Поиск: Рекомендуем: Почему я выбрал профессую экономиста Почему одни успешнее, чем другие Периферийные устройства ЭВМ Нейроглия (или проще глия, глиальные клетки) Категории: Астрономия Биология География Другие языки Интернет Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Механика Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Транспорт Физика Философия Финансы Химия Экология Экономика Электроника

Главная О нас Популярное ТОП Новые страницы Случайная страница Контакты FAQ ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ Методы количественного определения флороглюцидов и фенологликози- дов в лекарственном сырье. ⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒ Литература Шталь Э. М. Хроматография в тонких слоях. —М-: Мир, 1965. ГЛАВА 6. АНТРАЦЕНПРОИЗВОДНЫЕ И ИХ ГЛИКОЗИДЫ Производные антрацена широко распространены в природе. Они обнаружены в высших растениях, лишайниках, некоторых низших грибах, а также найдены в некоторых насекомых и морских организмах. Около половины известных антраценпроизводных (примерно 100 соединений) выделено из высших растений. Здесь они наиболее часто встречаются в растениях семейств мареновых, гречишных, крушиновых, бобовых, лилейных, зверобойных, вербеновых и др. Растения, содержащие антраценпроизводные, издавна находят применение для лечения различных заболеваний кожи, а также в качестве слабительных средств; получены препараты нефролити- ческого действия и антибиотики. Некоторые растения известны как источники природных красителей. Антраценпроизводными называют группу природных соедине­ний, в основе которых лежит ядро антрацена различной степени окисленности по среднему кольцу (I, кольцо В): § 1. Классификация   В зависимости от структуры углеродного скелета природные антраценпроизводные можно разделить на 3 основные группы: 1) соединения, в основе которых лежит 1 ядро антрацена (мономеры); 2) соединения с 2 ядрами антрацена (димеры); 3) конденсированные антраценпроизводные. I. Первая группа соединений в зависимости от степени окислен­ности основного ядра в свою очередь подразделяется на 2 под­группы: 3» 67 а) окисленные формы — в их основе лежит антрахиноновое ядро (II); б) восстановленные формы — производные антранола (III), антрона (IV), оксиантрона (V): ОН ./\А/Ч кАА/ ш о S о Ч/\/\/ г/он н IV V   Большинство природных производных антрацена относится к антрахиноновому типу. Внутри подгруппы соединения разделяются в зависимости от характера и расположения заместителей. В качестве заместителей антраценпроизводные содержат гидроксильные и метоксильные группы, а также метильную группу, которая может быть окислен­ной до спиртовой, альдегидной и кислотной. Наиболее известны производные 1,8-диоксиантрахинона, или хризацина (VI). К их числу относятся соединения, названные эмо- динами—франгулаэмодин (VII), алоэ-эмодин (VIII) и другие аналогичные им соединения: реин (IX), хризофановая кислота (X): но о ОН но о он I Ml I 111 A/V\ /\/\/\ ноАА^ЛАсн, 'чАу^Чн.он о о НО О ОН IX VII VIII но о он АЛЛ ^АД/ХсНз о X Указанные соединения и их гликозиды содержатся в коре кру­шины ольховидной, корне ревеня тангутского, листьях кассии остролистной и узколистной, листьях алоэ, плодах жостера и дру­гих видах лекарственного сырья, обусловливая их слабительное действие. но о он VI Производные антрахинона, содержащие оксигруппы в а- и (J-no- ложениях,—ализарин (XI), луцидин, пурпурин, рубиадин и их гликозиды — обладают нефролитическим действием и с успехом применяются для лечения почечнокаменной болезни! О ОН он о   XI Восстановленные формы антраценпроизводных в своей основе содержат ядро антранола, антрона, оксиантрона. Эти соединения очень лабильны и легко окисляются кислородом воздуха до соот­ветствующих антрахинонов. В связи с этим они изучены меньше. Выделены фисцион-антранол (XII), франгулаэмодин-антрон (XIII), алоэ-эмодин-антрон