Ректо-цервикалъный способ – наиболее надежный из всех используемых в скотоводстве способов осеменения, предложен в 1937 г. датскими ветеринарными специалистами; заключается во введении осеменитель-ного инструмента со спермой в шейку матки, которую фиксируют рукой через прямую кишку. Этот способ завоевал широкое признание. В большинстве стран мира он является единственным способом, который в одинаковой мере пригоден как для осеменения коров и телок, так и для пересадки зародышей реципиентам.

Для осеменения этим способом руку в перчатке вводят в задний участок прямой кишки животного. Затем несколько отодвигают ее (руку) назад и располагают так, чтобы большой палец разместился в области промежности выше угла половой щели, а остальные четыре пальца надавливали на нижнюю стенку прямой кишки впереди ануса. Это приводит к раскрытию половой щели. Подготовленный инструмент для осеменения (полистироловая пипетка, соединенная с помощью специальной муфты с полиэтиленовым шприцем; металлический инструмент типа ШО-3 или ШО-4 с полипропиленовой соломиной, зафиксированной в инструменте с помощью защитного чехла; специальный металлический инструмент для облицованных гранул) (см. рис. 52) вводится в половые пути по верхней стенке преддверия влагалища вначале под углом 30-40°, чтобы не попал в отверстие мочеиспускательного канала, а затем - горизонтально до упора в свод влагалища. Если инструмент упирается в складку стенки влагалища, необходимо осторожно рукой через стенку прямой кишки надавить на передний конец инструмента и продвинуть его вперед. Иногда это удается сделать только после отодвигания шейки матки вперед и распрямления верхней стенки влагалища. Можно осеменительный инструмент продвигать в половые пути раньше, чем будет введена рука в прямую кишку. Для этого одной рукой раскрывают половые губы, а другой инструмент направляют во влагалище по верхней стенке. Затем руку вводят в прямую кишку. Чтобы рука легче проходила через анальное отверстие, перчатку слегка намыливают или смазывают вазелином. Перед введением можно смазать и анальное отверстие.

Манипуляции по освобождению прямой кишки от каловых -масс следует проводить тогда, когда сильно затруднено фиксирование шейки матки; введенный инструмент при этом оберегают от загрязнения.

После полного введения инструмента во влагалище рукой через прямую кишку фиксируют шейку матки и направляют инструмент в цервикалъный канал. Это наиболее трудная и ответственная операция. Чтобы мастерски овладеть ею, необходим большой практический навык. Для начинающих осваивать этот способ можно рекомендовать два следующих приема (рис. 51). Если по толщине шейка матки не слишком большая, то сначала необходимо отодвинуть и прижать ее к боковой стенке таза. При работе правой рукой прижимают шейку к левой стенке, если левой – то к правой стенке. Затем полностью обхватывают заднюю часть шейки так, чтобы указательный, средний и безымянный пальцы размещались снизу шейки, а большой палец фиксировал ее сверху. Мизинец должен находиться сзади устья шейки матки, и на нем располагают конец инструмента. Изменяя положение кисти руки с шейкой матки в сагиттальной плоскости, можно выбрать такой момент, когда кончик осеменительного инструмента совпадет с наружным отверстием шейки, после чего его достаточно легко ввести в заднюю часть цервикаль-ного канала. Подталкивая инструмент вперед, руку в прямой кишке перемещают на переднюю часть шейки, фиксируют ее и, изменяя положение относительно инструмента в различных направлениях, "насаживают" на него полностью. Когда пальцы ощутят инструмент через тонкую стенку тела матки, его несколько отодвигают назад и, надавливая на поршень шприца или толкатель другого инструмента, медленно вводят сперму. Рекомендуется при этом инструмент постепенно извлекать из цервикального канала так, чтобы по крайней мере часть вводимой спермы осталась между складками шейки матки. Это способствует формированию первичного депо спермиев. Более глубокое расположение такого депо, чем при естественном осеменении, позволяет существенно уменьшить объем вводимой спермы и количество в ней подвижных спермиев без снижения оплодотворяемости осемененных животных. Иногда диаметр шейки матки настолько велик, что трудно обхватить заднюю часть ее рукой. В этом случае четырьмя пальцами прижимают влагалищную часть шейки ко дну таза, а большим пальцем отыскивают наружное отверстие шейки и под контролем его направляют инструмент вперед. После этого, манипули-уя передней частью шейки матки, полностью вводят его в цервикальный канал (рис. 51).

