Электрофоретические исследования

Исследование содержания белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на фильтро­вальной бумаге проводится при изучении активности за­болеваний.

Поиски более точных критериев определения активно­сти воспалительного процесса вызваны тем, что сущест­вующие методы оценки активности процесса недостаточ­но объективны и чувствительны. Изменение содержания белковых фракций, особенно а_г и а₂-глобулинов, расце­нивается как показатель активности воспалительного процесса. При острых воспалительных процессах в сыво­ротке крови возрастает количество а- и особенно аг-гло-булинов. При переходе процесса в хронический содержа­ние a-глобулинов нормализуется, а у-глобулинов увели­чивается. Повышение количества иг-глобулинов имеет ме­сто при процессах, сопровождающихся экссудацией, рас­падом, некрозом и при всех воспалительных изменениях.

Глобулины тесно связаны с образованием антител и иг­рают большую роль в иммунологических реакциях орга­низма.

Данные о состоянии белков крови можно использо­вать, решая вопрос об активности процесса и эффектив­ности лечения при туберкулезе различных локализаций. Нарушение обмена веществ в организме и изменение хи­мизма крови имеют место при различных формах и в раз­ных фазах туберкулезного процесса. Нарушения в орга­нах и тканях соответственно отражаются на биохимиче­ских показателях крови. При туберкулезе легких у всех больных в фазе обострения наблюдались закономерные сдвиги в показателях обмена веществ: снижение уровня белка и диспротеинемия, снижение уровня альбуминов и увеличение содержания сц-, aj- и ^-глобулинов [Рози-на Р. П. и др., 1962; Слеповронский Б. В., 1964, и др.]. При затихании процесса наблюдались увеличение коли­чества альбуминов, нормализация содержания аг-глобу-линов, сдвиги в сторону нормализации уровня у-глобули-нов.

Тяжесть процесса отражалась на сроках нормализа­ции протеинограммы. У больных туберкулезным менин­гитом и туберкулезом почек получены аналогичные дан­ные об изменениях в протеинограмме при активном про­цессе и при эффективном лечении.

При изучении других показателей в активной стадии легочного туберкулеза легких — содержания глюкопро-теидов с помощью дифениламиновой реакции (ДФА), гиалуроновой кислоты, гиалуронидазы, реакции гемаг-глютинации Мидлбрука —Дюбо — получены следующие данные: ДФА была положительной при активном тубер­кулезе примерно в половине случаев. Повышение содер­жания гиалуроновой кислоты было непостоянным. Со­держание гиалуронидазы изменялось мало. Таким обра­зом, диагностическая ценность этих исследований имеет относительное значение.

Большой опыт по изучению биохимических сдвигов, наблюдаемых на различных стадиях течения туберкулеза легких, не может быть целиком использован при тубер­кулезе глаз, поскольку специфический процесс в различ­ных органах и тканях протекает с особенностями, прису­щими различным тканям.

В офтальмологии возрастает интерес к углубленному изучению иммунобиологического состояния, биохимиче­ских сдвигов в организме на разных этапах воспалитель-

ного процесса, а также нарушений обменных процессов. Это вызвано тем обстоятельством, что существующие ме­тоды диагностики и определения степени активности про­цесса недостаточно чувствительны. Исследования прово­дились с целью разработки более чувствительных и объ­ективных методов, характеризующих воспалительный процесс в различных отделах глаза, в большинстве слу­чаев— для определения биохимических показателен вла­ги передней камеры и сыворотки крови.

Большой интерес представляли исследования проте-инограммы влаги передней камеры и сыворотки крови для суждения о течении воспалительного процесса в гла­зу. При активных иритах ревматической этнологии в про-теинограммах влаги передней камеры отмечались сниже­ние количества альбуминовых и у-глобулиновых фракций и увеличение содержания а-глобулинов. При хрониче­ских заболеваниях в протеинограммах сыворотки крови и влаге передней камеры наблюдались увеличение содер­жания альбуминовой и снижение уровня а- и у-глобули-новой фракций.

I. Francois и S. Evan (1958) разработали метод мик­роэлектрофореза влаги передней камеры. Проведенные ими исследования показали, что содержание белковых компонентов в камерной влаге и сыворотке крови было неодинаковым: во влаге передней камеры процент альбу­минов был ниже, а процент у-глобулинов выше, чем в сы­воротке, а содержание ^-глобулинов было почти одинако­вым. Повышение содержания у-глобулинов при низком проценте альбуминов наблюдалось при хроническом тече­нии ревматического процесса.