и ряд других соединений: но он он но о он аАА УЧ/\/\ XII н H XIII При лечении различных кожных заболеваний (экзема, Псориаз и др.) применяется препарат хризаробин, получаемый из южно­американского дерева Andira araroba; основной компонент хриза- робина — 3-метил-1,8-диоксиантранол. Это соединение может быть получено также восстановлением хризофановой кислоты. II. Димеры антраценпроизводных обнаружены в высших расте­ниях, лишайниках и несовершенных грибах. В основе соединений этой группы встречаются как окисленные, так и восстановленные формы. Восстановленные формы соединены в димеры, как правило, по среднему кольцу (в 7-положении), антрахиноны могут быть со­единены в а- и ^-положениях. Молекула димерного соединения мо­жет быть симметрична, т. е. состоять из одинаковых остатков, или несимметрична — из разных. В высших растениях чаще встреча­ются димеры восстановленных форм: эмодиндиантрон (XIV), хри- зофанолдиантрон (XV), пальмидин В и др., выделенные из различных видов рода жостер; сеннидин А (XVI) и др. — из видов кассии. В кассии содержатся также и димеры антрахинона — вассианин (XVII), кассиамин: НО О ОН НО О ОН I 1 I II! /\/\/Ч /\/\/\ I Н0/\/\/\/\сНз \/\/\/-\сН3 Л/СНз У\/\/\/СНз I Г I i 9 ' НО О ОН НО О ОН XIV XV но о он I II II I HO/VN/^NCH, XVI I» I но о он но о он НзС\У\/\/ч 1 11 1 но о он   XVII Димеры антрахинона наиболее широко распространены в несо­вершенных грибах (различные плесени родов Penicillium, Asper­gillus). III. Конденсированные антраценпроизводные выделены из раз­личных видов зверобоя — гиперицин (XVIII) и др., из гречихи —• фагопирин: но о он I I I /\/\/\ I I II I нп/Ч/\/\/\гн. но о он XVIII   Препарат зверобоя — новоиманин, содержащий конденсированные антраценпроизводные, обладает высокой антибактериальной актив­ностью. Антраценпроизводные в растениях встречаются как в свободном виде, так и в виде гликозидов, которые называются антрагликози- дами. В качестве агликонов в составе антрагликозидов встреча­ются все группы антраценпроизводных, за исключением диантра- хинонов. Сахарный компонент может быть представлен глюкозой, Ё амнозой, ксилозой, арабинозой. Большинство антрагликозидов — •-гликозиды; при этом сахарный компонент может быть присоеди­нен к агликону в а- и р-положениях. Наиболее известные антра- гликозиды лекарственных растений: руберитриновая кислота (XIX), луцидинпримверозид, выделенные из марены красильной; хризо- фанеин (XX), глюко-алоэ-эмодин (XXI), глюкореин — из видов ревеня, щавеля и др.; франгуларозид (XXII) — из крушины; сеннозиды А и В (XXIII) — из кассии и т. д. Обнаружены также С-гликозиды [барбалоин (XXIV) и др.], выделенные из видов алоэ:   О—Кс—О-Гл О ОН I1 I - II ll I "VX/V II о   НО О О—Г л /\ЛА о I и I I :н9 XX НО он он I 1 I II I I XIX Гл—О О ОН 1)1! о XXI Гл—о о он AAA   Гл—О—Рамн—| Гл—О—Рамн—О. н, СН3 \/\/ч/ч/ I f A/WC00H Hci dm XXII л о dm XXIII он Гл   Но о он I /\/\/Л \/\/\/-\сн2он Н/хГл XXIV § 2. Физико-химические свойства Антраценпроизводные — кристаллические вещества желтого, оранжевого или красного цвета. Свободные агликоны хорошо растворяются в этиловом эфире, хлороформе, бензоле и других органических растворителях; в воде не растворяются, но хорошо растворимы в водных растворах щелочей за счет образования фено­лятов. В форме гликозидов антраценпроизводные хорошо растворя­ются в воде, еще лучше — в щелочи, хуже — этаноле и метаноле; нерастворимы в органических растворителях — бензоле, этиловом эфире, хлороформе и др. При нагревании до 210 °С антраценпроизводные сублимируются. Большинство антраценпроизводных флуоресцирует при воз- ждении УФ и сине-фиолетовым светом. При этом характер флуо-:ценции зависит как от степени окисленности основного ядра, к и от числа и расположения заместителей: антрахиноны харак- ризуются, как правило, оранжевой, розовой, красной и огненно- асной флуоресценцией; антроны