Большие затруднения могут быть и при осеменении тех животных, у которых шейка матки слабо выражена. Отыскание ее влагалищной части и фиксация кистью руки необходимы для последующего введения инструмента в цервикальный канал.

При использовании ректо-цервикального способа сперму можно ввести в половые пути на различную глубину. Когда не был достаточно хорошо выяснен механизм передвижения спермиев, стремились сперму вводить глубже, полагая, что это необходимо для сохранения энергии спермиев и более быстрого продвижения их к месту оплодотворения. Однако данные многих экспериментов показывают, что при введении спермы в цервикальный канал отдельные спермин могут достигать яйцепроводов уже через несколько минут. Перемещение их происходит в основном за счет мышечных сокращений матки. Но биологическая важность быстрого переноса спермиев в яйцепроводы не велика. В естественных условиях спермин попадают в половые пути во время охоты, т.е. за 10—12 ч до овуляции. В таких случаях скорость передвижения их не может быть определяющим оплодотворение фактором. И неудивительно, что не обнаружено различий в оплодотворяемости после введения коровам в естественную охоту спермы в шейку, тело или рога матки. Но при условии искусственного осеменения животных в синхронизированную половую охоту скорость передвижения и число поступивших к месту оплодотворения спермиев может иметь решающее значение. По нашим данным, в синхронизированный половой цикл наиболее высокая оплодотворяемость (53,8%) была у телок, которым при осеменении в фиксированное время сперму вводили в тело матки, несколько ниже (45,6%) – при введении в среднюю или переднюю часть цервикального канала и самая низкая (26,8%), когда сперму вводили в заднюю часть шейки. И хотя глубина введения спермы нами лишь контролировалась, а не выбиралась специально, что было обусловлено отсутствием или нормальным проявлением специфических изменений в половых органах в ответ на введение простагландина и степенью раскрытия цервикального канала, значение ее в успехе оплодотворения было очевидным.

При выборе места размещения спермы учитывают возможность воздействия и других факторов. Слизистая оболочка шейки менее чувствительна к повреждениям, чем слизистая оболочка тела и рогов матки. Поэтому по мере увеличения глубины введения инструмента в половые пути увеличивается и опасность их травмирования. Вместе с этим повышается и опасность инфицирования. Ряд инфекций легче передается при осеменении в матку зараженной спермой, но заражение почти невозможно при введении такой спермы в шейку матки. Это связано с антибактериальными свойствами цервикального секрета. При цервикальном осеменении устраняется и опасность вызывания прерывания беременности, наступившей ранее. А такая опасность существует, так как около 4,5% стельных коров проявляют течку и могут быть осеменены. Такое случайное осеменение в тело или рога матки приводит к прерыванию беременности. Все эти обстоятельства указывают на то, что наиболее рациональным при этом способе осеменения является введение спермы в переднюю часть шейки матки.

Результативность ректо-цервикального способа осеменения коров и телок выше, чем других способов. При благоприятных условиях при первом осеменении после отела оплодотворяется 55-60% и более коров, т.е. столько же, сколько и после естественного осеменения. Это, а также использование одноразового стерильного инструмента или минимального количества инструмента многоразового пользования и легкость его стерилизации, предупреждение раздражения, травмирования и инфицирования половой системы, приспособленность ко всем технологиям расфасовки и хранения спермы, контролируемое введение спермы в половые пути и небольшие затраты труда и времени при осеменении животного являются основными достоинствами ректо-цервикальноги способа.

Мано-цервикалъный способ применяется только для осеменения коров с достаточно широким половым каналом. Животных с узким каналом, а также телок целесообразно осеменять другими способами.

При осеменении мано-цервикальным способом сперму вводят в канал шейки матки с помощью короткого полиэтиленового катетера с присоединенной к нему ампулой непосредственно рукой. На руку надевают стерильную полиэтиленовую перчатку. Для введения спермы в облицовячных гранулах используется специальный инструмент – зоошприц, который состоит из цилиндрического корпуса, съемного фланца и толкателя (рис. 52).

