Вирусологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций и гриппа

Грипп – это острое инфекционное заболевание, протекающее с выраженной общей интоксикацией и поражением респираторного тракта, возбудителями которого являются РНК-содержащие вирусы семейства Ortho-myxoviridae (род Influenzavirus, типы А, В и С).

Возбудителями ОРВИ являются разнообразные многочисленные вирусы (более 200), вызывающие у людей катар верхних дыхательных путей с различной степенью интоксикации. Наиболее часто ОРВИ вы­зывают вирусы парагриппа, аденовирусы, реовирусы, коронавирусы, риновирусы, энтеровирусы,.

Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ состоит из экспресс-методов, выделения вируса, серологического исследования и метода генодиагностики (ПЦР) - схема 19.

Материалами для исследования при гриппе служат смывы из носоглотки, отде­ляемое слизистой оболочки носа, кро­вь, спинномозговая жидкость, трупный материал. При ОРВИ, вызванных вирусами парагриппа, РС вирусом, корона-, рео- и аденовирусами, исследуемым материалом являются носоглоточные смывы и отделяемое слизис­той оболочки задней стенки глотки, взятое ватным тампоном. Адено-, энтеро- и реовирусы удается обнаружить в крови, моче, фекалиях, трупном материале, а энтеровирусы в спин­номозговой жидкости.

Схема 19. Вирусологическая диагностика гриппа и ОРВИ

Экспресс-диагностика направлена навыявлениев исследуемом материале антигенов вирусов

Экспресс-диагностика гриппа и ОРВИ основана на выявлении антигенов вирусов с помощью прямой и непрямойРИФ. Положительная реакция характеризуется наличием в клетках эпителия скоплений антигена вируса с ярким зеленым свечением. Реже применяются РОНГА и ИФА.

Выделение вируса при гриппе проводится на РКЭ или на культуре клеток (почек обезьян, фибробластов эмбриона человека или кур; в последние годы используется культура клеток легких собаки - MDSK, обладающая высокой чувствительностью к вирусу гриппа). Поскольку с 4 дня болезни содержание вируса гриппа в организме резко снижается, вирусологическое исследование необходимо выполнять в первые дни инфекции.

Исследуемый материал, обработанный антибиотиками, вводят по 0,2 мл 10—11-днев­ным куриным эмбрионам в полость амниона и аллантоиса. После инкубации эмбрионов в течение 3-4 дней при температуре 37⁰ С, их вскрывают и аллантоисную жидкость отсасывают шприцем или пастеровской пипеткой, амниотическую — шприцем с короткой иглой. Индикацию вируса гриппа в указанных жидкостях проводят с помощью РГА с 1% взвесью куриных эритроцитов. Индикацию вируса в культуре клеток осуществляют по ЦПД, а также с помощью РИФ и РГадс с эритроцитами морской свинки.

При ОРВИ выделение вирусов обычно проводится на первично-трипсинизированных и перевиваемых культурах ткани различного происхождения. Наличие вируса в клетках культуры ткани определяют по его цитопатическому действию, которое у вируса парагриппа и РС вируса проявляется образованием синцития, а у аденовирусов и реовирусов - появлением зернистости и включений в цитоплазме.

Идентификацию вирусов гриппа и ОРВИ выполняют с помощью РТГА, РСК, РН, ИФА, РТГадс.

Серологический метод заключается в определении антител в парных сыворотках крови больных гриппом с помощью РСК, РТГА, ИФА, РРГ, РН. Нарастание титра антител в 4 и более раз подтверждает диагноз гриппа.

Генодиагностика. Для диагностики гриппа разработана ПЦР.