и антранолы — желтой, голу- й, фиолетовой. § 3. Методы выделения и идентификация Для выделения антрагликозидов растительный материал экстра- руют водой, спиртами (этиловым, метиловым) или водно-спирто- ши смесями. Агликоны лучше растворимы в органических раство- ггелях, но растворимость их избирательная. Для получения агли-)нов гликозиды в растительном материале*подвергают гидролизу, 1гревая с кислотой, или энзиматическому расщеплению, после:го извлекают свободные агликоны этиловым эфиром, бензолом ни хлороформом. Антрахиноны, имеющие в качестве заместителя эрбоксильную группу, растворяются в водных растворах карбо- атов и гидрокарбонатов щелочных металлов и их гидроксидов образованием солей. Антрахиноны с гидроксилом в (J-положении г взаимодействуют с гидрокарбонатами, а с водными растворами арбонатов и гидроксидов щелочных металлов дают феноляты. 1ещества, содержащие а-гидроксил, образуют феноляты только растворах щелочей. Различие свойств оксигрупп в а- и Р-положе- иях объясняется тем, что а-гидроксилы образуют внутримолеку- ярную водородную связь с соседней карбонильной группой и по­тому обладают меньшей реакционной способностью:   На различии свойств антраценпроизводных в зависимости от характера и расположения заместителей основаны все классические летоды разделения этих соединений. Основным методом разделения штраценпроизводных является хроматографический. В качестве сорбента при этом наиболее успешно применяется полиамид; хоро­шие результаты дает также силикагель. Растворителями при раз- целении антрагликозидов служат главным образом водно-спиртовые смеси, а при разделении агликонов — бензол, толуол, хлороформ. Идентификация проводится с помощью химических и физических методов, которые дополняют друг друга. Из физических методов наиболее полную информацию дают спектральные, которые позво­ляют установить класс соединений, а также наличие и характер заместителей. УФ спектроскопия широко используется в структурных иссле­дованиях антраценпроизводных. В УФ области эти соединения имеют несколько максимумов поглощения выше 200 нм. Каждый тип за­мещения характеризуется определенным набором спектральных характеристик, что используется при установлении структуры новых соединений этой группы (рис. 12). 200 250 300 350 т Ш 500Я,нм Рис. 12. УФ спектр реина ИК спектроскопия нашла наи­более широкое применение при изучении структуры антраценпро­изводных, так как ИК спектры этих соединений специфичны и мо­гут быть использованы для иден­тификации. Наличие ароматичес­ких колец в антрахиноне обуслов­ливает появление интенсивной по­лосы в области 1578—1596 см-1 (рис. 13). Производные антрахи- нона, не имеющие а-гидроксилов, дают одну сильную полосу в обла­сти 1678—1653 см-1, обусловленную карбонильными группами хиноидного кольца. а-Гидроксилы харак­теризуются широкой полосой с центром 2900 см"1, что объясняется образованием внутримолекулярной водородной связи между а-гиД- роксилами и хиноидным карбонилом. (З-Гидроксильные группы мо­гут быть определены по появлению полосы в области 3400—3150 см-1, 3800 3200 2600 2000 1800 №0 1W Рис. 13. ИК спектр реина 1200 1000 v см'1   что типично для оксигрупп, способных образовывать межмолеку­лярные водородные связи. У производных антрона свободная кар­бонильная группа хиноидного кольца поглощает в области 1654 см-1. Таким образом, при изучении структуры антраценпроизводных с помощью инфракрасной спектроскопии используют главным об­разом частоту поглощения отдельных групп и заместителей соеди­нения. ЯМР спектроскопия также находит применение для изучения:труктуры антраценпроизводных. Характер спектра ядерного маг­нитного резонанса в основном определяется числом и положением ароматических протонов, а также положением и строением водород- содержащих заместителей. § 4. Качественное определение Методики качественных реакций. 