Сначала готовят животное: фиксируют хвост, наружные половые органы обмывают теплой водой (при необходимости с мылом) и дезинфицируют раствором фурацилина. Техник-осеменатор извлекает из упаковки полиэтиленовую ампулу, срезает колпачок наискось острым скальпелем или ножницами и соединяет ампулу с катетером. Затем набирает сперму, опять вкладывает в упаковку и кладет на подставку. На руку надевает полиэтиленовую перчатку, увлажняет ее 1%-ным раствором натрия хлорида или натрия гидрокарбоната и осторожно вводит во влагалище коровы. После нахождения влагалищной части шейки матки пальцами обхватывает ее и, поворачивая руку относительно продольной оси в одну и другую стороны, делает массаж. В это время корова обычно успокаивается и до конца осеменения стоит неподвижно. Шейка матки и матка периодически сокращаются. В момент расслабления матка проявляет всасывающую функцию. В это время техник,

не вынимая кисти руки из влагалища, другой рукой подает подготовленный для осеменения инструмент и располагает его на ладони так, чтобы большой палец прижимал ампулу, а кончик катетера находился вблизи указательного пальца. Не меняя положения инструмента, вводит кисть руки до шейки матки и под контролем указательного пальца продвигает катетер на глубину 1,5-2 см в цервикальный канал. Затем^ кончиками пальцев снова начинает массировать шейку матки, а ладонью подталкивает ампулу так, чтобы катетер вошел в канал на всю глубину (6-7 см). После этого ампулу приподнимает вверх на 2-3 см и выдавливает сперму из нее большим и указательным пальцами в момент расслабления матки (рис. 53). Чтобы сперма не оставалась, ампулу надо сжимать, начиная с верхнего угла донышка по направлению к шейке. После введения спермы ампулу не разжимают и вместе с катетером извлекают из цервикального канала. Далее рекомендуется инструмент положить на дно влагалища и дополнительно помассировать шейку матки и только после этого извлечь руку с инструментом из влагалища.

Многие считают, что этот способ полнее других имитирует естественное осеменение, а массаж влагалищной части шейки матки снимает оборонительную реакцию самки на введение руки и инструмента, усиливает моторику матки, способствует засасыванию спермы и продвижению ее к яйцепроводам. Это, а также достаточно глубокое введение спермы в цервикальный канал и использование одноразовых стерильных инструментов обеспечивают близкую к стандартной оплодотворяемость коров – около 55%. Однако при недостаточной асептике возникает опасность инфицирования половых путей коровы.

Объем вводимой спермы и число спермиев в дозе При цервикальном методе осеменения животному необходимо ввести такое количество спермы, которое бы полностью разместилось в складках слизистой оболочки шейки матки. В зависимости от способа расфасовки спермы и конструкции инструмента для осеменения корове или телке вводят от 0,25 до 1,2 мл разбавленной спермы. При использовании полипропиленовых соломинок та часть инструмента, в которой располагают соломинку, почти целиком вводится в шейку матки, и сперма без потерь выдавливается стилетом (толкателем) в канал шейки матки. Объем ее минимальный и обычно составляет 0,25 мл. При визо-цервикальном способе используют длинный стеклянный катетер со шприцем. Несмотря на небольшой внутренний диаметр катетера, в просвете его размещается значительное количество спермы, которое остается здесь после осеменения. Чтобы ввести в шейку матки хотя бы минимальное количество спермы, необходимо увеличить объем дозы. Это достигается за счет оттаивания гранулы объемом 0,2 мл в 1 мл изотонического раствора натрия цитрата или за счет увеличения объема гранулы до 0,5 мл при замораживании спермы.

Количество подвижных спермиев в дозе при глубоком введении спермы в канал шейки матки может быть ограничено 10 млн. (в отдельных случаях допускается 8 млн.), но при введении в задний участок цер-викального канала (при визо-цервикальном способе) целесообразно увеличение числа спермиев в дозе до 15-20 млн. Это позволяет при благоприятных обстоятельствах достигнуть максимально возможной для данного способа осеменения оплодотворяемости самок. Увеличение же объема спермы или количества подвижных спермиев в дозе не приведет к повышению результатов.

