К важнейшим условиям выращивания микроорганизмов на питательных средах относятся температура, свет, аэрация среды.
4.4.1 Температура. Для оптимального развития микроорганизмов необходима температура, соответствующая видовым потребностям культуры. По отношению к температуре микроорганизмы подразделяются на холодолюбивые (психрофилы), среднетеплолюбивые (мезофилы) и теплолюбивые (термофилы).
Оптимальные температуры развития психрофилов составляет 6-10оС, но некоторые могут развиваться и при температуре около 0оС. Температурный оптимум для мезофилов составляет 25 - 30оС, а термофилов 50-60оС.
Большинство видов бактерий активно размножаются при температуре 30-37оС, а мицеллиальные грибы – при 20-22оС. При отклонении температуры от оптимальной развитие микроорганизмов задерживается. Поэтому для выращивания микроорганизмов используются специальные приборы – термошкафы с термоизоляцией, способные поддерживать постоянную температуру, соответствующую потребностям культур. Такие приборы называются термостатами.
4.4.2 Свет. Большинство микроорганизмов не нуждаются в свете, а прямые солнечные лучи подавляют их развитие. В связи с этим микроорганизмы выращивают в неосвещенных термостатах.
4.4.3 Аэрация. Потребности в свободном кислороде у микроорганизмов неодинаковы. Аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы выращивают в обычных условиях воздушной среды. Культивирование строгих анаэробов должно производиться в бескислородных условиях, которые создаются различными приемами.
Для культивирования анаэробов применяют:
а) специальные приборы – анаэростаты, из которых выкачивают воздух посредством насоса, а затем помещают в термостат;
б) эксикаторы, из которых воздух либо удаляется, либо заменяется инертным газом (азотом, водородом, диоксидом углерода);
в) аппарат Аристовского – герметически замкнутый сосуд, где происходит связывание кислорода воздуха с помощью химических соединений (щелочного раствора пирогаллола, металлического железа и т.д.);
г) выращивание микроорганизмов в жидкой среде – пробирке 10-15см3, залитой слоем стерильного индиффирентного (вазелинового) масла или парафина;
д) розливка среды в узкие пробирки высоким столбиком;
е) совместное выращивание анаэробов и аэробов, обильно поглощающих кислород в герметично залитой парафином чашке Петри.
4.4.4 Сроки культивирования. Большинство культур аэробных бактерий выращивают в течение 24-36ч, анаэробных – 36-72ч, плесневые грибы культивируют в течение недели.
4.4.5 Счет колоний. При небольшом количестве выросших колоний их считают методом прямого счета, с помощью лупы, отмечая сосчитанные колонии восковым карандашом. Для удобства чашки Петри можно разделить на равные сектора, подсчитать количество колоний в одном секторе и, перемножив это количество на число секторов, можно определить общее число колоний, выросших на чашке Петри. Если количество колоний велико и прямой счет их затруднителен, то можно применять специальные счетные камеры – аппарат Вольфюгеля, пластинки Лафара и др.
Задание:
1) Подготовить пробирки, чашки Петри и пипетки к стерилизации.
2) Приготовить МПА из сухого питательного агара, разлить в пробирки, колбы и простерилизовать в автоклаве.
3) Приготовить агар-«столбик» и агар-«косячок» в пробирках.
4) Разлить МПА в чашки Петри.
5) Произвести посев «штрихом», «уколом» из пробирки в пробирку и посев «газоном» из пробирки в чашку Петри.
6) Оформить протокол исследования, схематически изобразив посев «штрихом», «уколом», «газоном», и представить способы стерилизации в виде следующей таблицы.
Таблица 2 - Способы стерилизации
| Название способа | Где осуще- ствляется | Режимы стерилизации | Для чего применяется | Приме- чание |
К о н т р о л ь н ы е в о п р о с ы:
1) Что представляют собой питательные среды и каким требованиям они должны удовлетворять?
2) Классификация питательных сред.
3) Какие вещества и в каких концентрациях применяются в микробиологической практике для уплотнения питательных сред?
4) Что такое стерилизация и ее основные способы?
5) Что понимаем под термином «дробная» стерилизация и пригодна ли она для стерилизации стеклянной посуды? Обосновать.
6) Что в микробиологической практике называется посевом, пересевом микроорганизмов?
7) Методы посевов (пересевов) микроорганизмов.
8) Какие условия нужны для успешного выращивания микроорганизмов?
9) Способы культивирования анаэробов.
10) Назначение термостата в лаборатории микробиологии.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №5.