1. Реакция со щелочью. 0,2 г измельченного растительного материала кипятят в течение 2 мин с 5 мл 10%-ного NaOH. После остывания смесь разбавляют 5 мл воды и фильтруют. 3 мл фильтрата помещают в пробирку, добавляют 3 мл 10%-ной НС1 и 10 мл бензола. Осторожно перемешивают и после расслоения жидкости сливают бензольный слой, фильтруя его через небольшой комочек ваты. Фильтрат встряхивают с 3 мл 10%-ного раствора аммиака. При наличии антраценпроизводных аммиачный слой принимает вишнево-красное (1,8-диоксиантрахиноны), пурпурное (1,4-диокси- антрахиноны) или фиолетовое (1,2-диоксиантрахиноны) окрашива­ние. Сущность реакции в следующем: при кипячении растительного материала со щелочью происходит гидролиз-антрагликозидов с об­разованием свободных агликонов. Одновременно антрон- и антра- нолпроизводные окисляются до антрахинонов. Образовавшиеся оксиантрахиноны за счет фенольных гидроксилов дают феноляты, растворимые в воде. При подкислении водно-щелочного извлечения диссоциация фенольных гидроксилов подавляется и соединения становятся липофильными, в результате чего при встряхивании с бензолом они из водного слоя переходят в бензол; бензольный слой при этом принимает желтую окраску оксиантрахинонов. При встряхивании бензольного слоя с раствором аммиака вновь проис­ходит образование фенолятов антрахинонов и они переходят в ам- "миачный слой. Феноляты оксиантрахинонов имеют яркий вишнево- красный, пурпурный или фиолетовый цвет в зависимости от поло­жения оксигрупп. 2. Сублимация антраценпроизводных. На дно сухой пробирки помещают 0,2 г измельченного растительного материала и осто­рожно нагревают, держа пробирку почти горизонтально. Темпе­ратура сублимации 210 °С, время сублимации 10 мин. Сублимат конденсируется на холодных участках пробирки в виде желтых капель или желтых игольчатых кристаллов. После остывания пробирки к сублимату прибавляют 1 каплю 5%-ного NaOH в этиловом спирте; появляется яркое красное или фиолето­вое окрашивание в зависимости от состава антраценпроизводных (образование фенолятов). Сущность реакции: содержащиеся в ра­стительном материале антрагликозиды при высокой температуре расщепляются с образованием свободных агликонов; одновременно производные антрона и антранола окисляются до антрахинонов, которые возгоняются. Таблица 1     Хроматограмма после проявления КОН   № п/п №     Название вещества рисунков пятна   флуоресценция в   цвет пятна в       видимом свете Уф свете   Рис. 14   Бесцветный Светло-зеленая       > Слабо-фиолетовая       » Ярко-фиолетовая       Слабо-желтый Слабо-оранжевая       Красный Оранжево-красная       Светло-желтый Светло-голубая       Слабо-желтый Ячко-фиолетовая       Темно-желтый Те шо-коричневая       Серо-коричневый Темно-серая       Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин Рис. 15 о Бесцветный Слабо-оранжевая     £ 3 Слабо-желтый Слабо-темно-фиоле­         товая       » Светло-зеленая       Слабо-красный Фиолетовая       Красный Оранжево-красная Антрагликозиды     Слабо-красный Фиолетово-красная »     Слабо-желтый Слабо-оранжевая       Темно-желтый Темно-коричневая       Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин Рис. 16   Розоватый Оранжево-красная       Слегка сероватый Светло-зеленая     ЗГ Красный Ярко-оранжевая ГлюкофранТ'улин     > Красно-оранжевая       Бесцветный Светло-зеленая       Розовый Розовая       Оранжевый Оранжево-красная Франгулин     Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин Рис. 17 О Ярко-желтый Темно-желтая     Z > Бесцветный > Светло-зеленая       Слабо-желтый Красная       » Розовая       Слабо-оранжевый Оранжево-красная Франгулин     Слабо-желтый Желтая       Красный Фиолетово-красная Франгулаэмодин     Слабо-зеленый Розовая Хлорофилл Рис. 18   Оранжевый Оранжевая Луцидинпримве-         розид     Красный Огненно-красная Руберитриновая ки­         слота

