Посевы и пересевы микроорганизмов

Посевом в микробиологической практике называется заражение стерильной питательной среды каким-либо исследуемым материалом (вода, пищевые продукты и т.д.) для выявления микроорганизмов. Пересев – это перенос выращенных микроорганизмов в свежую стерильную питательную среду.

В микробиологической практике используются следующие основные способы посевов (пересевов) микроорганизмов:

а) штрихом – осуществляется бактериологической петлей из пробирки в

пробирку или в чашку Петри;

б) уколом – проводится бактериологической иглой из пробирки в пробирку;

в) газоном – осуществляется шпателем Дригальского в чашке Петри;

г) розливкой.

При посевах (пересевах) культуры необходимо соблюдать стерильность, т.е. предотвращать возможность загрязнения исследуемого материала и питательных сред посторонними микроорганизмами.

4.3.1 Посев штрихом (уколом) из пробирки в пробирку

Техника посева по этапам показана на рис. 3.

а) зажечь спиртовку;

б) взять в левую руку две пробирки: одну, из которой будет проводиться пересев, и другую со свежей питательной средой (ближе к себе), (см. рис.3,а);

 

Рисунок 3 - Посев из пробирки в пробирку

в) прокалить бактериологическую петлю (иглу) в пламени (см. рис.3,а);

г) открыть пробирки, захватив одновременно обе ватные пробки мизинцем правой руки (см. рис.3,б);

д) обжечь края обеих пробирок (см. рис.3,б);

е) внести петлю в пробирку с микроорганизмами и, захватив немного микробной взвеси, перенести ее, не касаясь стенок пробирки, в пробирку со свежей питательной средой (см. рис.3, в,г), т.е произвести посев культуры.

Посев штрихом осуществляется на скошенный агар (агар-косячкок) – петлю осторожно вводят в пробирку до границы конденсационной воды и зигзагообразными движениями распределяют материал по поверхности агара снизу вверх.

Посев уколом осуществляется в агаровый столбик – среду прокалывают бактериологической иглой до дна пробирки.

Посев на жидкие среды – материал, взятый петлей, наносят на стенку пробирки у верхнего уровня среды, и слегка встряхивая пробирку, смывают его средой.

ж) обжечь обе пробирки и края пробирок и одновременно в пламени закрыть обе пробирки (см. рис. 3,д);

з) обжечь петлю в пламени (см. рис. 3,е).

Посев суспензии микроорганизмов можно производить с помощью пипетки. Для этого профламбированной пипеткой набирают жидкость, выпускают ее содержимое (при количественном посеве – определенный объем) в свежую питательную среду. После посева использованную пипетку опускают в сосуд с дезинфицирующим раствором.

 

4.3.2 Посев газоном

Посев газоном используется для изучения поверхностного роста культур. Исследуемый материал наносят петлей или пипеткой на поверхность застывшей питательной среды в чашке Петри и затем равномерно распределяют его по поверхности, пользуясь предварительно простерилизованным шпателем Дригальского.

Левой рукой слегка приподнимают крышку чашки Петри, стоящей на поверхности стола, а правой - вносят в чашку шпатель. Круговыми движениями шпателя распределяют культуру по всей поверхности плотной питательной среды.

 

4.3.3 Посев розливкой

Посев розливкой используют в случае необходимости вырастить микроорганизмы в толще среды (глубинный посев). Глубинный посев можно осуществить двумя способами:

1) Культуру микроорганизмов вносят в пробирки с расплавленной и охлажденной до 40-50^оС плотной питательной средой, а затем выливают эту смесь в чашки Петри;

2) Взвесь микроорганизмов вносят бактериологической петлей или пипеткой непосредственно на дно стерильной чашки Петри, слегка приоткрыв крышку, а затем заливают ее расплавленной и охлажденной до 40-50^оС плотной питательной средой. Среду с культурой тщательно перемешивают круговыми движениями чашки, не поднимая ее с поверхности стола. После этого чашку оставляют на столе до застывания агара.