М е т о д ы с т е р и л и з а ц и и

Стерилизация или обеспложивание (от лат. sterilis – бесплодный) – это процесс полного уничтожения вегетативных форм микроорганизмов и их спор с любых поверхностей. В микробиологической практике стерилизуют стеклянную посуду, питательные среды, инструменты и другие предметы лабораторного обихода.

Различают термическую стерилизацию, обусловленную воздействием на предметы высокой температуры, и холодную стерилизацию, осуществляемую при комнатной температуре (фильтрование, воздействие ультрафиолетовыми лучами, ультразвуком, обработка химическими веществами – антисептиками). В микробиологической практике наиболее часто используются приемы термической стерилизации: прокаливание в пламени спиртовки, стерилизацию сухим жаром, насыщенным паром под давлением, текучим паром и т.д.

Прокаливание в пламени (фламбирование). Этим методом стерилизуют бактериологические иглы, петли, шпатели, пипетки, предметные стекла, пинцеты, ножницы, прокаливая их перед использованием в пламени спиртовки. При этом микроорганизмы, как и все живое, сгорают под действием высокой температуры.

Стерилизация сухим жаром. Этот способ осуществляется в специальном сушильном шкафу при температуре 160-170⁰С в течение 1-2 часов. Действие сухого жара в отсутствие влаги заключается в обугливании микроорганизмов и их спор. Этим способом стерилизуют стеклянную посуду – чашки Петри, колбы, пробирки, пипетки. Перед стерилизацией пробирки и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, чашки Петри и пипетки плотно завертывают в бумагу во избежание попадания на них микроорганизмов из воздуха после окончания термообработки.

Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Это наиболее быстрый и надежный способ стерилизации питательных сред, посуды, халатов, осуществляемый в специальных герметически закрывающихся аппаратах – автоклавах. Сущность метода заключается в обработке материала паром под давлением выше атмосферного. При нормальном атмосферном давлении водяной пар имеет температуру 100⁰С. При увеличении же давления внутри сосуда с горячим водяным паром значительно повышается температура пара (табл. № 1), что ускоряет гибель микроорганизмов и их спор.

Таблица 1 - Режимы стерилизации

Стерилизация текучим паром. Этот способ термической обработки проводится в аппарате Коха и используется для стерилизации питательных сред, изменяющих свойства при температуре выше 100^оС. При этом субстрат вначале нагревают при 100 ^оС (температура кипения воды при нормальном давлении) в течение 1 час. Поскольку при таком режиме погибают только вегетативные формы, то прибегают к трехкратной или дробной стерилизации. При этом в интервале между стерилизациями питательные среды выдерживают в течение 24 часов в термостатах при температуре 28-37^оС для ускорения прорастания содержащихся в среде спор, а полученные вегетативные клетки уничтожаются при последующем нагревании при 100^оС.

Проводить дробную стерилизацию можно и в автоклаве с незавинченной крышкой, когда пар будет свободно выходить из аппарата наружу.

Стерилизация фильтрованием. Сущность метода заключается в пропускании (фильтровании) жидких питательных сред, растворов, изменяющих свои свойства даже при незначительном нагревании, через специальные мелкопористые фильтры, на которых задерживаются микроорганизмы. Чаще всего на практике применяют мембранные фильтры из коллодия, ацетата, целлюлозы, асбестовые фильтры Зейтца, «свечи» из каолина (свечи Шамберлана), инфузорной земли (свечи Беркефельда) и др.

Стерилизуемая жидкость наливается через стерильный фильтр в стерильный приемник, в котором с помощью насоса создается вакуум. Микроорганизмы оседают в порах фильтра благодаря как механической преграде, так и в результате электрической адсорбции (клетки в водной суспензии имеют отрицательный заряд, а фильтры изготовлены из положительно заряженных материалов).