Методики хроматографического определения. При анализе ле­карственного растительного сырья, содержащего антраценпроиз­водные, используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента.

При исследовании состава антрагликозидов готовят водные извлечения; при анализе состава агликонов сырье экстраги­руют бензолом, этиловым или метиловым спиртом, которые при нагревании более или менее удовлетворительно экстрагируют как свободные антраценпроизводные, так и их гликозидные формы.

0,3 г измельченного растительного материала нагревают с 3 мл этилового спирта в течение 5 мин, доводя до слабого кипения. После остывания фильтруют. 0,1 мл фильтрата наносят на линию старта и хроматографируют в системе этилацетат — метиловый спирт — вода (100: 17: 13) на пластинках «Силуфол». Время хроматогра- фирования 30—40 мин. Хроматограмму высушивают на воздухе, обрабатывают 5%-ным NaOH в этиловом спирте и рассматривают при дневном свете и УФ свете до и после обработки. Одновременно хроматографируют стандарт «свидетель», нанося его раствор рядом с исследуемым извлечением. По величине R_f, характеру окраски и флуоресценции пятен идентифицируют антраценпроизводные ис­следуемого сырья (рис. 14—19). В табл. 1 даны пояснения к рисун­кам.

О

о'о'оооооо оо

|CD0 оо оо О оо

J^O, <*> N <0 ^ ^ ^^

Методики хроматографического определения. При анализе ле­карственного растительного сырья, содержащего антраценпроиз- водные, используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента.

При исследовании состава антрагликозидов готовят водные извлечения; при анализе состава агликонов сырье экстраги­руют бензолом, этиловым или метиловым спиртом, которые при нагревании более или менее удовлетворительно экстрагируют как свободные антраценпроизводные, так и их гликозидные формы.

0,3 г измельченного растительного материала нагревают с 3 мл этилового спирта в течение 5 мин, доводя до слабого кипения. После остывания фильтруют. 0,1 мл фильтрата наносят на линию старта и хроматографируют в системе этилацетат — метиловый спирт — вода (100: 17: 13) на пластинках «Силуфол». Время хроматогра- фирования 30—40 мин. Хроматограмму высушивают на воздухе, обрабатывают 5%-ным NaOH в этиловом спирте и рассматривают при дневном свете и УФ свете до и после обработки. Одновременно хроматографируют стандарт «свидетель», нанося его раствор рядом с исследуемым извлечением. По величине R_f, характеру окраски и флуоресценции пятен идентифицируют антраценпроизводные ис­следуемого сырья (рис. 14—19). В табл. 1 даны пояснения к рисун­кам.

ри исследовании антрагликозидов хроматографирование ведут стеме этилацетат — муравьиная кислота — вода (10: 2: 3); из свободных антраценпроизводных ведут в толуоле (хромато- ия на бумаге).

А — этанольное извлечение корней и корневищ марены красильной; Б — рубери- триновая кислота; В — лу- цидинпримверозид; Г — али- аарнн

Рис. 19. Схема хромато- граммы антраценпроиз­водных кассии остроли­стной:

А — этанольное извлечение из листьев кассии остро­листной; Б — реин

§ 5. Количественное определение

Большинство методов количественного определения антра- производных предусматривает определение суммы свободных иантрахинонов после предварительного гидролиза антраглико- ов.

В настоящее время наиболее широко применяется колориметри- кий метод, предложенный Аутергофом, в различных модифика- х. Метод принят ГФ X для определения антраценпроизводных екарственном растительном сырье. Метод ГФ X с некоторыми мнениями (в целях безопасности работы этиловый эфир заме- [ хлороформом) приводится ниже.

Методика количественного определения суммы антраценпроиз- ных (свободных и связанных в виде гликозидов). 0,05 г (точная 1еска) порошка исследуемого сырья помещают в круглодонную колбу с нормальным шлифом вместимостью 100 мл, соединяют с обратным холодильником и подвергают гидролизу путем кипяче­ния в течение 15 мин с 7,5 мл ледяной уксусной кислоты (при иссле­довании коры крушины ольховидной, корня ревеня) или с 7,5 мл ледяной уксусной кислоты и 1 мл концентрированной НС1 (при исследовании листьев сенны, корневища и корня марены). Во время нагревания колбу слегка покачивают, чтобы не допустить приго- рания растительного материала. После остывания в колбу, не сни­мая холодильника, прибавляют 30 мл хлороформа и кипятят на водяной бане в течение 15 мин для экстрагирования свободных антраценпроизводных. После остывания (колбу вместе с холо­дильником снять с водяной бани) хлороформное извлечение фильт­руют через вату в делительную воронку вместимостью 300 мл. Колбу дважды ополаскивают хлороформом (по 10 мл) и, пропуская через эту же вату, выливают в делительную воронку; вату дважды промывают хлороформом (по 5 мл).