Оптимальное время осеменения. Одним из главных условий достижения высокой оплодотворяемости является правильный выбор времени осеменения в период половой охоты. При выборе оптимального времени для осеменения учитывают следующие факторы:

сроки выхода яйцеклетки из фолликула (по отношению к началу или концу охоты), приобретение готовности к оплодотворению и продолжительность сохранения способности к оплодотворению;

время, необходимое для приобретения спермиями готовности к оплодотворению (капацитации), и продолжительность жизни их в половых путях самки;

последовательность изменений условий среды в матке и яйцепроводах самки в период половой охоты и влияние этой среды на передвижение и выживаемость спермиев.

Благоприятные возможности для оплодотворения создаются в том случае, когда введение спермы в половые пути самки и овуляция будут взаимосвязаны во времени, а в половых клетках произойдут соответствующие изменения. Средой для таких изменений в гаметах является секрет яйцепроводов и матки. Воздействие секрета важно для начала акросомной реакции в спермиях и выхода ферментов гиалуронидазы и акрозина. И хотя окончательные изменения в спермиях происходят только после проникновения ими через оболочки яйцеклетки, подготовка к ним протекает раньше. Для того чтобы такие предварительные изменения произошли, спермиям быка необходимо побыть в половых путях самки по крайней мере 6-8 ч. Секрет шейки матки более важную роль играет в механизме передвижения спермиев. Кроме того, шейка матки является важнейшим резервуаром спермиев, особенно в первые 24 ч после осеменения. Вначале половой охоты цервикальный секрет водянистый, обильный, а спустя 6 ч после окончания охоты его немного и он слишком вязкий. Эти периоды не являются подходящими для осеменения. Наиболее благоприятны последние 12 ч перед окончанием охоты. В течение 8 ч после осеменения спермин из первичного депо (шейки матки) поступают и накапливаются в достаточном количестве в перешейке яйцепроводов; распределение их становится упорядоченным, хотя группировка может продолжаться и дольше, капацитация завершается. До овуляции остается менее суток и возможности сохранения оплодотворяющей способности спермиев достаточно хорошие. Выход же яйцеклетки стимулирует активность спермиев и часть из них вскоре оказывается в ампуле вблизи места оплодотворения. В лучистом венце яйцеклетки к моменту вхождения в ампулу яйцепровода начинаются такие изменения, которые облегчают прохождение спермиев между клетками. Способность к оплодотворению у яйцеклетки сохраняется в течение менее 12 ч, и поэтому осеменение даже после окончания охоты в течение 6 ч (т.е. за 4-6 ч до овуляции) нередко оказывается результативным.

В практических условиях не всегда удается точно определить начало половой охоты и поэтому рекомендуется осеменение проводить вскоре после выявления (утром или вечером), а затем повторно через 10-12 ч. Однако такое двукратное осеменение не имеет преимуществ перед однократным, проводимым в оптимальное время.

Организация осеменения в хозяйствах. В Беларуси и других странах СНГ в скотоводстве применяются следующие формы организации искусственного осеменения маточного поголовья: стационарная, внутрихозяйственная маршрутно-кольцевая и кооперативная. Внедрение той или иной формы обусловлено размерами фермы, системой содержания животных, производственным направлением и специализацией, организацией труда и наличием кадров.

Стационарная форма распространена более широко. Применяется она в крупных комплексах по выращиванию нетелей и производству молока, на других фермах с привязным содержанием и поголовьем более 200 коров и телок. При этой форме специалист по осеменению (техник-осеменатор) включен в штатное расписание фермы. В его обязанности входит выявление маток в охоте и осеменение, оказание помощи ветеринарным специалистам в проведении акушерской и гинекологической диспансеризации коров и телок и лечении бесплодных животных. Кроме того, совместно с бригадиром фермы он составляет графики запуска и отелов, ведет учет и нумерацию новорожденных. При наличии на ферме менее 100 коров обязанности техника-осеменатора по совместительству исполняет бригадир.

