1. Выделение чистой культуры аэробов (продолжение, начало смотрите на предыдущих занятиях).
Изучить культуру на скошенном МПА. Для проверки чистоты культуры вначале оценивают характер роста визуально, делают мазок и окрашивают его по Граму. Следует просмотреть несколько полей зрения, активно передвигая препарат в разных направлениях. Если культура чистая, ее засевают на короткий "пестрый" ряд (среды Гисса) с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом, а также на МПБ. Техника посева: в левую руку помещают одновременно две пробирки наклонно с пробками на одном уровне; пробирка с культурой на скошенном МПА находится ближе к нам, а вторая, со средой, куда будет пересеваться культура, располагается кнаружи. Бактериологическая петля стерилизуется в пламени спиртовки, мизинцем правой руки открывают обе пробки сразу, вводят петлю в пробирку с культурой на скошенном МПА, берут культуру бактериологической петлей и переносят в засеваемую среду. Закрывают пробками обе пробирки одновременно, правой рукой ставят в штатив засеянную пробирку и заменяют ее следующей пробиркой пестрого ряда. Последовательно культурой со скошенного МПА засевают все пробирки «пестрого» ряда и МПБ.
Для определения протеолитических свойств бактерий производят посев культуры на пептонную воду с целью обнаружения продуктов расщепления пептона: аммиака, индола, сероводорода.
Реакции на аммиак и сероводород. После посева культуры на пептонную воду узкую полоску лакмусовой бумаги для обнаружения аммиака и полоску фильтровальной бумаги для обнаружения сероводорода, пропитанную ацетатом свинца, укрепляют под пробкой так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой.
Реакция на индол (способ Эрлиха). После посева культуры в пробирку прибавляют 2 - 3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор параметиламидобензальдегида с хлористоводородной кислотой). При наличии индола наблюдается окрашивание среды в розовый цвет.
Пробирки подписывают в соответствии с инициалами студента или номером по списку группы, помещают в штатив, а затем в термостат. Результаты работы заносят в протокол. Работа по выделению чистой культуры аэробов будет закончена на следующем занятии.
2. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы (демонстрация).
· изучение характера роста культур анаэробов в столбике МПА (для анаэробов характерно образование дисковидных колоний или колоний в виде клочков ваты, газообразование);
· для выделения чистой культуры анаэробов пробирку со столбиком МПА прогревают над спиртовкой, столбик агара переносят в стерильную чашку Петри. Изолированную колонию петлей засевают в среду Китт-Тароцци;
· изучение характера роста анаэробных бактерий в трубках Вейон-Виньяля (демонстрация);
· учет биохимических свойств различных видов патогенных анаэробов на средах Гисса с углеводами: отмечают ферментацию углеводов, газообразование; результаты заносят в протокол № 2.
Учет характера роста возбудителя газовой гангрены (Clostridium perfringens) на среде Вильсон-Блера и на молоке (демонстрация). Среда Вильсона-Блера состоит из МПА, глюкозы, хлористого железа. Возбудитель газовой гангрены восстанавливает сернисто-кислый натрий до сульфида натрия, который вступает в реакцию с хлорным железом, переводя его в сернистое железо, имеющее черный цвет. Разрывы питательной среды объясняются образованием газа при расщеплении глюкозы. Молоко быстро свертывается, при этом образуется пористый сгусток, выделяются пузырьки газа, среда просветляется. Изменения на указанных средах наступают быстро - через 3-6 часов.
3. Изучение характера роста Proteus vulgaris. Ha скошенном МПА (посев по Шукевичу). Окончание работы, начатой на предыдущем занятии. Наблюдается подвижность бактерий протея в препарате "раздавленная капля" (самостоятельная работа). Дать заключение по результатам исследования.
Тема 7. ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО ТЕМЕ "МОРФОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ»
