Микробиологическое исследование воды

В воде различных источников водоснабжения содержится значительное количество микроорганизмов. Наряду с постоянными обитателями – микробами-сапрофитами – в загрязненной воде могут длительно выживать и размножаться различные патогенные микроорганизмы, особенно возбудители кишечных заболеваний – тифа, паратифа, дизентерии, холеры и т.д.

В связи с этим вода хозяйственно-питьевого назначения подлежит строгому санитарно-микробиологическому контролю. Санитарно-микробиологический кон- троль воды на пищевых предприятиях проводят согласно графику, один-два раза в месяц, определяя при этом:

1) микробное число – общее количество микроорганизмов в 1 см³ воды;

2) количество санитарно-показательных микроорганизмов – кишечных палочек (Escherichia coli), которые являются прямым показателем фекального загрязнения воды и косвенным санитано-бактериологическим показателем возможности загрязнения ее патогенными микробами. Результаты определения количества кишечных палочек в воде выражают в виде коли-титра и коли-индекса.

Коли-титр – это наименьший объем воды, в котором обнаруживается одна кишечная палочка (выражается в см³).

Коли-индекс – это количество кишечных палочек, содержащихся в 1000 см³ воды.

К питьевой воде, прошедшей очистку, предъявляются следующие санитарно-микробиологические требования: микробное число должно быть не более 100 микробных клеток; коли-титр – не менее 300 см³; коли-индекс – не более трех кишечных палочек.

Пересчет коли-титра по коли-индексу и наоборот производят по следующим формулам:

1000 1000

коли-индекс = ¾¾¾¾¾; коли-титр = ¾¾¾¾¾.

коли-титр коли-индекс

6.2.1 Определение микробного числа

При исследовании водопроводной воды стерильными градуированными пипетками отбирают 1см³ неразведенной воды, вносят в две параллельные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 45-50^оС МПА, быстро перемешивают, вращая чашку по поверхности стола. После застывания среды чашки переворачивают крышками вниз, делают на дне крышки надписи, указывающие номер или название пробы, разведение, дату посева. Посевы культивируют в термостате при 37^оС в течение 24-48ч, а затем подсчитывают выросшие колонии с помощью лупы, учитывая в случае надобности посеянный объем или разведение.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое число, полученное при подсчете колоний на двух параллельных чашках одного из разведений.

6.2.2 Определение бактерий группы кишечной палочки –

показателей фекального загрязнения воды (коли-титра, коли-индекса)

Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) в зависимости от качества воды определяют двумя методами:

а) метод мембранных фильтров (исследуют прозрачную воду – центральных водопроводов, артезианских скважин);

б) метод бродильных проб (исследуют воду, содержащую коллоидные вещества, посторонние примеси, затрудняющие фильтрование, - воду открытых водоемов, питьевую воду на этапах очистки).

6.2.2.1 Метод мембранных фильтров

Сущность метода мембранных фильтров заключается в концентрации бактерий из определенного объема воды на специальных ультрафильтрах – пористых нитроцеллюлозных пленках, подращивание их на среде Эндо (фуксин-сульфитном агаре) в течение 24 часов при 37 ^оС, дифференцировании выросших колоний и последующим подсчетом количества БГКП в 1000 см³ воды. Результат выражают в виде коли-индекса.

При наличии на фильтрах колоний, типичных для БГКП (темно-красных, с металлическим блеском и без него), из нескольких колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных коротких полиморфных палочек ставят оксидазный тест для дифференциации БГКП от водных сапрофитов, имеющих сходную морфологию. В отличие от кишечной палочки рода Escherichia, они обладают ферментом оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола ярко-синего цвета (оксидазоположительные микроорганизмы). БГКП не обладают этим ферментом и считается оксидазоотрицательными.

Материал из колоний, выросших на среде Эндо, снимают бактериологической петлей и наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом с фенилендиаминовым соединением. При положительном оксидазном тесте бумага синеет, что свидетельствует о наличии в воде бактерий, относящихся к семейству Pseudomonadaceae, которые при анализе не учитываются. Отсутствие изменения цвета бумаги в месте нанесения бактериальной массы свидетельствует о присутствии в воде оксидазоотрицательных БГКП, по которым и рассчитывают коли-титр и коли-индекс.

6.2.2.2 Метод бродильных проб

Сущность метода заключается в посеве определенных объемов анализируемой воды, подращиванием при температуре 37^оС в средах накопления (глюкозо- или лактозопептонной средой с индикатором и поплавками для улавливания газообразования) с последующим высевом на среду Эндо, дифференцированием выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1000 см³ воды по специальным таблицам.

При отсутствии роста на среде Эндо, а также при наличии пленчатых, рубчатых, с неровными краями и поверхностью и других не характерных для кишечных палочек колоний получают отрицательный результат.

Если при засеве из флаконов и пробирок, где отмечено помутнение, кислота и газообразование, на среду Эндо выросли темно-красные с металлическим блеском и без него колонии, то их принадлежность к БГКП подтверждается микроскопированием и постановкой оксидазного теста. Наличие в мазках грамотрицательных палочек и отрицательный оксидазный тест позволяет немедленно дать положительный ответ о наличии кишечной палочки в анализируемом объеме воды.