Нередко за техником-осеменатором закрепляют две или даже три близко расположенные небольшие фермы. Обслуживание их одним человеком составляет элемент внутрихозяйственной маршрутно-кольцевой формы- Однако в полном объеме эта форма предполагает обслуживание одним или группой специалистов всех ферм в хозяйстве. Для такой работы привлекаются, как правило, высококвалифицированные ветеринарные врачи, зооинженеры, ветфельдшеры со специальной подготовкой. В их распоряжение выделяют автомобиль и необходимое оборудование. По установленному маршруту и в строго определенное время специалист по осеменению посещает все фермы и проводит осеменение выявленных в охоте коров и телок. Выявление животных в охоте проводится бригадиром и другими работниками ферм. Выбранных животных они переводят в места для осеменения или же соответствующим образом метят и записывают в журнал. После приезда на ферму техник-осеменатор исследует выделенных животных и при наличии у них признаков половой охоты осеменяет и делает необходимые записи в журнале.

При этих двух формах организации осеменения и наличии в хозяйстве или на одной крупной ферме (комплексе) большого числа коров и телок (более 600-800 животных) создается звено (группа) по воспроизводству. В состав звена помимо одного или нескольких техников-осеменаторов включают ветврача-гинеколога и зоотехника-селекционера. На звено возлагается обязанность осуществлять всю работу по воспроизводству животных в хозяйстве; осеменять маток и вести учет результатов осеменения, проводить акушерскую и гинекологическую диспансеризацию и лечение животных с заболеваниями половых органов, отбирать животных для выбраковки и т.д.

При кооперативной форме осеменение животных проводится специалистами кооперативов. Кооперативы создаются заинтересованными хозяйствами на базе госплемпредприятий или районных станций по племенной работе и искусственному осеменению. В штат кооператива включают высококвалифицированных специалистов, владеющих ректо-цервикальным способом осеменения и имеющих опыт работы по воспроизводству животных. За одним специалистом закрепляют несколько ферм одного или двух хозяйств с общим числом животных, подлежащих осеменению, до 1800. Посещение ферм проводится по установленному маршруту, протяженность которого не должна превышать 120 км. В зависимости от объема работы кооператив формирует два-три или более маршрутов. В обязанности специалиста, обслуживающего маршрут, входит не только осеменение животных, но и учет результатов осеменения, проведение диагностики стельности и бесплодия, выявление причин нарушения воспроизводительной функции и разработка мероприятий по их устранению.

Осеменение овец сезонное: при планировании ягнения в январе осеменение маток проводят в августе, при ягнении в феврале - осеменяют в сентябре. Благоприятные условия осени способствуют повышению плодовитости по сравнению с другими периодами на 15-20%. Осеменение проводят на протяжении двух половых циклов (35-40 дней). По окончании работы пункта организуют вольную случку маток, неоплодотворившихся после искусственного осеменения. В племенных хозяйствах для этой цели в течение 15-25 дней используются бараны, по качеству не уступающие основным, в других хозяйствах - не ни

Наглость – это ругаться с преподавателем по поводу четверки, хотя перед экзаменом уверен, что не знаешь даже на два. © Неизвестно
==> читать все изречения...

2611 -

| 2185 -

Компоненты среды	Быка				Жеребца	Барана
	ЛЖГ	ЛГЖ1	ЛГЖ2	ЛФРМГЖ	ЛХЦЖ	ВИКА	ГЖУК	ЛЖГТЦГ
Вода дистиллированная, мл Лактоза, г 11%-ный раствор лактозы или сахарозы, мл Сахароза, г Фруктоза, г Раффиноза пятиводная, г Натрий-кальциевая соль ЭДТА, г Трилон Б, г Трис-(оксиметил)-амино-метан, г Натрий лимоннокислый, г Магний сернокислый, г Гидрокарбонат натрия, г Лимонная кислота, г Гуммиарабик, г Ксилит, г Декстрин, г Токоферол (25-30%-ный масляный раствор), мл Желток куриного яйца, мл Глицерин, мл Спермосан-3, тыс. ЕД Способ расфасовки спермы	100 11,5 20 5 50,0 гранулы	63 30,0 7,0	100 6,0 1,4 5,0	1000 80,5 12,0 19,5 0,1 200 50 500-700 соломинки	100 11,0 0,1 0,089 0,008 2,0 1,6 3,5 25-30 гранулы, пакеты	до 100 9,84 0,84 10,0 5,0 25 гранулы	100 8,4 0,135 0,105 0,26 5,0 20,0 6,0 25 гранулы	100 14,5 0,6 0,27 6,0 20,0 17,0 25 гранулы
		облицованные гранулы