К хлороформному извлечению в делительной воронке прибав­ляют 40 мл воды и, слегка покачивая воронку, добиваются пере­мешивания слоев жидкости, чтобы отмыть избыток кислоты. После полного расслоения нижний, хлороформный, слой сливаю?" в ко­ническую колбу вместимостью 250 мл, а водный слой отбрасывают. Из колбы хлороформное извлечение вновь переносят в делитель­ную воронку и приливают туда щелочно-аммиачного раствора (5%-ного NaOH, содержащего 2%-ный аммиак), предварительно ополоснув им колбу. Покачивая делительную воронку в виде «8», добиваются тщательного перемешивания слоев жидкости, чтобы извлечь антраценпроизводные щелочно-аммиачным раствором из хлороформа. Через 5 мин делительную воронку оставляют в покое, и после полного расслоения жидкости сливают нижний, хлороформ­ный, слой в коническую колбу; красный или фиолетовый, прозрач­ный водно-щелочной слой сливают в мерную колбу вместимостью 250 мл. Хлороформный слой вновь переносят в делительную во­ронку, приливают туда 20 мл щелочно-аммиачного раствора, пред­варительно ополоснув им колбу, и вновь извлекают антраценпроиз­водные, как описано выше, до тех пор, пока водно-щелочной слой перестанет окрашиваться.

Собранные водно-щелочные извлечения доводят в мерной колбе до метки щелочно-аммиачным раствором и перемешивают. 25 мл полученного окрашенного раствора помещают в круглодонную колбу с нормальным шлифом, соединяют с обратным холодильни­ком и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После остывания измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектро- колориметре с зеленым светофильтром (А, = 525 нм) в кювете тол­щиной слоя 10 мм (нулевую точку устанавливают по дистиллиро­ванной воде). При получении слишком интенсивной окраски рас­твор перед колориметрированием разбавляют щелочно-аммиачным раствором.

Концентрацию антраценпроизводных в колориметрическом рас­творе, выраженную в истизине, определяют по калибровочному афику, построенному по хлориду кобальта (СоС1₂-6Н₂0). Для >го готовят от 0,2 до 3,0%-ные растворы хлорида кобальта (10— растворов равномерно возрастающей концентрации) и измеряют оптическую плотность на этом же фотоэлектроколориметре (ка- бровочный график студенты получают готовым). По оси ординат кладывают значение оптической плотности, а оси абсцисс — нцентрацию антраценпроизводных в миллиграммах на 100 мл, ходя из того, что 1 %-ный хлорид кобальта по оптической плот- сти соответствует 0,36 мг истизина в 100 мл щелочно-аммиачного створа. Приготовление эталонных растворов и определение их тической плотности производят не менее 3 раз. Процентное содержание антраценпроизводных в пересчете на солютно сухое сырье вычисляют по формуле

аУК

^Х тЮ (100 — ш) '

е а — концентрация антраценпроизводных в мг на 100 мл, най- нная по калибровочному графику; V — первоначальный объем елочного извлечения, мл; т — масса навески сырья, г; w — по­ря в массе сырья при высушивании, %; К — коэффициент разбав- ния раствора перед колориметрированием. Методика количественного определения антрагликозидов. Около 5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу fecTiiMOCTbK) 150 мл, приливают 100 мл воды, перемешивают 10 мин нагревают с обратным холодильником в кипящей водяной бане течение 15 мин при периодическом перемешивании (покачивании), осле охлаждения под струей воды смесь перемешивают, дают 'стоиться 10 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр, i мл полученного извлечения помещают в колбу вместимостью Ю мл, прибавляют 2,5 мл 50%-ной H₂S0₄ и нагревают в кипящей >дяной бане при периодическом перемешивании в течение 30 мин. осле охлаждения раствор переносят в делительную воронку вме- гимостью 300 мл, а колбу ополаскивают 10 мл воды и 60 мл хлоро- эрма. Промывные воды и хлороформ присоединяют к основному звлёчению в делительной воронке и- взбалтывают в течение 5 мин. осле отстаивания хлороформный слой отделяют, а извлечение)балтывают с новой порцией (30 мл) хлороформа. К объединенному чороформному извлечению прибавляют 50 мл щелочно-аммиач- эго раствора и осторожно взбалтывают в течение 5 мин. После гстаивания прозрачный водный слой сливают в мерную колбу яестимостью 100 мл, доводят щелочно-аммиачным раствором до етки и перемешивают. 25 мл полученного раствора помещают коническую колбу с обратным холодильником и нагревают в кипя- 1ей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения жидкость оличественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и оводят объем щелочно-аммиачным раствором до метки.