Отечественные офтальмологи изучали протеинограм-му при различных заболеваниях глаз. Г. А. Соколовский (1964) исследовал методом электрофореза протеинограм-мы сыворотки крови у больных различными заболева­ниями глаз (воспалительного, аллергического и дистро­фического характера). При воспалительных процессах различной этиологии отмечено снижение количества аль­буминов и коэффициента А/Г при закономерном нара­стании процентного содержания си- и а₂-глобулиновой фракции; уровень р- и у-глобулинов изменялся незначи­тельно. В фазе затихания процесса увеличивалось содер­жание альбуминов и уменьшалось количество ctr и аг-гло-булиновой фракции. Диспротеинемии при воспалитель­ных процессах имели и прогностическую ценность: если при благоприятном клиническом течении процесса в про-

теинограмме появлялись сдвиги, то наблюдались реци­дивы заболевания. Большой интерес представляют дан­ные автора о различиях в протеинограммах при воспали­тельных¹ и дистрофических процессах. Такие исследова­ния можно проводить в диагностических целях.

При дистрофических процессах в различных тканях глаза до лечения наблюдалось незначительное снижение коэффициента А/Г, повышение содержания си- и аг-гло-булинов, уровень р-глобулинов был не ниже 10%. Уро­вень у-глобулинов не изменялся. Такие нарушения про-теинограммы свидетельствовали о повышенной проницае­мости сосудистой стенки. Нормальное содержание <хг. аг-и у-глобулинов указывало на отсутствие острых и хрони­ческих воспалительных процессов. Изменения протеино-граммы являются важным объективным показателем ак­тивности процесса и иммунологического состояния орга­низма.

Выраженные нарушения белкового обмена вызывают интерес к исследованию фракционного состава сыворо­точных белков как методу, характеризующему неспеци­фические биохимические сдвиги в организме больного ту­беркулезом. При гематогенном метастатическом тубер­кулезе глаз исследованием биохимических данных зани­мались R. Witraer (1953) и С. Recupero (1956), получив­шие протеинограмму сыворотки крови у больных тубер­кулезом глаз. Однако исследования были проведены на небольшом материале и определенной закономерности установить не удалось. А. А. Суконщикова и др. (1958) биуретовым методом определяли содержание белковых фракций и коэффициент А/Г.

И. И. Меркулов и соавт. (1953), С. Я. Сергиенко (1957), Л. П. Бахолдипа (1972) и др. установили соотно­шение белковых фракций при изучении иммунобиологи­ческого состояния больных фликтенулезными керато-конъюнктивитами. У детей и взрослых обнаружены ги-поальбуминсмия и гиперглобулинемия, которые возника­ли в сенсибилизированном организме в результате повы­шенной проницаемости сосудистой стенки. При фликтену­лезных заболеваниях отмечена низкая чувствительность СОЭ и гемограммы. Наиболее объективным показателем, не уступающим реакциям Пирке и Манту, был коэффи­циент А/Г. Как правило, он был снижен. С учетом степе­ни увеличения этого коэффициента можно было оцени­вать терапевтический эффект. Изучение роли показателя А/Г при фликтенулезных заболеваниях имеет определен-

ное значение. Однако по одному показателю нельзя су­дить о стойкости терапевтического эффекта, так как ни один из имеющихся критериев не может в достаточной степени отражать те сложные процессы, которые проис­ходят в организме при выздоровлении.

Е. М. Сластенова и А. Я. Шурыгин (1964) методом амперометрического титрования изучали сульфгидриль-ные группы сыворотки крови у больных туберкулезом глаз. Обнаружено снижение сульфгидрильной активно­сти сыворотки крови, что свидетельствует об ослаблении окислительно-восстановительных процессов в организме.

Полученные результаты явились основанием для при­менения с лечебной целью серосодержащего препарата — 30% раствора тиосульфата натрия. Отмечено благопри­ятное действие препарата при комплексном лечении больных туберкулезом глаз.

Для изучения неспецифической резистентности орга­низма определяли содержание лизоцима и комплемента в сыворотке крови. У половины больных наблюдалось заметное падение содержания лизоцима в сыворотке кро­ви. Эти данные показывают, что у больных туберкулезом⁷ глаз нередко наступает ослабление защитных сил орга­низма [Сластенова Е. М., 1964].

Большой интерес представляет проведенное автором исследование функций коры надпочечников. Повышенное или, реже, пониженное содержание 17-кетостероидов в моче, нередко наблюдаемое у больных туберкулезом глаз, и отрицательная проба Торна отмечены почти в ²/з случаев. Эти данные свидетельствовали о том, что в раз­личных отделах глаза туберкулезный процесс нередко протекает на фоне нарушения функции коры надпочечни­ков. Наблюдения Е. М. Сластеновой показывают, что при тяжелом рецидивирующем течении туберкулеза глаз це­лесообразно исследовать функции коры надпочечников.

