1. Выделение чистой культуры аэробных бактерий от потенциального носителя золотистого стафилококка (самостоятельная работа). Продолжить работу по бактериологическому исследованию, начатую на предыдущем занятии: рассмотреть чашку с выросшими колониями и обвести карандашом по дну различные типы колоний, у которых изучить культуральные свойства в соответствии с таблицей 3.
Учитываются следующие признаки колоний:
· размер (измеряется миллиметровой полоской со стороны дна диаметр колонии);
· форма (круглая, неправильная);
· цвет (красный, желтый и т.д.). Беспигментные колонии имеют оттенок среды, например сероватый на МПА;
· поверхность (выпуклая, плоская, блестящая, матовая, гладкая, шероховатая);
· край (ровный, изрезанный, волнообразный, фестончатый). Колонии зарисовать.
Таблица 3. Характеристика колоний бактерий
| Признаки колоний | Описание свойств колоний |
| Размер | Проводится измерение диаметра колоний |
| Форма | Круглая, неправильная |
| Цвет | Красный, желтый и т.д. Беспигментные колонии имеют оттенок среды, например, сероватый на МПА |
| Поверхность | Выпуклая, плоская, блестящая, матовая, гладкая, морщинистая, шероховатая, исчерченная и т.д. |
| Структура | Чашка Петри с ростом колоний кладется дном вверх на предметный столик микроскопа и колония изучается у ее края при малом увеличении с опущенным конденсором. Структура может быть гомогенной, мелко-, крупно-, неравномерно-зернистой, волокнистой |
| Край | Изучается вместе со структурой. Может быть ровным, изрезанным, волнообразным, фестончатым |
| Консистенция | Определяется при взятии петлей для приготовления мазка. Консистенция может быть слизистой (культура тянется – подозрение на наличие капсулы), влажная (легко берется) и сухая (крошится – подозрение на спорообразующие бактерии) |
| Тинкториальные (отношение к окраске) и морфологические свойства | Изучаются соответствующие свойства бактерий, находящихся в колонии |
Для дальнейшего изучения выбирают одну из колоний. С целью сохранения и накопления выделенной чистой культуры сделать пересев из колонии на скошенный МПА.
Техника пересева: снять крышку чашки, взять чашку в левую руку в вертикальном положении, посевом обратив к себе. Стерильной петлей взять из центра колонии культуру и засеять на скошенный МПА зигзагообразной линией, двигаясь снизу вверх. Прокалить петлю в пламени спиртовки, аккуратно подписать пробирку в верхней трети и поместить ее в термостат на сутки. Результаты исследования занести в протокол. Работа будет продолжена на следующем занятии.
6. Изучение методов культивирования анаэробов и ознакомление с аппаратурой, используемой с этой целью (демонстрация).
Культивирование анаэробов проводят в бескислородных условиях, для чего с целью удаления кислорода к питательным средам добавляют кусочки печени, а также редуцирующие вещества (сульфат железа, глюкоза и др.).
Наиболее широко в бактериологической практике применяются следующие методы культивирования анаэробов:
· Метод Вейнберга (на сахарном МПА столбиком). В расплавленный МПА в пробирке бактериологической иглой или петлей добавляют исследуемый материал, тщательно перемешивают содержимое пробирки, охлаждают. В нижней части пробирки создаются оптимальные условия для роста анаэробов,
· Метод Вейон-Виньяля. Готовят разведения исследуемого материала в нескольких пробирках с МПА, затем содержимое каждой пробирки набирают в специальную стеклянную трубку, один конец которой вытянут в виде капилляра (как у пастеровской пипетки), а другой конец имеет сужение. После заполнения трубки капилляр запаивают в пламени спиртовки, а суженную часть трубки закрывают кусочком ваты. Трубку охлаждают, помещают в термостат. Через 2-3 дня в столбике МПА вырастают колонии анаэробов. Напильником делают надрез выше уровня намеченной колонии, трубку надламывают, колонию извлекают из агара петлей и пересевают на среду Китт-Тароцци.
· Выращивание в анаэростатах - в металлических или пластмассовых сосудах с герметически закрывающейся крышкой, воздух из которых отсасывается с помощью разрежающего насоса или заменяется газовым составом.
· Создание анаэробных условий в эксикаторах (герметически закрывающиеся стеклянные сосуды) с использованием химических поглотителей кислорода или заменой кислорода инертным газом.
· Биологический метод культивирования анаэробов (по Фортнеру). На одну половину чашки Петри с МПА засевают культуру аэробов, на другую - анаэробов. Бортики чашки оклеивают лейкопластырем, посев ставят в термостат. Сначала вырастают аэробы, потом анаэробы.
2. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы (демонстрация):
· изучение характера роста на среде Китт-Тароцци;
· изучение морфологических и тинкториальных свойств микроорганизмов, выросших на среде Китт-Тароцци; приготовление мазка, окраска его по Граму, микроскопия. Обратить внимание на наличие в микропрепарате крупных, расположенных беспорядочно или короткими цепочками, грамположительных палочек; выполнить посев одной петли материала со среды Китт-Тароцци в высокий столбик МПА, расплавленного на водяной бане и остуженного до 45° С. Результаты исследования занести в протокол.
3. Выделение чистой культуры протея по методу Шукевича (самостоятельная работа). Произвести посев исследуемого материала петлей в конденсационную воду скошенного МПА. Ход исследования отразить в протоколе.