Оптическую плотность раствора измеряют с помощью спектро- отометра при X = 525 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, исполь- уя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор.

Концентрацию производных антрацена в растворе, выражен­ную в хризофановой кислоте, определяют по калибровочному гра­фику, построенному по растворам хлорида кобальта. Процентное содержание антраценпроизводных (в пересчете на антрагликозиды) х вычисляют по формуле

_ аЮО-100-50-100-100-1,59 _ а8-1,59 ^Х~ 1000- 1000/П25 ■ 25 (100 — w) ~m(100 — w) '

где а — концентрация антраценпроизводных испытуемого раство­ра, найденная по калибровочному графику, мг/л; т — масса на­вески сырья, г; до — потеря в массе сырья при высушивании, %; 1,59 — отношение средней массы антрагликозидов к средней массе агликонов.

Для определения отдельных соединений антраценпроизводных пользуются хроматоспектрофотометрическими методами. Из расти­тельного материала антраценпроизводные экстрагируют в виде гликозидов или свободных агликонов и разделяют с помощью хроматографии на бумаге или в тонком слое силикагеля. Для раз­деления антраценпроизводных, извлекаемых метиловым спиртом (антрагликозиды и свободные агликоны), предложен метод тонко­слойной хроматографии на силикагеле марки КСК в системе раство­рителей бензол — метиловый спирт (4: 1). Пятна антраценпроиз­водных на хроматограмме отмечают в УФ свете и собирают каждое пятно на стеклянный фильтр № 4. Фильтр промывают 0,5 н. NaOH, количественно переносят в мерные колбы емкостью 50 мл и дово­дят объем до метки 0,5 н. NaOH. Через 20 мин определяют оптиче­скую плотность растворов по максимуму поглощения в УФ области.

Реактивы и оборудование: хлороформ; толуол; метиловый спирт (метанол); этиловый спирт (этанол); этилацетат; бензол; муравьиная кис­лота; уксусная кислота (лед.); НС1 (конц. и 10%-ная); H₂S0₄ (50%-ная); NaOH (0,5 н. и 10%-ный); NaOH (5%-ный в этиловом спирте); аммиак (10%-ный); ще- лочно-аммиачный раствор (NaOH 5%-ный, содержащий 2%-ный аммиак); ко­бальта хлорид; магния ацетат (1%-ный раствор в этиловом спирте).

Пластинки «Силуфол».

Хроматографическая бумага «С»; фотоэлектроколориметр; спектрофотометр; УФ лампа; колбы конические вместимостью 50, 100, 250 мл; колбы круглодонные с нормальным шлифом вместимостью 50, 100 мл; колбы мерные вместимостью 25, 50, 100, 250 мл; воронки делительные вместимостью 100, 250, 300 мл, холодиль­ники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; камеры хрома- тографические для ТСХ; камеры хроматографические для БХ; пробирки стек­лянные; штативы для делительных воронок; фильтры стеклянные № 4, воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; штативы лабораторные, плитки электрические; бани водяные лабораторные; весы лабораторные аналитические.

Вопросы для подготовки

1. Какие природные вещества называют антраценпроизводными?

2. Что лежит в основе классификации антраценпроизводных, на какие груп­пы их разделяют?

3. В каком виде антраценпроизводные находятся в растении?

4. Какими реакциями можно открыть антраценпроизводные в раститель­ном сырье?

5. Что происходит с антраценпроизводными и их гликозидами при нагре­вании растительного сырья?

6. Чем обусловлена растворимость свободных антраценпроизводных в вод» [X растворах щелочи?

7. Какое свойство антраценпроизводных можно использовать для установ- ния их локализации в тканях растения?

8. Какими физико-химическими свойствами характеризуются свободные траценпроизводные и их гликозиды?

9. В чем сущность метода количественного определения антраценпроиз- дных в лекарственном растительном сырье?

10. Какие реакции можно использовать для проявления антраценпроизвод- IX на хроматограммах?

Литература

Георгиевский В. П., Казаринов Н. А., Каррыев М. О. Физико-химические тоды анализа биологически активных веществ растительного происхожде- [я. — Ашхабад: Ылым, 1976.

Дата добавления: 2016-11-18; Мы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1147 | Нарушение авторских прав

Лучшие изречения:

Если президенты не могут делать этого со своими женами, они делают это со своими странами © Иосиф Бродский
==> читать все изречения...

4567 - | 4368 -