Изменения протеинограмм были более выражены при тяжелых туберкулезных процессах со склонностью к рас­пространению на соседние ткани. Таким образом, опреде­ление сывороточных белков крови методом электрофоре­за является объективным показателем при комплексном изучении иммунобиологического состояния организма, а также характера, тяжести и прогноза туберкулезных за­болеваний глаз. Изучение диспротеинемии, а также спе­цифической и неспецифической реактивности организма при заболеваниях глаз проводилось в основном для ха­рактеристики острой фазы воспалительного процесса

(влага передней камеры, сыворотка крови, слезная жид­кость). При хронических и неактивных процессах и в пе­риод выздоровления исследования не проводились. Но-именно на основе этих процессов, клинически трудно вы­являемых, но активных, в дальнейшем развиваются реци­дивирующие и прогрессирующие формы заболевания.

Активный воспалительный процесс имеет четко выра­женную симптоматику, которую можно выявить различ­ными методами исследования. При хроническом, вяло те­кущем процессе эта симптоматика гораздо беднее и обна­руживается только при использовании более совершен­ных методов. Но наибольшие трудности представляют те случаи, когда признаки активности воспалительного про­цесса отсутствуют, однако процесс сохраняет определен­ную активность.

Такие процессы, которые имеют бедную симптомати­ку, требуют наиболее детального изучения, так как имен­но они являются источником неблагоприятно текущих форм туберкулеза глаз. В этих случаях только примене­ние комплекса информативных современных методов ис­следования реактивности и иммунологического состояния организма, а также характера воспалительного процесса в тканях глаза позволяет правильно оценить степень из­лечения процесса.

При туберкулезе глаз нередко такое видимое отсут­ствие активности воспалительного процесса заставляет сделать ошибочный вывод о клиническом излечении за­болевания и прекратить лечение в тех случаях, когда чув­ствительные методы позволяют определить явно не за­конченный воспалительный процесс. Трудно ожидать стойкого лечения, если терапия была закончена при на­личии активного процесса в глазу или в отсутствие ста­билизации туберкулезного процесса в организме.

Из арсенала методик, способных отражать течение минимальных воспалительных изменений, наиболее чув­ствительны электрофоретические исследования белковых фракций сыворотки крови в динамике. Мы изучали про-теинограмму у больных туберкулезом глаз при активных и малоактивных процессах, в период обострения и клини­ческого выздоровления. Общий белок крови определяли общепринятым методом рефрактометрически. Только у 4% больных туберкулезом глаз в различные периоды за­болевания выявлено незначительное повышение количе­ства общего белка крови. После подкожного введения туберкулина процентное содержание общего белка крови

Ю Заказ J* 1384

незначительно изменялось, оставаясь на уровне нормаль-иых цифр. Полученные результаты показывают, что при туберкулезе глаз общий белок крови, как правило, оста­ется в пределах нормы и не отражает активности и дина­мики процесса. Белковые фракции сыворотки крови ме­тодом электрофореза исследовали у больных метастати­ческим туберкулезом глаз и в контрольной группе. У большинства больных исследования проводили много­кратно.

В зависимости от стадии процесса больные туберку­лезом глаз были разделены на группы: 1) с активным процессом; 2) с малоактивным процессом; 3) с неактив­ным процессом.

У всех больных с активным процессом и обострением заболевания электрофореграмма была изменена в раз­личной степени по сравнению со средними показателями здоровых лиц.

В большинстве наблюдений изменения электрофоре-траммы находились в соответствии с клинической фазой процесса. При активном воспалительном процессе на­блюдались понижение количества альбуминов и увеличе­ние содержания а₂- и -у-глобулиновой фракций. Уровень глобулиновых фракций изменялся незначительно. Содер­жание а,-глобулиновой фракции понижалось. Коэффици­ент А/Г отклонялся от нормы как в сторону понижения, так и в сторону повышения. При малоактивных и неак­тивных процессах содержание альбуминов увеличива­лось, а]-, а₂- и р-глобулиновых фракций изменялось не закономерно, а -у-плобулиновых фракций оставалось по­вышенным.

В фазе затихания процесса при клиническом излече­нии с формированием незначительных остаточных изме­нений после курса лечения сдвиги в протеинограмме стойко нормализовались. Однако, отражая активность воспалительного процесса в организме больного туберку­лезом, данные электрофореграммы белкового состава сыворотки крови не позволили установить, какой же из очагов (в легких, глазах, лимфатических узлах, почках или других органах) активен.